Serogroups, K1 antigen, and antimicrobial resistance patterns of Aeromonas spp. strains isolated from different sources in Mexico

A total of 221 strains of Aeromonas species isolated in Mexico from clinical (161), environmental (40), and food (20) samples were identified using the automated system bioMérieux-Vitek®. Antisera for serogroups O1 to 044 were tested using the Shimada and Sakazaki scheme. The K1 antigen was examined using as antiserum the O7:K1C of Escherichia coli. Besides, we studied the antimicrobial patterns according to Vitek AutoMicrobic system. Among the 161 clinical strains 60% were identified as A. hydrophila, 20.4% as A. caviae, and 19.25% as A. veronii biovar sobria. Only A. hydrophila and A. veronii biovar sobria were found in food (55 and 90% respectively) and environmental sources (45 and 10% respectively). Using "O" antisera, only 42.5% (94/221) of the strains were serologically identified, 55% (121/221) were non-typable, and 2.5% (6/221) were rough strains. Twenty-two different serogroups were found, O14, O16, O19, O22, and O34 represented 60% of the serotyped strains. More than 50% of Aeromonas strain examined (112/221) expressed K1 encapsulating antigen; this characteristic was predominant among Aeromonas strains of clinical origin. Resistance to ampicillin/sulbactam and cephazolin was detected in 100 and 67% of Aeromonas strain tested for their susceptibility to antibiotics. In conclusion, antibiotic-resistant Aeromonas species that possess the K1 encapsulating antigen and represent serogroups associated with clinical syndrome in man are not uncommon among Aeromonas strains isolated from clinical, food and environmental sources in Mexico.

The involvement of tetA and tetE tetracycline resistance genes in plasmid and chromosomal resistance of Aeromonas in Brazilian strains

This study analyzed the involvement of tetA and tetE genes in the tetracycline resistance of 16 strains of genus Aeromonas, isolated from clinical and food sources. Polymerase chain reactions revealed that 37.5% of the samples were positive for tetA, and also 37.5% were tetE positive. One isolate was positive for both genes. Only the isolate A. caviae 5.2 had its resistance associated to the presence of a plasmid, pSS2. The molecular characterization of pSS2 involved the construction of its restriction map and the determination of its size. The digestion of pSS2 with HindIII originated two fragments (A and B) that were cloned separately into the pUC18 vector. The tetA gene was shown to be located on the HindIII-A fragment by PCR. After transforming a tetracycline-sensitive strain with pSS2, the transformants expressed the resistance phenotype and harbored a plasmid whose size was identical to that of pSS2. The results confirmed the association between pSS2 and the tetracycline resistance phenotype, and suggest a feasible dissemination of tetA and tetE among strains of Aeromonas. This study suggests the spreading tetA and tetE genes in Aeromonas in Brazil and describes a resistance plasmid that probably contributes to the dissemination of the resistance.

Isolamento de Aeromonas hydrophila em girinos de rã-touro na metamorfose

O objetivo deste trabalho foi isolar o agente causador da doença-da-perna-vermelha em girinos de Rana catesbeiana em fase de transformação. Coletaram-se 20 girinos, na fase G4, apresentando prostração, anorexia, pele ressecada, pernas posteriores hemorrágicas e natação errática. Amostras do coração, fígado e partes da perna foram inoculadas em meio de cultura ágar triptona de soja e ágar sangue, a 25°C, por 48 horas. Aeromonas hydrophila foi a principal causa do surto de mortalidade. A fim de avaliar o efeito dessa bactéria nos girinos, realizou-se inoculação por via oral e intraperitoneal de 10(6) unidades formadoras de colônia por mililitro, e verificou-se o aparecimento de petéquias hemorrágicas na boca e nos órgãos internos.

