Effect of magnesium chloride and guanidinum chloride on the extraction of components of extracellular matrix from chicken cartilage

In order to evaluate the effect of chaotropic agents on proteoglycan and non-collagenous proteins, chicken xiphoid cartilage was treated with guanidine-HCI and MgCl2 in different concentrations (1M to 5M), and different periods of time (12, 24, 48 and 72hr). The maximum yield of uronic acid was obtained with 3M MgCl2 (73.3 per cent). Concentrations of 4M and 5M of MgCl2 showed that much less uronic acid was removed, 55.3 per cent and 38.1 respectively. Extraction with 3M MgCl2 and 3M guanidine-HCl resulted better efficiency when performed for 48 hr. Analysis by SDS-PAGE of the extracts obtained with guanidine-HCl and MgCl, in different concentrations pointed out that most components are equally removed with the two solvents, showing that the extraction with MgCl2 is an alternative assay to remove non-collagenous proteins from extracellular matrix.

Estudo da técnica da sindesmoplastia extra-articular com fascia lata autógena: modelo em cães

OBJETIVO: Avaliar a eficácia da técnica extra-capsular para o tratamento de ruptura do ligamento cruzado anterior em cães. MÉTODOS: Foi realizada a reparação cirúrgica extra-articular, sem artrotomia do ligamento cruzado anterior, com a utilização da fáscia lata autógena para estabilização da articulação do joelho em seis animais que apresentaram claudicação grave e movimento de gaveta positivo. RESULTADOS: A técnica cirúrgica extra-articular foi eficaz com boa estabilização articular e evolução satisfatória. CONCLUSÃO: A via extra capsular com uso da fáscia lata para correção da ruptura do ligamento cruzado anterior mostrou-se útil haja vista tratar-se de um procedimento simples e de rápida execução, causando o mínimo dano tecidual e recuperação pós-operatória eficiente.

Análise fotocolorimétrica computadorizada dos efeitos da betametasona intra-articular sobre a concentração de proteoglicanos da matriz cartilaginosa de joelhos leporinos: influência do número de injeções intra-articulares

OBJETIVO: Analisar os efeitos da injeção repetida de betametasona na concentração de proteoglicanos da cartilagem articular do joelhos normais de coelhos californianos de ambos os sexos. MÉTODOS: Os animais foram randomizados em oito grupos de dez animais cada. Três grupos controle (injeção ou não de solução salina isotônica) e cinco grupos de estudo - doses terapêuticas, repetidas ou não, de betametasona injetadas no joelho direito de cada coelho, com intervalos semanais. Após oito dias da última injeção prevista, cortes histológicos da cartilagem das áreas de apoio dos platôs tibiais foram corados com hematoxilina e eosina para análise por microscopia óptica, e com safranina O para a pesquisa da quantidade de proteoglicanos. A intensidade da coloração da safranina O foi quantificada em aparelho de histomorfometria, composto por microscópio Olympus BX 50 e microcomputador com software Image Pro-plus 4.5Ò. RESULTADOS: Não houve diferenças nos animais que tiveram seus joelhos injetados com betametasona uma, duas e quatro vezes quando comparados com os grupos controle. Nos animais que receberam seis e oito aplicações a intensidade da coloração com safranina O reduziu-se significativamente (p < 0,05) quando comparada tanto com grupos controle quanto com os outros de estudo. CONCLUSÃO: Foi possível demonstrar redução da concentração de proteoglicanos na matriz cartilaginosa articular dependente do efeito deletério cumulativo das repetidas injeções intra-articulares de betametasona.

Aggrecan structure in amphibian cartilage

The structure of the large proteoglycan present in the bullfrog epiphyseal cartilage was studied by immunochemical and biochemical methods. The isolated monomer showed a polydisperse behavior on Sepharose CL2B, with a peak at Kav = 0.14. Chondroitin sulfate chains were identified by HPLC analysis of the products formed by chondroitinase digestion and mercuric acetate treatment. These chains have approximately 38 disaccharides, a Di45:Di68 ratio of 1.6 and GalNAc4S + GalNAc4,6S are the main non-reducing terminals. Keratan sulfate was identified by the use of two monoclonal antibodies in Western blots after chondroitinase ABC treatment. A keratan sulfate-rich region (~110 kDa) was isolated by sequential treatment with chondroitinase ABC and proteases. We also employed antibodies in Western blotting experiments and showed that the full length deglycosylated core protein is about 300 kDa after SDS-PAGE. Domain-specific antibodies revealed the presence of immunoreactive sites corresponding to G1/G2 and G3 globular domains and the characterization of this large proteoglycan as aggrecan. The results indicate the high conservation of the aggrecan domain structure in this lower vertebrate.

