Retinol-induced changes in the phosphorylation levels of histones and high mobility group proteins from Sertoli cells

Chromatin proteins play a role in the organization and functions of DNA. Covalent modifications of nuclear proteins modulate their interactions with DNA sequences and are probably one of the multiple factors involved in the process of switch on/off transcriptionally active regions of DNA. Histones and high mobility group proteins (HMG) are subject to many covalent modifications that may modulate their capacity to bind to DNA. We investigated the changes induced in the phosphorylation pattern of cultured Wistar rat Sertoli cell histones and high mobility group protein subfamilies exposed to 7 µM retinol for up to 48 h. In each experiment, 6 h before the end of the retinol treatment each culture flask received 370 KBq/ml [32P]-phosphate. The histone and HMGs were isolated as previously described [Moreira et al. Medical Science Research (1994) 22: 783-784]. The total protein obtained by either method was quantified and electrophoresed as described by Spiker [Analytical Biochemistry (1980) 108: 263-265]. The gels were stained with Coomassie brilliant blue R-250 and the stained bands were cut and dissolved in 0.5 ml 30% H2O2 at 60oC for 12 h. The vials were chilled and 5.0 ml scintillation liquid was added. The radioactivity in each vial was determined with a liquid scintillation counter. Retinol treatment significantly changed the pattern of each subfamily of histone and high mobility group proteins.

Effect of medroxyprogesterone acetate on thyrotropin secretion in adult and old female rats

Steroid hormones have been implicated in the modulation of TSH secretion; however, there are few and controversial data regarding the effect of progesterone (Pg) on TSH secretion. Medroxyprogesterone acetate (MPA) is a synthetic alpha-hydroxyprogesterone analog that has been extensively employed in therapeutics for its Pg-like actions, but that also has some glucocorticoid and androgen activity. Both hormones have been shown to interfere with TSH secretion. The objective of the present study was to investigate the effects of MPA or Pg administration to ovariectomized (OVX) rats on in vivo and in vitro TSH release and pituitary TSH content. The treatment of adult OVX rats with MPA (0.25 mg/100 g body weight, sc, daily for 9 days) induced a significant (P<0.05) increase in the pituitary TSH content, which was not observed when the same treatment was used with a 10 times higher MPA dose or with Pg doses similar to those of MPA. Serum TSH was similar for all groups. MPA administered to OVX rats at the lower dose also had a stimulatory effect on the in vitro basal and TRH-induced TSH release. The in vitro basal and TRH-stimulated TSH release was not significantly affected by Pg treatment. Conversely, MPA had no effect on old OVX rats. However, in these old rats, ovariectomy alone significantly reduced (P<0.05) basal and TRH-stimulated TSH release in vitro, as well as pituitary TSH content. The results suggest that in adult, but not in old OVX rats, MPA but not Pg has a stimulatory effect on TSH stores and on the response to TRH in vitro.

Gender differences in vascular expression of endothelin and ET A/ET B receptors, but not in calcium handling mechanisms, in deoxycorticosterone acetate-salt hypertension

We determined if the increased vascular responsiveness to endothelin-1 (ET-1) observed in male, but not in female, DOCA-salt rats is associated with differential vascular mRNA expression of ET-1 and/or ET A/ET B receptors or with functional differences in Ca2+ handling mechanisms by vascular myocytes. Uninephrectomized male and female Wistar rats received DOCA and drinking water containing NaCl/KCl. Control rats received vehicle and tap water. Blood pressure and contractile responses of endothelium-denuded aortic rings to agents which induce Ca2+ influx and/or its release from internal stores were measured using standard procedures. Expression of mRNA for ET-1 and ET A/ET B receptors was evaluated by RT-PCR after isolation of total cell RNA from both aorta and mesenteric arteries. Systolic blood pressure was higher in male than in female DOCA rats. Contractions induced by Bay K8644 (which activates Ca2+ influx through voltage-operated L-type channels), and by caffeine, serotonin or ET-1 in Ca2+-free buffer (which reflect Ca2+ release from internal stores) were significantly increased in aortas from male and female DOCA-salt compared to control aortas. DOCA-salt treatment of male, but not female, rats statistically increased vascular mRNA expression of ET-1 and ET B receptors, but decreased the expression of ET A receptors. Molecular up-regulation of vascular ET B receptors, rather than differential changes in smooth muscle Ca2+ handling mechanisms, seems to account for the increased vascular reactivity to ET-1/ET B receptor agonists and higher blood pressure levels observed in male DOCA-salt rats.