Enteropatógenos bacterianos em peixes criados em uma estação de reciclagem de nutrientes e no ecossistema relacionado

Avaliou-se a presença de enteropatógenos bacterianos em 72 amostras obtidas a partir de peixes criados em sistema de reciclagem de nutrientes, em estação experimental, no município de Petrópolis, RJ. Paralelamente, foram obtidas amostras do lodo utilizado como adubo orgânico e da cama de aves localizada na área interna dos tanques criatórios. A metodologia empregada incluiu o pré-enriquecimento em Caldo Lactosado e Água Peptonada Tamponada, seguido de enriquecimento em Água Peptonada Alcalina (pH 8,4-8,6) e subseqüente semeadura em Agar GSP para o isolamento de Aeromonas spp. e Plesiomonas shigelloides. Para os demais microrganismos, alíquotas de 1ml foram inoculadas nos meios de enriquecimento Caldo Rappaport-Vassiliadis e Caldo Tetrationato de Kauffmann com posterior semeadura em Agar Entérico Hektoen e Agar Salmonella-Shigella. Com a finalidade de monitorar o índice de coliformes fecais, visando conhecer a qualidade da água para este sistema, paralelamente à coleta de peixes foram avaliadas amostras de água dos tanques criatórios e de macrófitas. No cômputo geral foram isoladas 116 cepas de enteropatógenos bacterianos, destacando-se Aeromonas spp (67,2%) com 9 espécies (A. veronii biogrupo sobria, A. hydrophila, A. sobria, A. trota, A.eucrenophila, A. veronii biog. veronii, A. media, A. caviae e A jandaei) e Aeromonas spp., seguido de Edwardsiella tarda (16,4%), Plesiomonas shigelloides (12,9%) e Salmonella (3,4%). A análise da qualidade da água empregada no sistema revelou, de um modo geral, índices mais elevados de coliformes fecais nos tanques dos peixes (>1800/100 ml).

Molecular characterization of virulence factors in Aeromonas hydrophila obtained from fish

Multiple factors can be involved in the virulence processes of Aeromonas hydrophila. The objective of the present paper was to verify the presence of aerolysin, hidrolipase, elastase and lipase virulence genes through the polymerase chain reaction (PCR) in A. hydrophila isolates obtained from fish of the São Francisco River Valley, and to evaluate virulence according to the presence of these genes in Nile tilapia fingerlings. One hundred and fourteen isolates from the bacteria were used. DNA was heat extracted and PCR undertaken using specific primers described in the literature. For in vivo tests Nile tilapia fingerlings were used. From the PCR tests, negative isolates for all genes tested were selected, positive isolates for two genes (aerolysin and elastase) and positive for the four genes tested. These were inoculated at a concentration of 10(8) UFC/ml into the tilapias, considered as treatments; another group of animals was used as control (with inoculation of saline solution). In all, 12 distinct standards regarding the presence of virulence factors in isolates from A. hydrophila, were observed. Of the 114 isolates analyzed, 100 (87.72%) presented at least one of the virulence factors under study. The virulence factors were widely distributed among the A. hydrophila isolates. Aerolysin was the most frequent virulence factor present in the isolates analyzed. A. hydrophila led to the mortality of the Nile tilapia fingerlings, regardless of the absence or quantity of virulence genes tested.

Ascophyllum nodosum in the diet of tilapia (Oreochromis niloticus) and its effect after inoculation of Aeromonas hydrophila

The objective of this study was to evaluate the effect of Ascophyllum nodosum brown seaweed meal (FAM) on the health of Nile tilapia submitted to inoculation with Aeromonas hydrophila. The experiment was conducted for a period of 40 days using 120 Nile tilapia fingerlings, with age of 40 days, distributed in 20 tanks. A diet including Ascophyllum nodosum seaweed meal at 20g.kg-1 and a control diet (without FAM) were provided which constituted the treatments. Thirty days after beginning the experiment, A. hydrophila was inoculated by bacterial inoculum diluted in sterile saline solution at a concentration of 10(6) CFU ml-1. Except for the width, which was greater for the treatment with the provision of FAM (P<0.05), there was no influence on the performance parameters of the fingerlings, but the occurrence of lesions in animals inoculated with A. hydrophila and fed with FAM was lower and they also exhibited a decline in the lesions in a shorter period of time than the control group. FAM prevents hepatopancreatic congestion in infected animals. Ascophyllum nodosum brown seaweed meal reduced the number of lesions in fish in a shorter time when compared to the control group.

