Preparation and purification of Flavobacterium heparinum chondroitinases AC and B by hydrophobic interaction chromatography

Flavobacterium heparinum is a soil bacterium that produces several mucopolysaccharidases such as heparinase, heparitinases I and II, and chondroitinases AC, B, C and ABC. The purpose of the present study was to optimize the preparation of F. heparinum chondroitinases, which are very useful tools for the identification and structural characterization of chondroitin and dermatan sulfates. We observed that during the routine procedure for cell disruption (ultrasound, 100 kHz, 5 min) some of the chondroitinase B activity was lost. Using milder conditions (2 min), most of the chondroitinase B and AC protein was solubilized and the enzyme activities were preserved. Tryptic soy broth without glucose was the best culture medium both for bacterial growth and enzyme induction. Chondroitinases AC and B were separated from each other and also from glucuronidases and sulfatases by hydrophobic interaction chromatography on HP Phenyl-Sepharose. A rapid method for screening of the column fractions was also developed based on the metachromatic shift of the color of dimethylmethylene blue.

Comparação entre os métodos rápidos SimplateR TPC- CI e PetrifilmR AC e os métodos convencionais de contagem em placas para a enumeração de aeróbios mesófilos em sorvetes

A contagem de aeróbios mesófilos ou contagem padrão em placas em um produto alimentício reflete a qualidade da matéria-prima, bem como as condições de processamento, manuseio e estocagem. O método de contagem em placas tradicionais requer 48h de incubação para a posterior leitura dos resultados. Comparou-se dois métodos que parecem ser uma boa alternativa para a contagem padrão em placas: SimplateR TPC-CI e PetrifilmR AC. Também avaliou-se a capacidade inibitória do 2, 3, 5 cloreto de trifeniltetrazólio quando adicionado ao Agar Plate Count. Este corante é incolor na forma oxidada e vermelho quando reduzido pelos microrganismos, devido à formação de formazano. O coe-ficiente de correlação obtido, através de estudos conduzidos com 60 amostras de sorvetes, entre 0,866-0,979 indicou uma equivalente sensibilidade dos métodos testados. Somente a contagem padrão em placas com TTC diferiu signicativamente da contagem padrão em placas.