Anti-cyclic citrullinated peptide antibodies and rheumatoid factor in leprosy patients with articular involvement

The objective of the present research was to evaluate the usefulness of anti-cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) antibodies and the IgM rheumatoid factor (IgM RF) test for the differential diagnosis of leprosy with articular involvement and rheumatoid arthritis (RA). Anti-CCP antibodies and IgM RF were measured in the sera of 158 leprosy patients (76 with and 82 without articular involvement), 69 RA patients and 89 healthy controls. Leprosy diagnosis was performed according to Ridley and Jopling classification criteria and clinical and demographic characteristics of leprosy patients were collected by a standard questionnaire. Leprosy patients with any concomitant rheumatic disease were excluded. Serum samples were obtained from all participants and frozen at _20°C. Measurement of anti-CCP antibodies and IgM RF were performed by ELISA, using a commercial second-generation kit, and the latex agglutination test, respectively. Anti-CCP antibodies and IgM RF were detected in low frequencies (2.6 and 1.3%, respectively) in leprosy patients and were not associated with articular involvement. Among healthy individuals both anti-CCP antibodies and IgM RF were each detected in 3.4% of the subjects. In contrast, in the RA group, anti-CCP antibodies were present in 81.2% and IgM RF in 62.3%. In the present study, both anti-CCP antibodies and IgM RF showed good positive predictive value for RA, helping to discriminate between RA and leprosy patients with articular involvement. However, anti-CCP antibodies were more specific for RA diagnosis in the population under study.

Co-culture of chondrocytes and bone marrow mesenchymal stem cells in vitro enhances the expression of cartilaginous extracellular matrix components

Chondrocytes and bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are frequently used as seed cells in cartilage tissue engineering. In the present study, we determined if the co-culture of rabbit articular chondrocytes and BMSCs in vitro promotes the expression of cartilaginous extracellular matrix and, if so, what is the optimal ratio of the two cell types. Cultures of rabbit articular chondrocytes and BMSCs were expanded in vitro and then cultured individually or at a chondrocyte:BMSC ratio of 4:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:4 for 21 days and cultured in DMEM/F12. BMSCs were cultured in chondrogenic induction medium. Quantitative real-time RT-PCR and Western blot were used to evaluate gene expression. In the co-cultures, type II collagen and aggrecan expression increased on days 14 and 21. At the mRNA level, the expression of type II collagen and aggrecan on day 21 was much higher in the 4:1, 2:1, and 1:1 groups than in either the articular chondrocyte group or the induced BMSC group, and the best ratio of co-culture groups seems to be 2:1. Also on day 21, the expression of type II collagen and aggrecan proteins in the 2:1 group was much higher than in all other groups. The results demonstrate that the co-culture of rabbit chondrocytes and rabbit BMSCs at defined ratios can promote the expression of cartilaginous extracellular matrix. The optimal cell ratio appears to be 2:1 (chondrocytes:BMSCs). This approach has potential applications in cartilage tissue engineering since it provides a protocol for maintaining and promoting seed-cell differentiation and function.

Psychological stress alters the ultrastructure and increases IL-1β and TNF-α in mandibular condylar cartilage

Psychological factors can be correlated with temporomandibular disorders (TMDs), but the mechanisms are unknown. In the present study, we examined the microstructural changes and expression of proinflammatory cytokines in mandibular condylar cartilage of the temporomandibular joint (TMJ) in a psychological stress animal model. Male Sprague-Dawley rats (8 weeks old, 210 ± 10 g) were randomly divided into 3 groups: psychological stress (PS, N = 48), foot shock (FS, N = 24), and control (N = 48). After inducing psychological stress using a communication box with the FS rats for 1, 3, or 5 weeks, PS rats were sacrificed and compared to their matched control littermates, which received no stress and were killed at the same times as the PS rats. Body and adrenal gland weight were measured and corticosterone and adrenocorticotropic hormone levels were determined by radioimmunoassay. After hematoxylin-eosin staining for histological observation, the ultrastructure of the TMJ was examined by scanning electron microscopy. Transcription and protein levels of interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were evaluated by ELISA and semi-quantitative RT-PCR. The PS group showed a significantly higher adrenal gland weight after 3 weeks of stress and higher hormone levels at weeks 1, 3, and 5. Histopathological changes and thinning cartilage were apparent at weeks 3 and 5. In the PS group, TNF-α increased at 1, 3, and 5 weeks and IL-1β increased significantly after 1 and 3 weeks of stress, and then decreased to normal levels by 5 weeks. Psychological stress increased plasma hormone levels and RT-PCR indicated increased IL-1β and TNF-α expression in the TMJ in a time-dependent manner. These results suggest that cytokine up-regulation was accompanied by stress-induced cartilage degeneration in the mandibular condyle. The proinflammatory cytokines play a potential role in initiating the cartilage destruction that eventually leads to the TMDs.