Formação de biofilme em aço inoxidável por Aeromonas hydrophila e Staphylococcus aureus usando leite e diferentes condições de cultivo

O objetivo desta pesquisa consistiu em avaliar a formação de biofilme em aço inoxidável por Aeromonas hydrophila e Staphylococcus aureus usando leite e diferentes condições de cultivo. As variáveis em estudo consistem no cultivo monoespécie e combinado, dos referidos microrganismos e nas temperaturas de 4, 7 e 18 °C. Recipientes contendo 1000 mL de leite, densidade populacional de 10(5) UFC.mL-1 de cada microrganismo e 10 cupons de aço inoxidável (10 × 20 mm) foram lacrados e armazenados, sob agitação de 60 rpm, por um período de 10 dias. As análises ocorreram a cada 48 horas. Células sésseis de A.hydrophila e S. aureus foram enumeradas através do plaqueamento seletivo em ágar m-Aeromonas selective e Baird-Parker, respectivamente. Estudos sobre o tempo de geração, enumeração de células planctônicas e observação dos cupons através da microscopia eletrônica de varredura foram conduzidos. S. aureus, em monocultivo, formou biofilme a 18 °C e a 7 °C. Para 4 °C, foi observado um processo de adesão. A presença de A. hydrophila reduziu o desempenho de S. aureus. Nesta condição de cultivo multiespécie houve formação de biofilme a 18 °C. A. hydrophila, tanto em monocultivo quanto em presença de S. aureus, formou biofilme em todas as condições pesquisadas.

Species and serovars of enteropathogenic agents associated with acute diarrheal disease in Rosario, Argentina

We report the most frequent species and serovars of enteropathogenic organisms in Rosario from 1985 to 1993. Enteropathogenic Escherichia coli was the most prevalent agent affecting 144/570 (25.2%) children; 0111 represented 41.8%, 055: 13.6%, 0119: 12.7%. Among enterotoxigenic E. coli (ETEC) the most frequent were ETEC-ST 0128:H21 and 0153:H45. Shigella spp were isolated in 8.8%; S.flexneri: 7%, principally type 2 (59.5%); S. sonnei: 1.6%, and S. dysenteriae type 2: 0.2%. Campylobacter spp were found in 6.1% of patients; C.jejuni: 4.6%; C. coli: 1.4% and C. lari: 0.2%; except groups 0 13,50 and 0 4 (2 cases each), no predominant serogroups were found. Salmonella was isolated in 2.8% of cases, being the predominant serovar S. typhimurium until 1986, but a dramatically increase of cases due to S. enteritidis was observed since 1987. There was 1.9% of Aeromonas spp and 2 cases due to Vibrio cholerae non 0-1. No Yersinia was found. In patients with gastroenteritis due to Shigella, Campylobacter, Salmonella, or EPEC as the unique pathogen, leukocytes were observed in the faeces in 70%, 50%, 20%, and 10% of cases respectively.

Enzymatic characterization of Vibrio alginolyticus strains isolated from bivalves harvested at Venice Lagoon (Italy) and Guanabara Bay (Brazil)

The aquatic ecosystem is the natural habitat of microorganisms including Vibrio and Aeromonas genus which are pathogenic to human and animals. In the present investigation the frequency of these bacteria and the enzymatic characteristics of 34 Vibrio alginolyticus strains isolated from bivalves harvested in Venice Lagoon (Italy) and Guanabara Bay (Brazil) were carried out from November 2003 to February 2004. The mussels' samples were submitted to enrichment in Alkaline Peptone Water (APW) added with 1% of sodium chloride (NaCl) and APW plus 3% NaCl incubated at 37 ºC for 18-24h. Following the samples were streaked onto TCBS Agar (Thiossulfate Citrate Bile Sucrose Agar) and the suspected colonies were submitted to biochemical characterization. Also, the Vibrio alginolyticus strains were evaluated to collagenase, elastase and chondroitinase production. The results showed the isolation of 127 microorganisms distributed as follows: 105 Vibrio strains such as V. alginolyticus (32.4%), V. harveyi (19%) and V. parahaemolyticus (7.6%), 20 Aeromonas strains and two Plesiomonas shigelloides were the main pathogens isolated. We observed the production of the three enzymes from V. alginolyticus strains considered as the main virulence factors of the bacteria, especially in cases of human dermatological infection.

