Estudo dos fatores de virulência associados à formação de biofilme e agrupamento filogenético em Escherichia coli isoladas de pacientes com cistite

Amostras de Escherichia coli, isoladas de pacientes do sexo feminino com quadro clínico de cistite, foram caracterizadas quanto à presença de fatores de virulência associados à formação de biofilme e ao agrupamento filogenético. Os resultados da reação em cadeia da polimerase demonstraram que todas as amostras foram positivas para o gene fimH (fímbria do tipo1), 91 amostras foram positivas para o gene fliC (flagelina) 50 amostras positivas para o gene papC (fímbria P), 44 amostras positivas para o gene kpsMTII (cápsula) e 36 amostras positivas para o gene flu (antígeno 43). Os resultados dos ensaios de quantificação da formação de biofilme demonstraram que 44 amostras formaram biofilme em microplacas de poliestireno e 56 amostras apresentaram resultado ausente/fraco. Também confirmamos a incidência das amostras de Escherichia coli no grupo filogenético B2 e D.

Prevalência das famílias TEM, SHV e CTX-M de β-lactamases de espectro estendido em Escherichia coli e Klebsiella spp no Hospital Universitário de Santa Maria, Estado do Rio Grande do Sul

Neste estudo estimou-se a distribuição e prevalência de β-lactamases de espectro estendido pertencentes às famílias TEM, SHV e CTX-M entre amostras de Escherichia coli e Klebsiella spp. no Hospital Universitário de Santa Maria, Rio Grande do Sul. Durante 14 meses, 90 microrganismos foram selecionados como prováveis produtores de ESBL. Os isolados foram submetidos a testes fenotípicos confirmatórios para a presença de ESBL. A seguir, os tipos de ESBLs presentes em cada microrganismo foram determinados através da pesquisa dos respectivos genes através da reação em cadeia da polimerase. Empregando-se o método do disco combinado, a presença de ESBLs foi confirmada em 55 (61,1%) amostras; quando o método do duplo disco foi utilizado, 57 (63,3%) amostras foramprodutoras de ESBLs. Com base na PCR, as ESBLs do tipo TEM e SHV foram mais presentes em Klebsiella pneumoniae enquanto que ESBL do tipo CTX-M foram mais presentes em Klebsiella oxytoca.

Phenotypic and molecular characterization of CTX-M extended-spectrum beta-lactamase-producing Escherichia coli isolates in Shiraz, Iran

AbstractINTRODUCTIONThe aim of this study was to detect the prevalence of the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-encoding CTX-M gene in Escherichia coliisolates.METHODS:Phenotypic screening of 376 E. coli isolates for ESBL was conducted using disk diffusion. ESBL-producing isolates were tested using PCR and specific primers. The blaCTX-M cluster was identified using the RFLP method, and its genotype was sequenced.RESULTS:From 202 ESBL-producing E. coli , 185 (91.5%) possessed CTX-M genes. CTX-M-1 subtypes were found in 98% of the isolates. The blaCTX-M gene was identical to CTX-M-15.CONCLUSIONS:A high prevalence of CTX-M-1-producing E. coli apparently exists in Shiraz, Iran.

Caracterização de sorotipos de Escherichia coli potencialmente produtores de enterotoxinas em alimentos

Em 137 amostras de alimentos de diferentes origens (animal e vegetal) foi investigada a ocorrência de sorotipos de Escherichia coli mais comumente descritos como produtores de enterotoxinas. A análise sorológica dos antígenos somáticos, de envoltórios e flagelares nas 265 culturas isoladas, resultou na identificação de 34 amostras distribuídas em doze sorotipos e oriundas de 24 produtos de origem animal. Outros aspectos foram analisados, visando associá-los como possíveis marcadores epidemiológicos. Assim, na biotipificação, verificou-se o perfil das 34 amostras diante da melibiose, rafinose, sacarose, salicina e sorbitol, obtendo-se a caracterização de 11 biotipos. Todavia, a acentuada heterogeneidade de biotipos distribuídos pelos sorotipos, não permitiu um relacionamento de tipos soro-fermentativos com as fontes de isolamento. Os demais testes, representados pela atividade hemolítica e a capacidade hemaglutinante, pouco acrescentaram para o problema da diferenciação de fenótipos ou na caracterização de marcadores epidemiológicos.

Endocytosis-inducer adhesins produced by enteropathogenic serogroups of Escherichia coli participate on bacterial attachment to infant enterocytes

Enteropathogenic E. coli (EPEC) infection of Hep-2 cells preoceeds through bacterial attachment to cell surface and internalization of adhered bacteria. EPEC attachment is a prerequisite for cell infection and is mediated by adhesins that recognize carbohydrate-containing receptors on cell membrane. Such endocytosis-inducer adhesins (EIA) also promote EPEC binding to infant enterocytes, suggesting that EIA may have an important role on EPEC gastroenteritis.