Artrocentese da articulação temporomandibular: avaliação de resultados e revisão da literatura

OBJETIVO: Avaliar o efeito da artrocentese em relação à sintomatologia e movimentação mandibular em uma serie de pacientes com deslocamento anterior de disco e travamento mandibular. MATERIAIS E MÉTODOS: O estudo foi baseado nos dados pré e pós-operatório de pacientes através de exame clínico e radiográfico. A Escala Analógica Visual (EAV) foi usada para quantificar a dor no pré e pós-operatório. Foram avaliados 6 pacientes (12 articulações) tratados no Hospital Universitário Oswaldo Cruz (HUOC) com travamento mandibular (2 casos) e desarranjo interno (4 casos). O período médio de acompanhamento foi de 11,5 meses. RESULTADOS: A média de abertura bucal pré-operatória foi de 31,83mm e no pós-operatório foi de 36,50mm. A média de dor articular segundo a escala visual analógica encontrada foi de 7 e no pós-operatório foi de 4,3. CONCLUSÃO: A artrocentese mostrou-se efetiva na melhora da dor articular e na movimentação mandibular nesta série de casos.

Tratamento da síndrome da apnéia e hipopnéia obstrutiva do sono com aparelhos intrabucais

A síndrome da apnéia e hipopnéia obstrutiva do sono (SAHOS) é um distúrbio que atinge cerca de 4% da população adulta e que, além dos problemas sociais associados ao ronco e à sonolência diurna excessiva, é preocupante pelos quadros de hipertensão pulmonar e insuficiência cardíaca que pode desencadear. REVISÃO E DISCUSÃO: Através de uma revisão de literatura discutiu-se o uso de aparelhos intrabucais para o tratamento dessa patologia, destacando-se a eficácia e as limitações dessa terapia, os principais sintomas clínicos, os principais efeitos colaterais oclusais, o grau de colaboração e o índice de satisfação dos pacientes. CONCLUSÕES: Concluiu-se que a terapia com aparelhos intrabucais deve ser a de primeira escolha para o tratamento de SAHOS de média a moderada, sendo o desconforto dentário, articular e muscular, a hipersalivação e a xerostomia os sintomas clínicos mais freqüentes, com efeitos colaterais oclusais leves que normalmente não geram incômodos aos pacientes, com bom grau de colaboração e alto índice de satisfação.

Anquilose da articulação têmporo-mandibular

A anquilose pode ser definida como sendo a fusão das superfícies articulares e seu tratamento é um verdadeiro desafio devido à alta taxa de recorrência. OBJETIVO: Descrever seis casos clínicos tratados pela técnica da reconstrução articular, avaliar os resultados dessas cirurgias e fazer uma revisão da literatura. METODOLOGIA: A população estudada neste estudo retrospectivo foi obtida dos prontuários do hospital universitário e tinha que ter sido submetida a cirurgia para tratamento de anquilose por reconstrução aloplástica ou autógena entre os períodos de março de 2001 e outubro de 2005. Dados como a máxima abertura de boca (MAB), etiologia, tipo de anquilose e tratamento, e ocorrência de recidiva e lesão do nervo facial foram coletados no pré-operatório, através dos prontuários, e no pós-operatório, através de entrevista. RESULTADOS: A média da MAB no pré-operatório foi de 9,6mm (0 a 17mm) e no pós-operatório foi de 31,33mm (14mm a 41mm), não houve lesão do nervo facial e apenas em um caso houve recidiva da anquilose. CONCLUSÃO: A reconstrução da articulação com material autógeno ou alógeno, para o tratamento da anquilose da ATM se mostrou eficaz em relação à MAB pós-operatória, recidiva e função da articulação.

