EVALUATION OF FOUR DIFFERENT DNA EXTRACTION METHODS IN COAGULASE-NEGATIVE STAPHYLOCOCCI CLINICAL ISOLATES

Currently there are several methods to extract bacterial DNA based on different principles. However, the amount and the quality of the DNA obtained by each one of those methods is highly variable and microorganism dependent, as illustrated by coagulase-negative staphylococci (CoNS) which have a thick cell wall that is difficult to lyse. This study was designed to compare the quality and the amount of CoNS DNA, extracted by four different techniques: two in-house protocols and two commercial kits. DNA amount and quality determination was performed through spectrophotometry. The extracted DNA was also analyzed using agarose gel electrophoresis and by PCR. 267 isolates of CoNS were used in this study. The column method and thermal lyses showed better results with regard to DNA quality (mean ratio of A260/280 = 1.95) and average concentration of DNA (), respectively. All four methods tested provided appropriate DNA for PCR amplification, but with different yields. DNA quality is important since it allows the application of a large number of molecular biology techniques, and also it's storage for a longer period of time. In this sense the extraction method based on an extraction column presented the best results for CoNS.

FIRST CASE OF AUTOCHTHONOUS HUMAN VISCERAL LEISHMANIASIS IN THE URBAN CENTER OF RIO DE JANEIRO: CASE REPORT

Visceral leishmaniasis is an anthropozoonosis that is caused by protozoa of the genus Leishmania, especially Leishmania (Leishmania) infantum, and is transmitted to humans by the bite of sandflies of the genus Lutzomyia, such as Lutzomyia longipalpis. There are many reservoirs, including Canis familiaris. It is a chronic infectious disease with systemic involvement that is characterized by three phases: the initial period, the state period and the final period. The main symptoms are fever, malnutrition, hepatosplenomegaly, and pancytopenia. This article reports a case of a patient diagnosed with visceral leishmaniasis in the final period following autochthonous transmission in the urban area of Rio de Janeiro. The case reported here is considered by the Municipal Civil Defense and Health Surveillance of Rio de Janeiro to be the first instance of autochthonous visceral leishmaniasis in humans in the urban area of this city. The patient was discharged and is undergoing a follow-up at the outpatient clinic, demonstrating clinical improvement.

Flebotomíneos (Diptera, Psychodidae) de área de transmissão de leishmaniose tegumentar americana, no município de Itupeva, região sudeste do Estado de São Paulo, Brasil

O estudo da fauna flebotomínica em área de transmissão recente de leishmaniose tegumentar americana fornece subsídios para o controle da doença no Estado de São Paulo. Neste estudo, procurou-se caracterizar a distribuição sazonal, espacial e horária das espécies de flebotomíneos encontradas no município de Itupeva. As coletas foram realizadas quinzenalmente entre abril/94 e março/95. Dos 864 indivíduos coletados, 81,4% pertenceram a 4 espécies: Lutzomyia migonei (32,4%), L. whitmani (26,0%), L. intermedia (12,0%) e L. fischeri (10,9%). Estas espécies apresentaram maior densidade no período mais frio e seco do ano (abril a setembro/94) e maior atividade entre a segunda e a quinta hora após o crepúsculo vespertino. L. migonei predominou em praticamente todos os ambientes investigados, seguida por L. whitmani e L. longipalpis no ambiente domiciliar. Conclui-se que, juntamente com L. intermedia, espécie suspeita como provável vetora no Estado de São Paulo, L. migonei e L. whitmani podem estar desempenhando um importante papel na transmissão da leishmaniose tegumentar na área estudada.

Leishmaniose tegumentar americana: flebotomíneos de área de transmissão no município de Teodoro Sampaio, região sudoeste do Estado de São Paulo, Brasil

Realizaram-se coletas de flebotomíneos em zona de mata secundária no município de Teodoro Sampaio, Estado de São Paulo, no período de 12 meses a partir de maio de 1994. Foram selecionadas duas residências localizadas a 240 e 850m da mata com características de floresta tropical semi-decídua. Coletas noturnas com armadilhas Center of Disease Control foram realizadas quinzenalmente de crepúsculo a crepúsculo, no intradomicílio, margem e interior da mata e nos peridomicílios. Com armadilhas de Shannon, localizadas no peridomicílio, foram realizadas 24 coletas de 6 horas a partir do crepúsculo vespertino e 4 coletas trimestrais noturnas de crepúsculo a crepúsculo. Observou-se baixa densidade populacional desses insetos, com predomínio de Lutzomyia intermedia (93,5%). Foi capturado maior número de insetos nas armadilhas instaladas na margem da mata. No peridomicílio de ambas as casas, capturou-se número equivalente de exemplares, porém, na casa mais distante da mata, houve nítido predomínio de machos. No intradomicílio da casa mais próxima à mata, foi capturado maior número de exemplares com predomínio de fêmeas. Os picos de L. intermedia e L. whitmani ocorreram nas coletas do primeiro horário e caracterizaram-se por maior freqüência nos meses de maio, setembro e dezembro, quando se registraram variações de temperatura média de 21 a 25,7O C e de índice pluviométrico de 66,7 a 195,1mm.