Effect of cyproterone acetate on alpha1-adrenoceptor subtypes in rat vas deferens

Gonadal hormones regulate the expression of alpha1-adrenoceptor subtypes in several tissues. The present study was carried out to determine whether or not cyproterone acetate, an anti-androgenic agent, regulates the alpha1-adrenoceptor subtypes that mediate contractions of the rat vas deferens in response to noradrenaline. The actions of subtype selective alpha1-antagonists were investigated in vas deferens from control and cyproterone acetate-treated rats (10 mg/day, sc, for 7 days). Prazosin (pA2 ~9.5), phentolamine (pA2 ~8.3) and yohimbine (pA2 ~6.7) presented competitive antagonism consistent with activation of alpha1-adrenoceptors in vas deferens from both control and treated rats. The pA2 values estimated for WB 4101 (~9.5), benoxathian (~9.7), 5-methylurapidil (~8.5), indoramin (~8.7) and BMY 7378 (~6.8) indicate that alpha1A-adrenoceptors are involved in the contractions of the vas deferens from control and cyproterone acetate-treated rats. Treatment of the vas deferens from control rats with the alpha1B/alpha1D-adrenoceptor alkylating agent chloroethylclonidine had no effect on noradrenaline contractions, supporting the involvement of the alpha1A-subtype. However, this agent partially inhibited the contractions of vas deferens from cyproterone acetate-treated rats, suggesting involvement of multiple receptor subtypes. To further investigate this, the actions of WB 4101 and chloroethylclonidine were reevaluated in the vas deferens from rats treated with cyproterone acetate for 14 days. In these organs WB 4101 presented complex antagonism characterized by a Schild plot with a slope different from unity (0.65 ± 0.05). After treatment with chloroethylclonidine, the complex antagonism presented by WB 4101 was converted into classical competitive antagonism, consistent with participation of alpha1A-adrenoceptors as well as alpha1B-adrenoceptors. These results suggest that cyproterone acetate induces plasticity in the alpha1-adrenoceptor subtypes involved in the contractions of the vas deferens.

Determination of renal function in long-term heart transplant patients by measurement of urinary retinol-binding protein levels

Significant improvements have been noted in heart transplantation with the advent of cyclosporine. However, cyclosporine use is associated with significant side effects, such as chronic renal failure. We were interested in evaluating the incidence of long-term renal dysfunction in heart transplant recipients. Fifty-three heart transplant recipients were enrolled in the study. Forty-three patients completed the entire evaluation and follow-up. Glomerular (serum creatinine, creatinine clearance measured, and creatinine clearance calculated) and tubular functions (urinary retinol-binding protein, uRBP) were re-analyzed after 18 months. At the enrollment time, the prevalence of renal failure ranged from 37.7 to 54% according to criteria used to define it (serum creatinine > or = 1.5 mg/dL and creatinine clearance <60 mL/min). Mean serum creatinine was 1.61 ± 1.31 mg/dL (range 0.7 to 9.8 mg/dL) and calculated and measured creatinine clearances were 67.7 ± 25.9 and 61.18 ± 25.04 mL min-1 (1.73 m²)-1, respectively. Sixteen of the 43 patients who completed the follow-up (37.2%) had tubular dysfunction detected by increased levels of uRBP (median 1.06, 0.412-6.396 mg/dL). Eleven of the 16 patients (68.7%) with elevated uRBP had poorer renal function after 18 months of follow-up, compared with only eight of the 27 patients (29.6%) with normal uRBP (RR = 3.47, P = 0.0095). Interestingly, cyclosporine trough levels were not different between patients with or without tubular and glomerular dysfunction. Renal function impairment is common after heart transplantation. Tubular dysfunction, assessed by uRBP, correlates with a worsening of glomerular filtration and can be a useful tool for early detection of renal dysfunction.

