Species and serovars of enteropathogenic agents associated with acute diarrheal disease in Rosario, Argentina

We report the most frequent species and serovars of enteropathogenic organisms in Rosario from 1985 to 1993. Enteropathogenic Escherichia coli was the most prevalent agent affecting 144/570 (25.2%) children; 0111 represented 41.8%, 055: 13.6%, 0119: 12.7%. Among enterotoxigenic E. coli (ETEC) the most frequent were ETEC-ST 0128:H21 and 0153:H45. Shigella spp were isolated in 8.8%; S.flexneri: 7%, principally type 2 (59.5%); S. sonnei: 1.6%, and S. dysenteriae type 2: 0.2%. Campylobacter spp were found in 6.1% of patients; C.jejuni: 4.6%; C. coli: 1.4% and C. lari: 0.2%; except groups 0 13,50 and 0 4 (2 cases each), no predominant serogroups were found. Salmonella was isolated in 2.8% of cases, being the predominant serovar S. typhimurium until 1986, but a dramatically increase of cases due to S. enteritidis was observed since 1987. There was 1.9% of Aeromonas spp and 2 cases due to Vibrio cholerae non 0-1. No Yersinia was found. In patients with gastroenteritis due to Shigella, Campylobacter, Salmonella, or EPEC as the unique pathogen, leukocytes were observed in the faeces in 70%, 50%, 20%, and 10% of cases respectively.

Salmonelose humana e animal em Araraquara, S. Paulo: prevalência de Shigella em casos humanos

Admitida uma baixa freqüência de Salmonella com base em verificações anteriores em casos de diarréia aguda na cidade de Araraquara, S. Paulo, realizou-se uma investigação com um esquema ampliado para o isolamento de Salmonella a partir de 47 casos de gastroenterite infantil, 51 amostras de fezes de animais e 50 amostras de carnes e vísceras de animais destinados a alimentação. Foram isoladas Salmonella em 6,3% dos casos de gastroenterite, 5,8% de fezes de animais e 8,0% de amostras de alimentos, nesse último caso verificando-se a contaminação exclusivamente em fígado de porco, senão negativos todos os resultados de carne e vísceras de bovinos. Os sorotipos isolados corresponderam, em ordem decrescente de freqüência a S. anatum, S. derby e S. daytona. Nas gastroenterites infantis a freqüência de Shigella (12,7%) foi duas vezes superior à de Salmonella (6,3%).

Antagonistic activity expressed by Shigella sonnei: identification of a putative new bacteriocin

Bacteriocins are antibacterial, proteinaceous substances that mediate microbial dynamics. Bacteriocin production is a highly disseminated property among all major lineages of bacteria, including Shigella. In this paper, we addressed the purification and characterisation of a bacteriocin produced by a Shigella sonnei strain (SS9) isolated from a child with acute diarrhoea. The substance was purified through ammonium-sulphate precipitation and sequential steps of chromatography. The intracellular fraction obtained at 75% ammonium sulphate maintained activity following exposure to pH values from 1-11 and storage at -80ºC for more than two years and was inactivated by high temperatures and proteases. The molecular mass of the purified bacteriocin was determined by mass spectrometry to be 18.56 kDa. The N-terminal sequence of the bacteriocin did not match any other antibacterial proteins described. A putative new bacteriocin produced by S. sonnei has been detected. This bacteriocin may represent a newly described protein or a previously described protein with a newly detected function. Considering that SS9 expresses antagonism against other diarrhoeagenic bacteria, the bacteriocin may contribute to S. sonnei virulence and is potentially applicable to either preventing or controlling diarrhoeal disease.

Pesquisa de enterobacteriáceas e enterovírus em crianças normais e com quadros diarréicos agudos