Observações sobre oviposição, eclosão e tempo de vida de Triatoma matogrossensis Leite & Barbosa, 1953 (Hemiptera-Reduviidae) em função da alimentação em pombos e coelhos

Estudou-se em laboratório a influência de duas diferentes fontes de alimentação sobre oviposição, eclosão dos ovos e tempo de vida de casais de Triatoma matogrossensis. Foram observados 68 casais separados em quatro diferentes grupos, com 20, 12, 20 e 16 casais, respectivamente. Os grupos A1 e A 2 foram alimentados em pombos e os grupos C1 e C 2 em coelhos. Os casais foram mantidos em estufa a 26o ± 2oC e UR de 60-80%, com fotoperíodo de 14 horas. O maior número de ovos postos foi encontrado no grupo A1. Não houve diferença na proporção de ovos eclodidos dos grupos alimentados em coelhos ou pombos. Não foram observadas diferenças de tempo de vida entre machos e fêmeas dos quatro grupos, entretanto o grupo A1 apresentou o maior tempo de sobrevivência e o grupo C2 o menor.

Leishmaniose tegumentar americana: flebotomíneos de área de transmissão, no município de Pedro de Toledo, região sul do Estado de São Paulo, Brasil

Considerado como área endêmica de leishmaniose tegumentar americana (LTA), o Vale do Ribeira, na região sul do Estado de São Paulo, teve 929 casos notificados nos últimos 15 anos. Com o objetivo de identificar a fauna flebotomínea, foram realizadas capturas quinzenais em área rural do município de Pedro de Toledo, durante um ano, a partir de maio de 1994. Foram utilizadas armadilhas de Shannon no peridomicílio e armadilhas luminosas, tipo CDC, nos ambientes: domiciliar (intra e peri) e florestal (margem e interior), instaladas a partir do crepúsculo vespertino. Foram coletadas 8 espécies de flebotomíneos, totalizando 11.096 exemplares, sendo Lutzomyia intermedia a espécie dominante (96,4%). Esta espécie mostrou-se mais freqüente na primeira metade da noite, ocorrendo o ano inteiro, preferencialmente no ambiente domiciliar, o que indica sua preferência por ambiente antrópico. Os dados do presente trabalho ratificam L. intermedia como importante espécie vetora de LTA no Vale do Ribeira.

Doença da arranhadura do gato por Bartonella quintana em lactente: uma apresentação incomum

Relato de caso de doença da arranhadura do gato (DAG), em um paciente lactente, com história epidemiológica negativa, descrevendo o rastreamento diagnóstico, a imagem ao ultra-som, a evolução clínica e o prognóstico. B. quintana foi identificada em aspirado de secreção ganglionar pelo método de PCR. B. henselae, embora seja o agente causal habitualmente responsável pela DAG, não foi isolada. Os autores concluem que a pesquisa de B. quintana e B. henselae deve ser incluída na investigação de adenites, principalmente quando a evolução é subaguda, mesmo em lactentes e, ainda que a história epidemiológica seja negativa.

HTLV-I associated myelopathy in the northern region of Brazil (Belém-Pará): serological and clinical features of three cases

Three patients (males, black, ages 37, 40 and 57) attended a university clinic with a progressive paraparesis of obscure origin. One patient who referred disease duration of more than 16 years, showed diminished deep reflexes, bilateral Babinski's sign, diminished sensation of vibration, abnormal bladder function and back pain. The other two patients (with one and six years of disease duration) complained of weakness in one leg, increased deep reflexes and back pain. Babinski's sign and bladder disturbance were also present in the patient with six years of disease. Blood samples tested by an enzyme immune assay and a discriminatory Western blot were positive for HTLV-I. The familial analysis of one patient showed a possible pattern of sexual and vertical transmission of the virus. To the best of our knowledge, these are the first cases of a proven association between HTLV-I and TSP/HAM in Belem, Para, and emphasize the need to actively look for cases of neurological disease associated to the virus.

Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) em área de transmissão de leishmaniose tegumentar americana no litoral norte do Estado de São Paulo, Brasil

A região do litoral norte do Estado de São Paulo registrou 14, 30 e 104 casos de leishmaniose tegumentar americana nos anos de 1993, 1994 e 1995 respectivamente. Com objetivo de caracterizar a fauna e a distribuição sazonal e horária das espécies de flebotomíneos foram realizadas coletas quinzenais de formas adultas durante o período de dezembro de 1995 a novembro de 1996, utilizando-se armadilhas luminosas do tipo CDC, no interior da residência, no peridomicílio e na mata durante 12 horas a partir do crepúsculo vespertino. No peridomicílio foi utilizada, durante 6 horas também a partir do crepúsculo vespertino, armadilha de Shannon instalada a 100 metros da casa. A cada 3 meses esta armadilha foi utilizada durante 12 horas. Foram observadas flutuações das densidades populacionais, bem como as ocorrências intra e extradomiciliar das espécies predominantes. Lutzomyia intermedia foi a espécie mais abundante nas diferentes armadilhas utilizadas e nos ambientes investigados.