The immunomodulator glatiramer acetate influences spinal motoneuron plasticity during the course of multiple sclerosis in an animal model

The immunomodulador glatiramer acetate (GA) has been shown to significantly reduce the severity of symptoms during the course of multiple sclerosis and in its animal model - experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Since GA may influence the response of non-neuronal cells in the spinal cord, it is possible that, to some extent, this drug affects the synaptic changes induced during the exacerbation of EAE. In the present study, we investigated whether GA has a positive influence on the loss of inputs to the motoneurons during the course of EAE in rats. Lewis rats were subjected to EAE associated with GA or placebo treatment. The animals were sacrificed after 15 days of treatment and the spinal cords processed for immunohistochemical analysis and transmission electron microscopy. A correlation between the synaptic changes and glial activation was obtained by performing labeling of synaptophysin and glial fibrillary acidic protein using immunohistochemical analysis. Ultrastructural analysis of the terminals apposed to alpha motoneurons was also performed by electron transmission microscopy. Interestingly, although the GA treatment preserved synaptophysin labeling, it did not significantly reduce the glial reaction, indicating that inflammatory activity was still present. Also, ultrastructural analysis showed that GA treatment significantly prevented retraction of both F and S type terminals compared to placebo. The present results indicate that the immunomodulator GA has an influence on the stability of nerve terminals in the spinal cord, which in turn may contribute to its neuroprotective effects during the course of multiple sclerosis.

Teores de retinol, beta-caroteno e alfa-tocoferol em leites bovinos comercializados na cidade de São Paulo

Os teores de retinol, beta-caroteno e alfa-tocoferol foram determinados por cromatografia líquida de alta eficiência em leites em pó, pasteurizados e esterilizados, comercializados na Cidade de São Paulo. Após a saponificação e extração, os compostos foram determinados simultaneamente utilizando-se coluna de sílica, fase móvel constituída por hexano:isopropanol (99:1) e fluxo de 2,0mL/min. O retinol e o beta-caroteno foram determinados no detector UV/visível e o alfa-tocoferol no detector de fluorescência, ligado em série com o anterior. Os valores de vitamina A dos leites foram calculados com e sem a consideração do beta-caroteno. A maior contribuição deste nutriente no valor de vitamina A esteve entre os leites em pó, cerca de 17% em uma das marcas. Os altos teores das vitamina A e E encontrados em alguns leites, indicam que os mesmos provavelmente receberam adição destas vitaminas, não trazendo, entretanto, tal informação no rótulo. A análise de vitaminas nestes produtos indica a necessidade de maior controle de qualidade dos mesmos.

Hipovitaminose A em crianças de áreas rurais do semi-árido baiano

Objetivou-se avaliar a distribuição e a magnitude da deficiência de vitamina A e o consumo dietético de 161 crianças de 6 a 72 meses de idade, de áreas rurais do Município de Cansanção-Bahia, Brasil. Os níveis de retinol sérico foram medidos pelo método espectrofotométrico (Bessey-Lowry modificado por Araújo e Flores, 1978). A média do retinol sérico distribuiuse homogeneamente entre as diferentes faixas etárias. Níveis inadequados de retinol sérico (deficiente <10,0 µg/dl e baixos <20,0 µg/dl) foram detectados em 44,7% das crianças, caracterizando a deficiência como problema de saúde pública. Os níveis de retinol sérico não mostraram associação estatisticamente significante com sexo e idade das crianças, contudo as menores de 24 meses apresentaram prevalência mais alta de níveis inadequados. A principal fonte de vitamina A, disponível para essas crianças, é representada pelos carotenóides, em especial beta-caroteno. Foi observada maior diversificação no consumo dos alimentos de conteúdos moderado e baixo em vitamina A no grupo de 24 a 72 meses de idade, sem contudo assegurar níveis adequados de retinol sérico para este grupo etário.

