Antimicrobial resistance and investigation of the molecular epidemiology of Listeria monocytogenes in dairy products

INTRODUCTION: Listeria monocytogenes is a ubiquitous microorganism in nature and is responsible for listeriosis, an infectious disease caused by consumption of contaminated food. METHODS: Molecular characterization was performed on 19 strains of Listeria monocytogenes (serovars 1/2a, 1/2b, 4b and 4c), isolated from dairy products in Rio Grande do Sul, Brazil. The molecular techniques applied were random amplification of polymorphic DNA and restriction enzyme analysis. In addition to the molecular analysis, the antimicrobial resistance profile was determined. RESULTS: The strains studied showed a low degree of diversity. In relation to the antimicrobial resistance profile of those microorganisms from the samples analyzed, all of them were susceptible to the antimicrobials tested. CONCLUSIONS: The molecular techniques that were used presented good discriminatory power for the strains studied. Furthermore, all of the samples that were analyzed were susceptible to the antimicrobials tested.

Contribuição para o controle biológico da broca da cana de açúcar

Em 5 meses e 20 dias, obtivemos 4 gerações de Metagonis lylum minense Towns, correspondentes a um total de 662 adultos. O ciclo evolutivo completo, varia de 31 a 51 dias com evolução média de 38 dias a 18,9°C. As porcentagens de parasitismo natural em culturas de cana e de milho foram respectivamente de 23,1 e 37,3%. Libertaram-se 526 moscas, obtendo-se um parasitismo de 48,3% para cana de açúcar e 61,1% no milho. Em 12 meses foram criados em laboratório 10 gerações de Lixophaga diatraeae Towns, num total de 915 adultos. O ciclo evolutivo completo, de emergência a emergência do adulto, varia de 30 a 39 dias nos meses de Setembro a Abril, sendo a evolução média de 32,5 dias a 21,4°C e de 33 a 43 dias nos meses de Maio a Agosto com evolução média de 36 dias a 16.9°C. No campo foram libertados 262 adultos de Lixophaga. Do total, 139 distribuídos em cultura de milho (Lote A) e os restantes, em cultura de cana (Lotes B e C). Recuperamos 76 pupários vivos e 38 vazios. A porcentagem total de parasitismo verificado foi de 28,7%. Temos recuperado diversos pupários após um ano das primeiras libertações (1951), o que vem demonstrar que a Lixophaga já se estabeleceu nesta região. Nos meses de Maio a Agosto, a capacidade larval torna-se mais reduzida devido a baixa temperatura. Nesse período, deve- se conservar os adultos em ambiente cuja temperatura seja de 22 a 25°C, a fim de que os mesmos não paralisem sua reprodução.No período da gestação, a Lixophaga demonstrou ser mais resistente do que as outras duas espécies nativas. O potencial de reprodução da Metagonistylum e da Parathersia é maior do que a da Lixophaga. Na técnica de criação e conservação da broca parasitada, utilizamos pontas de cana introduzidas em recipientes contendoágua, uma vez que os roletes são de efêmera duração e precisam ser substituídos constantemente O ciclo médio de Metagonistylum sendo de 38 dias, conforme determinamos e o de Paratheresia de 47 dias de acordo com o trabalho de SOUZA (7), concluímos que o ciclo médio de Lixophaga é menor comparando àquelas espécies. Embora, os parasitos da broca, sejam na natureza, hiper parasitados, em nada vem alterar esse método, um vez que quando o parasito destruir completamente a broca e passar ao estado de prê-pupa, observamos pelas experimentações, que somente nessa fase poderá vir a ser hiperparasitado e assim mesmo em porcentagem insignificante, não indo além de 5%. Pela criação sistemática desses parasitos em larga escala e sua distribuição periódica na cultura de cana, não dependendo, portanto, de sua multiplicação total na natureza, anula-se o efeito do hiperparasitismo e consegue-se reduzir grandemente a infestação ocasionada pela broca.