Num grupo de 263 crianças de 0 a 24 meses de idade, atendidas de outubro de 1963 a setembro de 1964 no Centro de Saúde da Lapa, na Capital de São Paulo, foram feitos exames de fezes para a pesquisa de Escherichia coli, do grupo da gastroenterite infantil, Shigella, Salmonella, poliovírus, vírus Coxsackie e vírus ECHO. O agente mais freqüentemente isolado foi o vírus da poliomielite (15,97% de positividade), seguindo-se-lhe a Escherichia coli G.E.I. (10,65%), Shigella (9,51%), vírus Coxsackie (7,22%), Salmonella em 3,04% dos casos e vírus ECHO no mesmo percentual. Em 16,22% das 111 que apresentaram resultado positivo, o exame revelou a presença de dois ou mais agentes. Os agentes acima referidos foram isolados de 42,21% da totalidade das crianças examinadas. Dentre as 167 que apresentavam diarréia, a porcentagem de positividade chegou a 47,90%, e nas 96 que nao a referiam, desceu a 32,29%. Sòmente em relação às shigelas foi possível evidenciar associação entre isolamento de microrganismos e quadro diarréico. Para a E. coli 0111, salmonelas e vírus Coxsackie A, os resultados foram apenas sugestivos desta associação, e para os demais agentes não houve evidência alguma favorável à mesma.

Identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicas em amostras de fezes, por reação de imunofluorescência direta

Foi realizado diagnóstico etiológico de casos de diarréia aguda em 121 pacientes internados na Clínica Pediátrica do Hospital da Santa Casa de São Paulo, Brasil. Foram utilizados os métodos bacteriológico clássico e de reação de imunofluorescência direta para a identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicas: para estudo da sensibilidade das cepas de Escherichia coli isoladas, a diferentes antibióticos, foi usado o método de Concentração Inibitória Minima (CIM). Dos 56 casos positivos, 89,3% correspondiam a diferentes sorotipos enteropatogênicos de Escherichia coli, quando utilizada a técnica de imunofluorescência direta. O método bacteriológico clássico revelou ainda, nos 121 casos examinados, 4 cepas de Salmonella e 2 de Shigella. No estudo da CIM verificou-se maior sensibilidade das cepas de Escherichia coli enteropatogênicas estudadas à Gentamicina e Amikacina, do que aos outros antibióticos.

Hygiene habits and carriers in families with a child who has had typhoid fever

The relationship between asymptomatic shedding of bacterial enteropathogens and the hygiene habits of families who have had a child with typhoid fever (TF) are investigated. The sample was made up of 80 families: 40 families in which one child had had TF (Group A) and 40 in which no children or either of the parents had had a history of TF (Group B). In each group 20 families belonged to a low socieconomic status (SES) and 20 to a high SES. A structured interview was used to evaluate the SES and the hygiene habits of the child; observations were made to measure the hygiene habits of the family (toilet, kitchen and food preparation) and bacteriological studies (fecal samples and hand markers). Results show that carriers were more frequent in Group A than in Group B. The bacterial species found were significantly more numerous in Group A than in Group B (fecal samples: E. coli, the classic serotypes, Shigella ssp, and hand markers: E. coli). Families of Group A had higher carriage rates than those of Group B. Finally there exists a significantly higher association between inadequate hygiene habits and carrier families. These results show the need to teach specific habits of proper hygiene to the entire population, because the fact of belonging to the high SES does not in itself preclude inadequate hygiene habits.

Identificación y tipificación de biotipos y serotipos de Yersinia enterocolitica

OBJETIVO: Conocer la existencia de Yersinia enterocolitica en suínos visiblemente sanos y sacrificados para el consumo humano. MÉTODOS: Fueron estudiadas 100 muestras de tejido linfático obtenidas en el momento del sacrifício, en un matadero del Estado de México. Fueron realizados muestreos pilotos de 20 casos, de los cuales 20% fueron positivos, permitiendo obtener una muestra estudiada (n=100). Las muestras colectadas de tejido linfático fueron acondicionadas para el aislamiento de Yersinia enterocolitica en caldo de Rappaport y en medio de cultivo de Salmonella-Shigella y MacConkey. Las identificaciones fueron efectuadas por medio de pruebas bioquímicas y serológicas, utilizándose en el caso los antisueros O:3, O:8 y O:9 para la biotipificación correspondiente. RESULTADOS: Fueron obtenidos 22 aislamientos tipificándose 8 serotipos pertenecientes al O:3 y 8 al O:9 correspondientes al biotipo 1; y, en 6 muestras no fue posible la serotipificación. No se encontró en el total de los aislados el serotipo O:8. CONCLUSIONES: En base en la metodología, se registró la presencia de Y. enterocolitica y sus serogrupos en tejido linfático de porcinos por la primera vez en México; esto es importante porque el patógeno y sus serotipos aislados están comprometidos con mayor frecuencia con problemas de salud pública.