Situação nutricional e alimentar de pré-escolares no semi-árido da Bahia (Brasil): II ­ Hipovitaminose A

Foram estudados 754 pré-escolares de áreas urbanas de sete municípios do semi-árido do Estado Bahia, Brasil, com o objetivo de determinar a prevalência da hipovitaminose A e sua associação com a idade, sexo, renda em salário-mínimo, escolaridade materna e adequação dietética em vitamina A. Na amostra estudada não se registrou nenhum caso de sinais e/ou sintomas de xeroftalmia durante o exame clínico-oftalmológico. Em 563 crianças foi possível a coleta de sangue para determinação de retinol sérico; encontrou-se um valor médio de 20,3 µg/dl (DP=10,8µg/dl) e uma prevalência de 15,3% de níveis deficientes (abaixo de 10,0 µg/dl). Em todos os sete municípios estudados a prevalência de retinol sérico deficiente foi superior a 5,0% que é nível crítico proposto pela OMS para considerar a hipovitaminose A como problema de saúde pública. A distribuição de retinol sérico encontrada não teve relação com o sexo das crianças, mas com a idade, diminuindo a prevalência de níveis deficientes e baixos na medida em que a idade aumenta. Não se encontrou associação entre renda familiar per capita ou escolaridade materna e a prevalência de níveis de retinol deficiente. Os resultados de consumo alimentar provenientes do inquérito recordatório de 24h mostraram que apenas 8% das crianças consumiram quantidades adequadas de retinol ou de seus precursores; 66% ingeriam abaixo da metade e quase 35% delas não chegaram a ingerir nem um quarto da quantidade recomendada para sua faixa etária. A carência de vitamina A deve ser considerada como problema de saúde pública severo, tanto pela alta prevalência de níveis deficientes de retinol em todos os municípios como também pela dimensão da inadequação dietética.

Prevalência da hipovitaminose A em pré-escolares no Estado de Sergipe, 1998

OBJETIVO: Determinar a prevalência da deficiência de vitamina A em uma amostra de base populacional de crianças. MÉTODOS: Trata-se de um estudo de corte transversal realizado de maio a junho de 1998, no Estado de Sergipe, envolvendo 607 crianças de seis a 60 meses de idade. As informações foram obtidas por meio de entrevistas domiciliares com os responsáveis pelas crianças. A coleta de sangue foi realizada por venipuntura e a dosagem do retinol sérico pelo método da cromatografia líquida de alta resolução. Para a análise simultânea das variáveis do estudo, aceitou-se o valor de p<0,05 para testar as associações de significância estatística. RESULTADOS: Encontrou-se um valor médio de retinol sérico de 0,87 µmol/l (±0,38) entre as crianças investigadas. A prevalência de níveis considerados baixos (0,35 a 0,69 µmol/l) foi de 22,5% e de níveis considerados deficientes (<0,35 µmol/l), de 9,6%, resultando em 32,1% de crianças com níveis inadequados de retinol sérico. A distribuição de retinol sérico se mostrou associada com a renda per capita e o indicador peso/idade. Não foi encontrada associação estatisticamente significante com idade e sexo das crianças e com as variáveis maternas. CONCLUSÃO: A deficiência de vitamina A das crianças pré-escolares constitui um importante problema de saúde pública. A hipovitaminose-A está relacionada principalmente à baixa renda per capita da família e baixo peso infantil.