Influência de alguns métodos de processamento na qualidade da maça em pedaços: III - variedade Rome Beauty

Este trabalho teve como objetivo o estudo da influência de armazenamento prévio, de tratamentos para evitar o escurecimento enzímico (branqueamento, SO2 e ácido ascórbico) e de métodos de processamento (appertização, congelação e liofilização) na qualidade da maçã em pedaços da variedade Rome Beauty. Após seu recebimento na planta piloto, metade das frutas foi imediatamente processada, permanecendo o restante armazenado por seis semanas a 4,4°C para ser posteriormente processado. O melhor tratamento para a variedade em estudo, foi a combinação branqueamento-congelação para todos os atributos de qualidade, exceto para cor com seis semanas de armazenamento prévio, em que a combinação SO2-liofilização foi superior. De um modo geral, a congelação foi o método de processamento mais adequado. Para a congelação, o branqueamento e o SO2 foram considerados os melhores tratamentos para evitar o escurecimento enzímico. O armazenamento prévio teve alguma influência na qualidade da maçã em pedaços, de modo que, as amostras correspondentes à parte não armazenada foram superiores para quase todos os atributos de qualidade.

Efeitos da vernalização e de fitoreguladores no desenvolvimento de Lilium longiflorum Thunb

Bulbos de lírio foram mantidos a 22°C ou vernalizados a 4º ou 8°C por duas semanas, sendo então imersos por 12 horas em soluções de ácido giberélico (GA) 1000 ppm ou ácido indolilacético (IAA) 1000 ppm, antes de serem plantados em condições de campo. Tratamento dos bulbos a 4°C, durante duas semanas, atrasou a emergência das brotações. Este atraso devido a vernalização foi removido quando os bulbos foram imersos por 12 horas em soluções de GA ou IAA 1000 ppm. Vernalização e fitoreguladores não afetaram a altura nem a qualidade das plantas de lírio. A vernalização dos bulbos a 4º ou 8°C, durante duas semanas, reduziu o número de hastes produzidas. Nao se verificaram diferenças entre os tratamentos em relação ao período de tempo para a ocorrência da antese floral. A qualidade da inflorescência foi melhorada pela vernalização do bulbo a 8°C durante duas semanas ou por imersão durante 12 horas em solução de IAA 1000 ppm.

Efeitos da vernalização e de fitoreguladores no desenvolvimento de Gladiolus grandiflorus

Bulbos de gladíolo foram mantidos a 22°C ou vernalizados a 4º ou 8°C por duas semanas, sendo então imersos por 24 horas em soluções de ácido giberélico (GA) 1000 ppm ou ácido indolilacético (IAA) 1000 ppm, antes de serem plantados em condições de campo. A época de emergência das brotações não foi afetada pelos tratamentos utilizados. A vernalização dos bulbos de gladíolo a 4°C, por duas semanas, promoveu aumento na altura das plantas em relação ao controle mantido a 22°C. Bulbos imersos por 24 horas em solução de GA 1000 ppm originaram plantas com menor número de folhas, sendo que bulbos vernalizados a 4°C, durante duas semanas, originaram plantas com maior número de folhas. A vernalização dos bulbos a 4º ou 8°C, por duas semanas, melhorou a qualidade das plantas de gladíolo. Não ocorreram diferenças nas datas da abertura das flores entre os tratamentos. A qualidade floral foi melhorada pela vernalização dos bulbos de gladíolo a 4º ou 8°C, durante duas semanas.

Desenvolvimento de Meloidogyne exigua Goeldi, 1887, em raízes de cafeeiros, em três ambientes

Com o objetivo de se obter informações sobre o desenvolvimento de Meloidogyne exigua Goeldi, 1887, em raízes de cafeeiro (Coffea arabica L.) cv. Mundo Novo, em três ambientes, plântulas no estágio do primeiro par de folhas verdadeiras foram transplantadas para copos plásticos com 25O ml de solo. Trinta dias depois, cada muda foi infestada com 600 larvas pré-parasitas e transferidas para as diversas condições de estudo: casa de vegetação, sala de temperatura constante e próximo de plantas adultas num cafezal. As raízes foram coletadas cada dois dias, coloridas e dissecadas, sendo os exemplares de M. exigua classificados de acordo com o estádio de desenvolvimento. Os resultados permitiram concluir que o desenvolvimento de M. exigua foi influenciado pela temperatura, e, que da penetração das larvas às fêmeas com ovos foram necessários, respectivamente, 25,3 dias à temperatura média de 25,8°C, 37,3 dias a 22,1°C e 38 dias a 22,4ºC, para a casa de vegetação, sala de temperatura constante e cafezal. A temperatura base estimada a partir dos resultados obtidos pelo método do coeficiente de variação foi 15°C. Foram necessárias, em média, 6580 unidades de calor, acima de 15°C, para M. exigua completar o seu desenvolvimento.