EVALUATION OF A RAPID SCREENING ASSAY FOR BACTERIAL IDENTIFICATION (DOT-ELISA) IN FECAL SAMPLES FROM CHILDREN

With the objective of standardizing a Dot Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (Dot-ELISA) to detect antigens of fecal bacterial enteropathogens, 250 children, aged under 36 months and of both sexes, were studied; of which 162 had acute gastroenteritis. The efficacy of a rapid screening assay for bacterial enteropathogens (enteropathogenic Escherichia coli "EPEC", enteroinvasive Escherichia coli "EIEC", Salmonella spp. and Shigella spp.) was evaluated. The fecal samples were also submitted to a traditional method of stool culture for comparison. The concordance index between the two techniques, calculated using the Kappa (k) index for the above mentioned bacterial strains was 0.8859, 0.9055, 0.7932 and 0.7829 respectively. These values express an almost perfect degree of concordance for the first two and substantial concordance for the latter two, thus enabling this technique to be applied in the early diagnosis of diarrhea in infants. With a view to increasing the sensitivity and specificity of this immunological test, a study was made of the antigenic preparations obtained from two types of treatment: 1) deproteinization by heating; 2) precipitation and concentration of the lipopolysaccharide antigen (LPS) using an ethanol-acetone solution, which was then heated in the presence of sodium EDTA

Etiology of acute diarrhea among children in Ribeirão Preto-SP, Brazil

To study the main enteropathogens causing diarrhea in the region of Ribeirão Preto regarding serogroups and serotypes, the feces of 1836 children under 10 years old, from both sexes, attack of acute gastroenteritis, were analysed during a period of 4 years in Adolfo Lutz Institute - Ribeirão Preto, SP. The pathogens identified by standard methods were the following: Escherichia coli, Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., Yersinia spp., and Cryptosporidium spp. Positive samples were 22.8% (419) with 1.7% association of pathogens. Larger isolates were mainly from children 0 to 11 months old. Enteropathogenic E. coli (EPEC) was most frequent (8.7%) with predominance of serogroup O119 (40.2%), followed by Shigella (6.2%), 63.6% of which S. sonnei.

Níveis de sensibilidade de enterobactérias, em particular Salmonella typhi, a rifamicina S.V.

Em face à predominante eliminação biliar da rifamicina S.V. atingindo concentrações muitas vêzes superiores aos níveis séricos obtidos com as doses terapêuticas, e pelo possível interêsse dessa verificação para o tratamento dos portadores biliares crônicos de Salmonella typhi determinou-se a concentração mínima inibitória de 165 estirpes de enterobactérias, incluindo 77 amostras de S. typhi. Foi verificado que a maioria das cepas de Escherichia coli, Shigella e Proteus mirabilis correspondiam a uma concentração inibitória mínima entre 33 a 65 μg/ml. Entre 65 e 128 μg/ml foram determinadas as concetrações inibitórias mínimas da maioria das outras espécies de Proteus, de Providencia e de Klebsiella. Para Salmonella e Enterobacter o limite mínino de sensibilidade foi, em regra, igual ou superior a 128 μg/ml. Diferenças mais acentuadas de comportamento entre as enterobactérias foram observadas quanto à ação bactericida da rifamicidas S.V. De uma maneira geral, para E. coli e Shigella, as concentrações inibitórias mínimas já referidas. Para as espécies de Proteus e Providencia houve variação maior de comportamento, mas tendência a que o efeito bactericidas fôsse encontrado em concentrações que correspondiam a 4 vêzes as bacteriostáticas para as mesmas espécies. Finalmente, de modo pouco feliz para os propósitos visados, em Salmonella, com a inclusão de S. typhi, não foi atingido um efeito bactericida, com as mais altas concentrações usadas as quais corresponderam em média a 6 vêzes as concentrações bacteriostáticas para esse gênero.