Deterioração bacteriológica do jaraqui Semaprochilodus spp. capturado no estado do Amazonas e conservado em gelo

Neste trabalho foram analisados 73 espécimes de jaraqui Semaprochilodus spp. conservados em caixas de poliestireno expandido entre camadas de gelo. Foram realizadas as seguintes análises: avaliação sensorial pela tabela de Torry modificada e pelo índice de qualidade por deméritos; determinação do pH e das bases voláteis totais (N-BVT); contagem total dos microrganismos aeróbios psicrófilos a 20 ºC por 4 dias, psicrotróficos a 7 ºC por 10 dias, dos mesófilos a 37 ºC por 2 dias; contagem, isolamento e identificação das bactérias Aeromonas sp. Bacillus sp. e Pseudomonas sp. a 20 ºC por 24 horas e de Plesiomonas sp. a 37 ºC por 2 dias. O jaraqui se manteve em condições de consumo, pela avaliação sensorial, por 18 e 21 dias. O pH e as bases voláteis totais não foram bons indicadores de qualidade; as contagens totais de psicrófilos, psicrotróficos e mesófilos não apresentaram diferença significativa e as bactérias não apresentaram comportamento deteriorador pela ausência da produção de H2S.

Bactérias gram negativas resistentes a antimicrobianos em alimentos

A partir de 154 espécimens de alimentos, representados por hortaliças (alface), leite e merenda escolar, obteve-se o isolamento e identificação de 400 amostras de bacilos Gram negativos. Esta amostragem se distribuiu em 339 enterobactérias (Escherichia, Shigella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia e Proteus) e 61 de gêneros afins (Acinetobacter, Flavobacterium, Aeromonas e Pseudomonas). Submetendo-se as culturas aos antimicrobianos: sulfadiazina (Su), estreptomicina (Sm), tetraciclina (Tc), cloranfenicol (Cm), canamicina (Km), ampicilina (Ap), ácido nalidíxico (Nal) e gentamicina (Gm), observou-se apenas seis estirpes sensíveis a todas as drogas e sensibilidade absoluta à Gm. A predominância dos modelos Su (27,6%) e Su-Ap (39,6%) incidiu nas enterobactérias, enquanto que, 18,0% para Ap e 9,8% para Su-Ap foram detectados nos gêneros afins. Para caracterização da resistência foram realizados testes de conjugação e a totalidade das culturas não revelou transferência para o gene que confere resistência ao ácido nalidíxico. Relevantes são as taxas de amostras R+ observadas nos bacilos entéricos, oscilando em torno de 90% (leite e merenda escolar) e alface, em torno de 70%

Prevalence, species differentiation, haemolytic activity, and antibiotic susceptibility of aeromonads in untreated well water

The use of untreated water for drinking and other activities have been associated with intestinal and extraintestinal infections in humans due to Aeromonas species. In the present study aeromonads were isolated from 48.7% of 1,000 water samples obtained from wells and other miscellaneous sources. Aeromonas species were detected in 45% of samples tested in spring, 34.5% in summer, 48% in autumn and 60% of samples tested in winter. Speciation of 382 strains resulted in 225 (59%) being A. hydrophila, 103 (27%) A. caviae, 42 (11%) A. sobria and 11 (3%) atypical aeromonads. Of 171 Aeromonas strains tested for their haemolytic activity, 53%, 49%, 40% and 37% were positive in this assay using human, horse, sheep and camel erythrocytes respectively. The results obtained indicate that potentially enteropathogenic Aeromonas species are commonly present in untreated drinking water obtained from wells in Libya (this may also apply to other neighbouring countries) which may pose a health problem to users of such water supplies. In addition, ceftriaxone and ciprofloxacin are suitable drugs that can be used in the treatment of Aeromonas-associated infections, particularly in the immunocompromised, resulting from contact with untreated sources of water.