Growth, molt and survival of Palaemonetes argentinus (Decapoda, Caridea) under different light-dark conditions

Growth, survival and molting rate in Palaemonetes argentinus Nobili, 1901 were compared under different light-dark conditions. During 80 days, 150 immatures of both sexes (initial mean weight 0.09±0.002g), from Los Padres lagoon, Mar del Plata, Argentina, were maintained in aquaria at 19±0.4°C under three light conditions: 0:24, 10:14 and 13:11 (L-D). They were fed daily on an artificial diet (45% proteins, 17.2% lipids, 7% water, 7% ash). Good weight increment was obtained with the three treatments, finding a positive linear correlation between mean weight and time (0:24, r=0.97; 10:14, r=0.99; 13:11, r=0.98). There were no significant differences in the percentage increment in mean weight among the treatments (0:24, 19.3%; 10:14, 29.3% and 13:11, 26.5%) (p<0.05). Molting rate was significantly higher at a long-day photoperiod (MR=1.7) than at a short-day (MR=0.6) or continuous dark condition (MR=0.3) (p<0.05). The lowest survival was found in animals maintained under 13:11 L-D conditions (77%), being statistically different of the other two treatments (92% and 89% at 10:14 and 0:24, respectively) (p<0.05). These results suggest that the best growth and survival in P. argentinus result with a 10:14 L-D cycle, and that the growth is less affected by photoperiod than molting rate and survival.

Lactacidemia: métodos de dosagem do ácido lático

A critical study of three methods for the determination of lactic acid (EDWARDS, MENDEL & GOLDSCHEIDER, MILLER & MUNTZ) is presented and some modifications are proposed. It was shown t hat more accurate results could be obtained with Edward's technic when an Iena glass filter is connected with the absorption tube. Before the dropping of the permanganate solution it is necessary to pass a current of air through the reaction flask to avoid the oxidation of the non-lactic acid substances which interfere with the reaction. The absorption tube must be maintained at 18°C during the destillation and the titration of the bisulphite binding aldehyde at 4°C. When the sample contains more than 5 mg it is useful to work with greater quantities of the bisulphite. More permanganate is consumed when the lactic acid concentration is higher. The sensivity of the method permits the titration of 0.04 mg to 5 mg of lactic acid in the sample. The calculated error of the method gave 0.018 % and the normal values for blood determined in 20 human cases averaged 10.30 mg per 100 ml (Table VI). MENDEL and GOLDSCHEIDER'S method was modified in the following details: Somogyis deproteinization was performed instead metaphosphoric acid as in the original method; to avoid the evaporation of the acetic aldehyde during the heating time with sulfuric acid a special glass stopped tube is proposed (Fig. 2). The reaction with sulfuric acid and veratrol is performed in an ice bath. Blood proteins precipitants were tried and Somogyi's lattest tecnic showed better results (Table V). Colorimetric readings were done in the PULFRICH photometer using filter S 53 and a 10 mm cup. The method is accurate within an error of 0.23 % and samples of 5 to 70 microg. could be easily determined. Normal values for human blood averaged 10.78 mg per 100 ml. More accurate results were obtained with the technic of MILLER & MUNTZ. Slight modifications were introduced: deproteinization with copper sulfate and sodium tungstate; satured p-hydroxydiphenyl solution according to KOENEMANN which is stable for 5 months when stored in the ice-box. Using the PULFRICH step-photometer the error is 0.17% with samples varying from 0.1 to 10 microg. of lactic acid. The filter employed was S 57 with the 5 mm cup. The method was adapted to 0.1 ml of blood. Normal values for human blood gave an average of 10.58 mg per 100 ml.