Potenciais evocados auditivos: estudo com indivíduos portadores de lúpus eritematoso sistêmico

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica sistêmica, de etiologia desconhecida, multifatorial, caracterizada imunologicamente pela presença de múltiplos auto-anticorpos, sendo as manifestações clínicas bastante polimórficas. Essa doença pode comprometer múltiplos órgãos e sistemas. Os comprometimentos mais comuns são: articular, cutâneo, vascular, renal, neurológico, cardíaco, gastrointestinal, hematológico, ocular e auditivo. OBJETIVO: Investigar a função auditiva central de indivíduos com Lúpus Eritematoso Sistêmico. MATERIAL E MÉTODO: Foi realizado estudo de série, no qual foram avaliados 60 indivíduos do sexo feminino, com idades entre 21 a 46 anos, sendo 30 no grupo controle e 30 no grupo pesquisa. Os participantes foram submetidos a Anamnese, Avaliação Audiológica (Audiometria Tonal, Logoaudiometria e Medidas de Imitância Acústica), e pesquisa dos Potenciais Evocados Auditivos de Curta (PEATE), Média (PEAML) e Longa Latências (PEALL). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente. RESULTADOS: Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos avaliados, em nenhuma das avaliações realizadas. CONCLUSÕES: Não há diferença nos Potenciais Evocados Auditivos de Curta (PEATE), Média (PEAML) e Longa Latência (P300) entre os indivíduos dos grupos controle e pesquisa.

A questão da "Internacional Fascista" no mundo das relações internacionais: a extrema direita entre solidariedade ideológica e rivalidade nacionalista

O objetivo do presente artigo é discutir a tensão entre a disputa nacionalista/solidariedade ideológica no relacionamento entre Estados e movimentos fascistas no período entre as duas guerras mundiais e como essa polaridade afetou as relações internacionais naquele período. A questão da chamada "Internacional fascista" (organização criada pelo fascismo italiano para articular e coordenar a relação inter-fascismos) é especialmente enfocada, por indicar exemplarmente os paradoxos dessa polaridade e seus efeitos no sistema internacional.

Reflexões sobre o Brasil e os desafios Pan-Amazônicos

O objetivo deste artigo é o estudo das interações regionais e desafios internacionais sobre a Pan-Amazônia, uma região considerada estratégica para o Brasil. Sua importância se verifica em múltiplos campos, com destaque para o ambiental e para o econômico - aliás, duas perspectivas que, mesmo não sendo excludentes, revelam-se de difícil compatibilização, sobretudo quando o assunto converge para a exploração dos diversos recursos naturais existentes na Pan-Amazônia e para o exercício da soberania nacional sobre os seus territórios. Mas o escopo temático do artigo é ainda mais amplo, haja vista que um dos principais objetivos do estudo é tentar articular as questões ambientais e econômicas conexas à Pan-Amazônia com aspectos políticos relacionados à segurança regional e nacional em torno da hileia, partindo do pressuposto que estamos diante de um quadro complexo apreendido em sua dimensão regional. Por fim, realiza-se um exercício sobre prováveis cenários envolvendo a Pan-Amazônia, tanto na perspectiva regional como na internacional.

Glucosamine and chondroitin sulfate in the repair of osteochondral defects in dogs - clinical-radiographic analysis

Among the proposed treatments to repair lesions of degenerative joint disease (DJD), chondroprotective nutraceuticals composed by glucosamine and chondroitin sulfate are a non-invasive theraphy with properties that favors the health of the cartilage. Although used in human, it is also available for veterinary use with administration in the form of nutritional supplement independent of prescription, since they have registry only in the Inspection Service, which does not require safety and efficacy testing. The lack of such tests to prove efficacy and safety of veterinary medicines required by the Ministry of Agriculture and the lack of scientific studies proving its benefits raises doubts about the efficiency of the concentrations of such active substances. In this context, the objective of this study was to evaluate the efficacy of a veterinary chondroprotective nutraceutical based on chondroitin sulfate and glucosamine in the repair of osteochondral defects in lateral femoral condyle of 48 dogs, through clinical and radiographic analysis. The animals were divided into treatment group (TG) and control group (CG), so that only the TG received the nutraceutical every 24 hours at the rate recommended by the manufacturer. The results of the four treatment times (15, 30, 60 and 90 days) showed that the chondroprotective nutraceutical, in the rate, formulation and administration at the times used, did not improve clinical signs and radiologically did not influence in the repair process of the defects, since the treated and control groups showed similar radiographic findings at the end of the treatments.