Yellow fever virus isolated from a fatal post vaccination event: an experimental comparative study with the 17DD vaccine strain in the Syrian hamster (Mesocricetus auratus)

In order to investigate the pathogenicity of the virus strain GOI 4191 that was isolated from a fatal adverse event after yellow fever virus (YFV) vaccination, an experimental assay using hamsters (Mesocricetus auratus) as animal model and YFV 17DD vaccine strain as virus reference was accomplished. The two virus strains were inoculated by intracerebral, intrahepatic and subcutaneous routes. The levels of viremia, antibody response, and aminotransferases were determined in sera; while virus, antigen and histopathological changes were determined in the viscera. No viremia was detected for either strain following infection; the immune response was demonstrated to be more effective to strain GOI 4191; and no significant aminotransferase levels alterations were detected. Strain GOI 4191 was recovered only from the brain of animals inoculated by the IC route. Viral antigens were detected in liver and brain by immunohistochemical assay. Histothological changes in the viscera were characterized by inflammatory infiltrate, hepatocellular necrosis, and viral encephalitis. Histological alterations and detection of viral antigen were observed in the liver of animals inoculated by the intrahepatic route. These findings were similar for both strains used in the experiment; however, significant differences were observed from those results previously reported for wild type YFV strains.

Caracterização molecular do HTLV-1 em pacientes com paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV-1 em Belém, Pará

O presente estudo avaliou a ocorrência da infecção pelo HTLV-1 e seus subtipos em amostras de sangue de pacientes com diagnóstico clínico de paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao Htlv-1. A detecção da infecção pelo HTLV realizou-se através de testes sorológico e molecular. Cinco amostras estavam infectadas pelo HTLV-1 do subtipo Cosmopolita, subgrupo Transcontinental. Os resultados obtidos confirmam a ocorrência de infecção pelo HTLV-1 em pacientes com diagnóstico clínico de paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao Htlv-1em Belém, Pará.

Rifampicin fails to eradicate mature biofilm formed by methicillin-resistant Staphylococcus aureus

INTRODUCTION: Antimicrobial activity on biofilms depends on their molecular size, positive charges, permeability coefficient, and bactericidal activity. Vancomycin is the primary choice for methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infection treatment; rifampicin has interesting antibiofilm properties, but its effectivity remains poorly defined. METHODS: Rifampicin activity alone and in combination with vancomycin against biofilm-forming MRSA was investigated, using a twofold serial broth microtiter method, biofilm challenge, and bacterial count recovery. RESULTS: Minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration for vancomycin and rifampicin ranged from 0.5 to 1mg/l and 0.008 to 4mg/l, and from 1 to 4mg/l and 0.06 to 32mg/l, respectively. Mature biofilms were submitted to rifampicin and vancomycin exposure, and minimum biofilm eradication concentration ranged from 64 to 32,000 folds and from 32 to 512 folds higher than those for planktonic cells, respectively. Vancomycin (15mg/l) in combination with rifampicin at 6 dilutions higher each isolate MIC did not reach in vitro biofilm eradication but showed biofilm inhibitory capacity (1.43 and 0.56log10 CFU/ml reduction for weak and strong biofilm producers, respectively; p<0.05). CONCLUSIONS: In our setting, rifampicin alone failed to effectively kill biofilm-forming MRSA, demonstrating stronger inability to eradicate mature biofilm compared with vancomycin.

Toll-like receptor 3 gene polymorphisms are not associated with the risk of hepatitis B and hepatitis C virus infection

INTRODUCTION: The present study investigated the prevalence of two single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in the Toll-like receptor 3 (TLR3) gene in patients infected with hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV). METHODS: Samples collected from HCV (n = 74) and HBV (n = 35) carriers were subjected to quantitative real-time PCR (qPCR) to detect the presence of the SNPs rs5743305 and rs3775291 in TLR3 and to measure the following biomarkers: alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyl transpeptidase (GGT), and prothrombin time (PT). A healthy control group was investigated and consisted of 299 HCV- and HBV-seronegative individuals. RESULTS: No significant differences in allele, genotype and haplotype frequencies were observed between the investigated groups, and no association was observed between the polymorphisms and histopathological results. Nevertheless, genotypes TA/AA (rs5743305) and GG (rs3775291) appear to be associated with higher levels of ALT (p<0.01), AST (p<0.05) and PT (p<0.05). In addition, genotypes TT (rs5743305; p<0.05) and GG (rs3775291; p<0.05) were associated with higher GGT levels. CONCLUSIONS: This genetic analysis revealed the absence of an association between the polymorphisms investigated and susceptibility to HBV and HCV infection; however, these polymorphisms might be associated with a greater degree of biliary damage during the course of HCV infection.