Atividades citotóxica e hemolítica em Escherichia coli uropatogênicas

Estudamos 59 Escherichia coli uropatogênicas (ECUP) obtidas de pacientes com infecção urinária e 30 E. coli originárias das fezes de indivíduos normais. Cada amostra originou-se de um paciente ou controle. Verificamos que 44% e 3,3% respectivamente eram hemolíticas em meio sólido segundo a origem. Apenas 15% das ECUP hemolíticas produziram alfa-hemolisina, isoladamente ou em associação com ß-hemolisina. A alfa-hemolisina correspondeu a 92% das amostras com atividade hemolítica. Não encontramos correlação entre títulos de alfa-hemolisina e o sítio de origem das ECUP (infecção alta ou baixa). Em 71% das ECUP e 30% das E. coli fecais detectamos a produção de citotoxina com ação citocida para linhagens celulares epitelióides como Vero, He-La e Hep-2 e pouco ativa para fibroblastos de embrião de galinha. A produção desta citotoxina não apresenta correlação com a síntese de hemolisinas. Não verificamos associação entre títulos citotóxicos e origem das ECUP. Certas características biológicas desta citotoxina como a resposta morfológica que determina nas células, o aumento dos títulos citotóxicos com o tempo, sua atividade citocida irreversível e sua termolabilidade sugerem analogia com a Verotoxina (VT) de E. coli. As células afetadas pela citoxina inicialmente mostram aspecto estrelado, tornam-se arredondadas e finalmente desprendem-se do seu suporte. É sugerido que a produção de citotoxina por E. coli aderidas às mucosas do trato urinário possa contribuir para a agressão ao uroepitélio.

Localized, diffuse, and aggregative-adhering Escherichia coli from infants with acute diarrhea and matched-controls

Of 126 infants under 2 years, enrolled in a study on the etiology of acute diarrhea in Recife, Brazil, we selected 37 from whom no recognized enteropathogens, except classic enteropathogenic Escherichia coli, were identified. For comparison, we also examined 37 matched-control infants without diarrhea seen at the same hospital setting. This paper had the purpose to determine the prevalence of localized, diffuse, and aggregative-adhering E. coli strains in both groups. Three to five fecal E. coli colonies, of each case and control, were tested individually for adherence to HeLa cells by using the one step 3-h incubation assay. Strains of E. coli showing localized adherence were found significantly more often in patients (37.8%) than in controls (13.5%), p < 0.02, and they were pratically confined to EPEC serovars 055:H-, 0111:H2, and 119:H6. In contrast, E. coli isolates exhibiting the diffuse or aggregative patterns of adherence were restricted to non-EPEC serogroups and were more frequently encountred among controls.

Expression of Recombinant Antigens in Escherichia coli: Application on Immunochemical Studies of Schistosoma mansoni Tegumental Antigens

Sm15 and Sm13 are recognized by antibodies from mice protectively vaccinated with tegumental membranes, suggesting a potential role in protective immunity. In order to raise antibodies for immunochemical investigations, the genes for these antigens were expressed in pGEX and pMal vectors so that comparisons could be made among different expression systems and different genes. The fusion proteins corresponding to several parts of the gene for the precursor of Sm15 failed in producing antibodies recognizing the parasite counterpart. On the other hand, antibodies raised against Sm13 MBP-fusion proteins recognized the 13 kDa tegumental protein. Thus the peculiarities of the gene of interest are important and the choice of the expression system must sometimes be decided on an empirical basis

A Preliminary Investigation on the Chemical Composition of the Cell Surface of Five Enteropathogenic Escherichia coli Serotypes

The cell surfaces of five enteropathogenic Escherichia coli serotypes (O111:H2; O111:H12; O125:H9; O119:H6; O26:H11) were assayed by chemical methods, lectin agglutination tests and spectroscopy associated to transmission electron microscopy. Results of lectin agglutination assays showed that all strains reacted with mannosebinding lectins. Strains belonging to serotype O125:H9 also agglutinated with lectins which recognize galactose and Nacetylgalactosamine residues. The bacterial cells were treated with 0.01M phosphate buffered saline (pH 7.0) at 100oC for 2 hr and the extracts were submitted to precipitation and fractionated by Cetavlon. Phosphate, total sugar and protein contents were determined. Gas liquid chomatography-mass spectrometry analysis of alditol acetates showed the presence of galactose, mannose, fucose, glucose and traces of ribose. Spectroscopic analysis of intact cells showed the presence of a capsule-like structure which was not totally preserved after extraction. Some cells were still surrounded by an amorphous capsular-like material after polysaccharide extraction.

Enterotoxigenic Escherichia coli - an overview

Enterotoxigenic Escherichia coli is an important cause of traveler's diarrhea and diarrheal illnesses in children in the developing world. In this presentation we will focus on the main virulence attributes of this pathogenic category of E. coli, and discuss the evolution of studies conducted in our laboratory.

Production of cytolethal distending toxin and other virulence characteristics of Escherichia coli strains of serogroup O86

Genetic and phenotypic virulence markers of different categories of diarrhoeagenic Escherichia coli were investigated in 106 strains of enteropathogenic E. coli (EPEC) serogroup O86. The most frequent serotype found was O86:H34 (86%). Strains of this serotype and the non motile ones behaved as EPEC i.e., carried eae, bfpA and EAF DNA sequences and presented localised adherence to HeLa cells. Serotypes O86:H2, O86:H6, O86:H10, O86:H18, O86:H27 and O86:H non determined, belonged to other categories. The majority of the strains of serotype O86:H34 and non motile strains produced cytolethal-distending toxin (CDT). The ribotyping analysis showed a correlation among ribotypes, virulence markers and serotypes, thus suggesting that CDT production might be a property associated with a universal clone represented by the O86:H34 serotype.