Avaliação do poder seletivo do meio de Rappaport para diversas espécies de enterobactérias

Foi feita uma avaliação dos mecanismos de seletividade e inibição do meio de Rappaport em relação a espécies representativas de enterobactérias. O meio hipertônico original, com 3,6% de cloreto de magnésio demonstrou-se inibidor para Salmonella typhimurium, a qual foi ainda inibida à concentração de 3,1%. Não se verificou crescimento de tôdas as espécies de Shigella, a partir da concentração de 1,8%, Escherichia coli a partir de 2,2%, Enterobacter a partir de 3,1% e Proteus mirabilis só com 3,6%. O verde malaquita na concentração original de 0,012% demonstra capacidade de inibição do crescimento de todas as espécies testadas, com a exceção de Enterobacter e S. typhimurium. A substituição do fosfato diácido de potássio pelo correspondente sal de sódio, atenua o poder inibidor do meio para tôdas as espécies bacterianas estudadas. As shigelas revelaram-se as enterobactérias mais sensíveis em relação a êsse meio, sendo igualmente inibidas pelos meios à base do tiosulfado de cálcio ou de magnésio, também inspirados no emprêgo de soluções hipertônicas.

Envolvimento de Aeromonas em surto de doença diarréica aguda em São Bento do Una, Pernambuco

No primeiro semestre de 2004, ocorreu um surto de diarréia em São Bento do Una, Pernambuco, registrando-se 2.170 casos. Nas 582 coproculturas realizadas, 145 (25%) revelaram um enteropatógeno bacteriano, destacando 114 casos (19,5%) com a participação de Aeromonas, representadas por Aeromonas caviae (57/9,8%), Aeromonas veronii biovar sobria (23/3,9%), Aeromonas veronii biovar veronii (15/2,6%) e outras espécies (19/3,2%). Nos 31 episódios restantes (5,3%), foram detectados: V. cholerae O1 Ogawa toxigênico (18/3,1%), Salmonella spp (8/1,4%), Shigella spp (3/0,5%) e Vibrio cholerae não O1/não O139 (2/0,3%).

Novo meio seletivo-indicador para detecção de Aeromonas e Plesiomonas: ágar UNISC

Avaliou-se um novo meio seletivo-indicador (ágar UNISC) para o isolamento de enteropatógenos clássicos e Aeromonas e Plesiomonas shigelloides. A capacidade de fermentação da xilose é indicada pela coloração amarela (fermentadores) ou azul (não fermentadores) que, aliada à prova da oxidase, constitui-se em indicador para a detecção de Aeromonas spp e Plesiomonas shigelloides. A produtividade e seletividade, avaliadas pelos índice de contagem absoluta e índice de contagem relativa indicam-no como uma alternativa aos coprocultivos clássicos porque permite, num só meio, o isolamento de Escherichia coli, Shigella spp, Salmonella spp, bem como, Aeromonas spp e Plesiomonas shigelloides, favorecendo o diagnóstico laboratorial das gastroenterites.

Antimicrobial activity of bergenin from Endopleura uchi (Huber) Cuatrec

Endopleura uchi (Huber) Cuatrec. is an Amazon species traditionally used as treatment for inflammations and female disorders. Bergenin was isolated from ethyl acetate fraction of bark of E. uchi by using column chromatography over sephadex LH-20 and then silica gel 60 flash. Its structure was identified on the basis of its NMR spectra. The antimicrobial activity of bergenin and fractions of methanol extract of E. uchi were evaluated against ATCC microorganisms (Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans, C. guilliermondii, Aspergillus flavus, A. nidulans). Clinically isolated strains of all of these microorganisms, along with C. tropicalis, A. niger, Shigella sonnei, Serratia marcenses and Klebsiella pneumoniae were also evaluated. The growth inhibition caused by bergenin, extracts and fractions of E. uchi against ATCC microorganisms were similar to the inhibition to microorganisms clinically isolated. The ethyl acetate fraction and the isolate bergenin inhibit the growth of the yeasts C. albicans, C. tropicalis, and C. guilliermondii, but present lower activity against filamentous fungi Aspergillus flavus, A. nidulans, A. niger, and did not inhibit the Gram positive and Gram negative bacteria. The activity of the ethyl acetate fraction and bergenin are in agreement wit its high concentration found in bark extract of E. uchi. Moreover, the selective activity against three Candida species helps to understand its traditional use against infections that affect women.

Enterobactérias Patogênicas: seu isolamento das águas superficiais por meio de precipitação química

Enterobacteria of pathogenic group were isolated directly of superficial waters using Alumina Milk as precipitate, being 23 Salmonella, 19 Shigella and 17 Proteus from 18 samples which were collected in brooks and rivers of São Paulo, Brazil.