Suplementação materna com retinil palmitato no pós-parto imediato: consumo potencial por lactentes

OBJETIVO: Avaliar o efeito da suplementação materna com dose única de retinil palmitato no pós-parto para o fornecimento de vitamina A ao lactente. MÉTODOS: Ensaio clínico realizado em Natal (RN), entre março e dezembro de 2007, com 85 mulheres aleatoriamente distribuídas em dois grupos. As suplementações de retinil palmitato no pós-parto corresponderam à dose única de 200.000 (grupo experimento) UI e 0 UI (grupo controle). A quantificação do nível de retinol no leite foi obtida pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência. Com base nas concentrações de retinol obtidas no leite materno e por meio de simulações, foi calculado o consumo de vitamina A dos lactentes nos momentos 24h e 30 dias pós-parto. RESULTADOS: No momento 24h pós-parto, o fornecimento diário de retinol ao recém-nascido via colostro foi de 1,63 µmol para o grupo controle e 2,9 µmol para o grupo experimento, considerando ingestão adequada de 1,40 µmol/dia e volume de leite consumido de 500 mL/dia. Trinta dias pós-parto, esses valores corresponderam a 0,64 µmol/dia (controle) e 0,89 µmol/dia (experimento), um aumento de 39% na concentração de retinol no grupo experimento em relação ao grupo controle ou 64% da recomendação para lactentes de zero a seis meses de idade. CONCLUSÕES: A suplementação materna com 200.000 UI de retinil palmitato no pós-parto imediato e a promoção de práticas de aleitamento materno são eficientes para melhorar o estado nutricional em vitamina A do binômio mãe-filho.

Suplementação com vitamina A no puerpério: revisão sistemática

Realizou-se revisão sistemática de estudos avaliativos da aplicação de megadoses de vitamina A nas concentrações de retinol no sangue e no leite maternos como medida de curto prazo para a prevenção de hipovitaminose A. Com base na estratégia do Centro Cochrane do Brasil para ensaios clínicos aleatórios foram identificadas 115 publicações no PubMed, entre as quais, por um conjunto de critérios de inclusão/exclusão, foram selecionados 14 artigos publicados entre 1993 a 2007. O efeito das intervenções com três esquemas posológicos (200.000, 300.000 e 400.000 UI) de vitamina A foram analisados. Dos 11 experimentos realizados em leite materno, nove apresentaram elevação dos níveis de retinol em comparação com o grupo controle; dos nove que avaliaram sangue materno, quatro mostraram elevação após tempos variados de aplicação de megadoses de vitamina A. Conclui-se que a administração de vitamina A em elevadas doses foi positiva em 82% dos ensaios com leite materno, mas menos notáveis em comparação ao sangue materno. Não foram observadas diferenças significativas quanto à posologia aplicada.

Deficiencia de vitamina A e fatores associados em criancas de areas urbanas

OBJETIVO: Analisar a prevalência da deficiência de vitamina A em crianças e os fatores associados. MÉTODOS: Estudo de corte transversal de base populacional realizado com 1.211 crianças de seis a 59 meses de idade, de ambos os sexos, procedentes da área urbana de nove cidades do estado da Paraíba, Brasil. O estado nutricional de vitamina A foi avaliado pelas concentrações séricas de retinol e presença de infecção subclínica avaliada pelas concentrações de proteína C-reativa. Foram investigadas as condições socioeconômicas, demográficas, de saneamento, além da suplementação prévia com vitamina A. Foram consideradas com deficiência de vitamina A as crianças com concentrações de retinol sérico < 0,70 µmol/L. Níveis séricos de vitamina A < 0,70 µmol/L com prevalência ≥ 20% foram considerados como grave problema de saúde pública. Análises uni e multivaridas foram conduzidas para testar associações estatísticas (p < 0,05). RESULTADOS: A prevalência de deficiência de vitamina A foi de 21,8% (IC95% 19,6;24,2), mostrando associação com a presença de infecção subclínica e ausência de água no domicílio. A prevalência de deficiência de vitamina A foi de 21,8% (IC95% 19,6;24,2). Após ajuste para confundimento, a deficiência de vitamina A mostrou-se associada com a presença de infecção subclínica e com a ausência de água no domicílio. A ocorrência da deficiência de vitamina A foi quatro vezes maior (IC95% 1,49;10,16) em crianças com infecção subclínica e sem água no domicilio, comparativamente às crianças sem infecção e com água no domicílio. CONCLUSÕES: Apesar das ações de prevenção e controle da deficiência de vitamina A, a hipovitaminose A ainda configura-se como um problema de saúde pública preocupante entre as crianças menores de cinco anos.