Crescimento, digestibilidade e resistência à infecção por patógeno em tilápia-do-nilo alimentada com probióticos

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação da dieta com os probióticos Lactobacillus plantarum e Saccharomyces cerevisiae, no desempenho zootécnico, digestibilidade e na resistência à infecção por patógeno, em alevinos de tilápia-do-nilo. Foram realizados três ensaios. No primeiro, durante 55 dias, seis grupos de 30 alevinos (2,4±0,5 g) receberam suplementação com probióticos, e outros três grupos não receberam suplementação. No final desse período, no segundo ensaio, os peixes foram desafiados com Aeromonas hydrophila, e a sobrevivência foi avaliada por 96 horas. No terceiro ensaio, com oito peixes por tanque (230,0±10,0 g), avaliou-se a digestibilidade da dieta após a suplementação com os probióticos. A suplementação probiótica melhora significativamente o ganho de peso, a conversão alimentar, as taxas de retenção proteica e energética, assim como a resistência dos animais a Aeromonas hydrophila, após a infecção. A suplementação com Saccharomyces cerevisiae à dieta de tilápia-do-nilo melhora significativamente a digestibilidade da proteína, energia e matéria seca.

Desempenho produtivo e respostas fisiopatológicas de tambaquis alimentados com ração suplementada com β-glucano

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do imunoestimulante β-glucano na dieta do tambaqui (Colossoma macropomum) sobre o desempenho produtivo, as respostas fisiológicas e imunológicas, e a resistência ao desafio com Aeromonas hydrophila. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 5x2, com cinco níveis de β-glucano na dieta (0, 0,1, 0,2, 0,4 e 0,8%) e dois tempos de amostragem (antes e após o desafio com A. hydrophila), com três repetições. Os peixes (28,65±0,49 g; 12,14±0,07 cm) foram alimentados, por 60 dias, com dieta (28% de proteína bruta) suplementada com preparação comercial de β-glucano. Após o período de alimentação, avaliou-se o desempenho produtivo, e os peixes foram desafiados com A. hydrophila. Os parâmetros hematológicos e imunológicos (concentração e atividade de lisozima) foram avaliados antes e após o desafio bacteriano. Após o desafio bacteriano, observouse a ocorrência de anemia normocítica-normocrômica. A suplementação com β-glucano não alterou a concentração nem a atividade da lisozima; porém, a menor concentração de β-glucano (0,1%) favoreceu maior sobrevivência para a espécie quando desafiada com Aeromonas hydrophila. A suplementação de β-glucano não exerce influência sobre o desempenho produtivo e nem sobre os parâmetros hematológicos do tambaqui.

Carga microbiana de trocartes reprocessáveis após laparoscopias ginecológicas

OBJETIVO: identificar a carga microbiana presente em trocartes reprocessáveis usados nas laparoscopias ginecológicas. MÉTODOS: estudo exploratório descritivo. Um total de 57 trocartes, sendo 30 com 10 mm de diâmetro e 27 com 5 mm, foram recolhidos na sala de operação, imediatamente após o ato cirúrgico, e colocados em recipiente esterilizado onde foram adicionados 250 mL de água destilada estéril. Foi feita agitação dos trocartes para desprendimento de partículas e obtenção do lavado a ser analisado. Realizou-se filtração por meio de membrana de celulose 0,22 µm, colocadas, com pinça esterilizada, em placas ágar sangue. Após incubação, foi feita a análise microbiológica para contagem de unidades formadoras de colônias e posterior identificação do micro-organismo, usando-se técnicas laboratoriais padronizadas. RESULTADOS: a carga microbiana foi recuperada em 47,4% dos trocartes analisados. Destes, 45,6% apresentou crescimento de 1 a 100 unidades formadoras de colônias. Foram identificados 14 tipos de micro-organismos, dentre os quais, Staphylococcus coagulase negativo (28%) e Bacillus sp (21%) foram isolados com maior frequência. Identificou-se também Aeromonas hydrophila, Alcaligenes sp, Candida parapsilosis e enterobactérias. CONCLUSÕES: o estudo demonstrou que o desafio microbiano enfrentado pelos operadores responsáveis pela limpeza e esterilização dos trocartes é baixo quando comparado com o desafio imposto pelos indicadores biológicos; no entanto, não se pode inferir que os riscos de complicações infecciosas sejam mínimos para pacientes.