Ação do radium sôbre o vírus da Coriomeningite linfocitária benigna

O presente trabalho faz parte de uma seqüência iniciada em 1953 com a verificação do efeito dos raios X sôbre o vírus da gripe em que observamos que os mesmos, em doses fracas, tem aumentado o seu poder patogênico para camundongos. Posteriormente, verificamos a ação do radium sôbre o vírus da gripe e da poliomielite. Neste último caso, o vírus irradiado mostrou-se ativo durante maior número de dias. Nas pesquisas aqui referidas, submetemos o vírus da coriomeningite linfocitária benigna a ação do radium, usando quatro agulhas de 1 mg desse elemento em dispositivo que idealizamos para êste fim. Depois de irradiada, foi a suspensão de vírus diluida a 10*-1, 10*-2 e 10*-3 para as inoculações em camundongos, juntamente com as diluições testemunhas. Observamos que o vírus resistiu pelo menos 264 dias, à temperatura de 4ºC. Quanto às alterações do poder patogênico provocadas pelo radium verificamos que o mesmo não se altera após 24 horas de irradiação. Diminue após 8 dias para aumentar, de modo seguro, após 20 e 33 dias. Iguala-se ao testemunha depois de 78 dias.

The use of dacron plates for DOT enzyme-linked immunosorbent assay (DOT-ELISA)

Dacron (polyethylenetherephthalate) is proposed as a matrix for dot-ELISA procedures, as an alternative to nitrocellulose. Plates of dacron were partially hydrazinolyzed and hydrazide groups introduced were converted to azide groups. The derivative dacron-antigen was covalently linked on to the plates through these azide groups. The derivative dacron-antigen was exaustively washed according to CROOK and antigen was still fixed onto the plates. Protein F1A purified from Yersinia pestis was used as a model. Triration of sera from immunized and non immunized rabbits against this protein was carried out by employing the dot-ELISA method. No significant difference was observed using dacron-antigen and nitrocellulose-antigen preparations. However, both procedures showed to have a significant better performance in comparasion with the passive hemagglutination method. The specificity and reproductibility of the dot-ELISA assay using both preparations showed a similar behaviour. Nitrocellulose preparation was stable at 4ºC, 28ºC and -20ºC for 90 days, whereas the dacron-antigen derivative was stable only when stored at 4ºC. Dacron-antigen derivative could be re-used when the spot developing was proceeded using 4-chloro-1-naphtol as substrate.

Inhibition of gastric secretion by a water extract from Baccharis triptera, Mart

Baccharus triptera Mart, is a widespread Compositae used in Brazilian folk medicine to treat gastrointestinal disturbances, rheumatic disease, mild fever, diabetes and as an anti-helminthic. Water extract of small branches of the plant (WE) administered to mice and rats (0.1 to 2 g/Kg, p.o) did not alter spontaneous motor activity, sleeping time induced by barbiturates or the tailflick response in mice. The extract decreased by 40 por cento the number of writhings induced by 0.8 por cento scetic acid, i.p., but did not influence paw edema induced by carrageenan or dextran in rats WE (2g/Kg, p.o.) decreased the intestinal transit of charcoal in mice by 20//. Gastric secretion in pylorus ligated rats was reduced after treatment with WE (1 and 2 g/Kg. i.p. or intraduodenal and the gastric pH was raised. The extract (1 g/Kg, p.o.) prevented gastric ulcers induced in rats by immobilization at 4ºC, but not those induced by indomethacin (10 mg/Kg, s.c.). The results indicate that WE may relieve gastrointestinal disorders by reducing acid secretion and gastrointestinal hiperactivity. Neither analgesic nor anti-inflammatory activities were detectable.