Factors associated with the nutritional status of children less than 5 years of age

OBJECTIVE To analyze if the nutritional status of children aged less than five years is related to the biological conditions of their mothers, environmental and socioeconomic factors, and access to health services and social programs.METHODS This cross-sectional population-based study analyzed 664 mothers and 790 children using canonical correlation analysis. Dependent variables were characteristics of the children (weight/age, height/age, BMI/age, hemoglobin, and retinol serum levels). Independent variables were those related to the mothers’ nutritional status (BMI, hemoglobin, and retinol serum levels), age, environmental and socioeconomic factors and access to health service and social programs. A < 0.05 significance level was adopted to select the interpreted canonical functions (CF) and ± 0.40 as canonical load value of the analyzed variables.RESULTS Three canonical functions were selected, concentrating 89.9% of the variability of the relationship among the groups. In the first canonical function, weight/age (-0.73) and height/age (-0.99) of the children were directly related to the mother’s height (-0.82), prenatal appointments (-0.43), geographical area of the residence (-0.41), and household incomeper capita (-0.42). Inverse relationship between the variables related to the children and people/room (0.44) showed that the larger the number of people/room, the poorer their nutritional status. Rural residents were found to have the worse nutritional conditions. In the second canonical function, the BMI of the mother (-0.48) was related to BMI/age and retinol of the children, indicating that as women gained weight so did their children. Underweight women tended to have children with vitamin A deficiency. In the third canonical function, hemoglobin (-0.72) and retinol serum levels (-0.40) of the children were directly related to the mother’s hemoglobin levels (-0.43).CONCLUSIONS Mothers and children were associated concerning anemia, vitamin A deficiency and anthropometric markers. Living in rural areas is a determining factor for the families health status.

Radiometric studies of mycobacterium tuberculosis

An in vitro assay system that included automated radiometric quantification of 14CO2 released as a result of oxidation of 14C- substrates was applied for studying the metabolic activity of M. tuberculosis under various experimental conditions. These experiments included the study of a) mtabolic pathways, b) detection times for various inoculum sizes, c) effect of filtration on reproducibility of results, d) influence of stress environment e) minimal inhibitory concentrations for isoniazid, streptomycin, ethambutol and rifampin, and f) generation times of M. tuberculosis and M. bovis. These organisms were found to metabolize 14C-for-mate, (U-14C) acetate, (U-14C) glycerol, (1-14C) palmitic acid, 1-14C) lauric acid, (U-14C) L-malic acid, (U-14C) D-glucose, and (U-14C) D-glucose, but not (1-14C) L-glucose, (U-14C) glycine, or (U-14C) pyruvate to 14CO2. By using either 14C-for-mate, (1-14C) palmitic acid, or (1-14C) lauric acid, 10(7) organisms/vial could be detected within 24 48 hours and as few as 10 organisms/vial within 16-20 days. Reproducible results could be obtained without filtering the bacterial suspension, provided that the organisms were grown in liquid 7H9 medium with 0.05% polysorbate 80 and homogenized prior to the study. Drugs that block protein synthesis were found to have lower minimal inhibitory concentrations with the radiometric method when compared to the conventional agar dilution method. The mean generation time obtained for M. bovis and different strains of M. tuberculosis with various substrates was 9 ± 1 hours.