The epidemiology of malaria in Prábis, Guinea-Bissau

This article reports upon a community survey of malaria in Prábis, Guinea-Bissau. A house to house census of the population was initially carried out from August to December 1991(rainy season). After completing the census of each village, the population was invited to come, a week later, to a central point, where they were medically examined and finger-prick blood samples were collected for epidemiological characterization of the malaria situation in the area. The blood films of the one single village were used to compare the sensitivity and specificity of Polymerase Chain Reaction (PCR) with optical microscopy detection of parasites. In another village, the occurrence of parasitaemia was compared in children with and without fever. During the dry season, from March to June 1992, the population in each village was again invited to come to a central point. Some of the field procedures were repeated. The study revealed Prábis as an administrative Sector of Guinea-Bissau with endemic malaria, mostly due to Plasmodium falciparum, but with a significant rate of mixed infections. Active transmission occurred throughout the year, but it was more intensive during the rainy season and in the northwestern quadrant of the Sector. The level of endemicity of the villages varied from hypo to holoendemic. The factors associated with the differences among villages included village size and predominant economic activity (closeness to rice fields). The transmission paradigm was, most likely, a mixture of malaria of the African wet Savannah and malaria associated with irrigated paddy fields. PCR proved to be a sensitive method with low specificity during the dry season. Pyraexia of 37.4ºC or higher in children aged 2-9 years is not a sensitive indicator of parasitaemia but, it is highly specific and it has a clinically useful predictive value.

Properties of ß-lactamase from Neisseria gonorrhoeae

ß-lactamase activity was studied in Neisseria gonorrhoeae strains. Optimum temperature was found to be 37°C. The enzyme was inactivated at temperatures higher than 60°C, but remained active during storage at low temperatures (4°C, -30°C and -70°C) for two months. Enzyme activity was observed within a pH range of 5.8-8.0, while the optimum pH was 7.0-7.2. Addition of Ni2+, Fe2+, Fe3+, Mn2+ and p-chloromercurybenzoate to the reaction buffer exerted a negative effect upon the activity, whereas Hg2+ and ethylene diamine tetra-acetic acid produced complete inhibition. These results would indicate the presence of -SH groups at the catalytic site of the enzyme.

Aspects of the Maintenance of the Life Cycle of Fasciola hepatica in Lymnaea columella in Minas Gerais, Brazil

Fascioliasis is a parasitic disease of domestic ruminants that occurs worldwide. The lymnaeid intermediate hosts of Fasciola hepatica include Lymnaea columella, which is widely distributed in Brazil. A colony of L. columella from Belo Horizonte, MG, was reared in our laboratory to be used in studies of the F. hepatica life cycle, the intermediate host-parasite relationship and development of an anti-helminthic vaccine. In the first experiment 1,180 snails were exposed to miracidia of F. hepatica eggs removed from the biliary tracts of cattle from the State of Rio Grande do Sul. In the second and third experiments the snails were exposed to miracidia that had emerged from F. hepatica eggs from Uruguay, maintained in rabbits. The rates of infection in the first, second and third experiments were 0, 42.1 and 0% respectively. Over 15,806 metacercariae were obtained and stored at 4ºC. Four rabbits weighing 1.5 kg each were infected with 32-44 metacercariae and two with 200. Three rabbits begin to eliminate eggs of the parasite in the feces from 84 days after infection onwards. The biological cycle of F. hepatica in L. columella and the rabbit was completed within 124 days.

Evaluation of the direct agglutination test and the rK39 dipstick test for the sero-diagnosis of visceral leishmaniasis

The direct agglutination test (DAT) based on a freeze-dried antigen and the rK39 dipstick test were evaluated for the sero-diagnosis of visceral leishmaniasis (VL). The sensitivity and specificity of both tests were determined using sera from confirmed VL patients (n = 21), healthy controls (n = 19) and from patients with other confirmed infectious diseases (n = 42). The DAT had a sensitivity and a specificity of 100%. The rK39 had a sensitivity of 85.7% and a specificity of 82%. Both tests were also used to screen blood samples of confirmed VL patients (n = 15) and serum samples of VL suspects (n = 61). The DAT found all blood samples of confirmed VL patients positive and tested 98.4% of the serum samples of the VL suspects positive. In contrast, rK39 detected in 9/15 blood samples (60%) antibodies against Leishmania chagasi and found 85.3% of the serum samples of the suspected patients positive. Although the rK39 dipstick is more rapid and user friendlier than the DAT, the latter has a superior sensitivity and specificity. Furthermore, the reagents used for DAT do not require cold storage, whereas the buffer of the rK39 must be stored at 4ºC. Therefore, the DAT is the most suitable test for the sero-diagnosis of VL under field conditions.