Estrógenos em água: otimização da extração em fase sólida utilizando ferramentas quimiométricas

Muitos métodos analíticos estão sendo desenvolvidos visando à determinação de contaminantes orgânicos, especialmente alteradores endócrinos. Tais métodos baseiam-se geralmente na extração em fase sólida (SPE) seguida por determinação cromatográfica (CG ou HPLC). No presente trabalho utilizou-se ferramentas quimiométricas no processo de SPE para avaliar os principais fatores que influenciam tal processo e as interações entre os mesmos. Foram analisadas matrizes de água subterrânea fortificada com hormônios (17 b estradiol, estrona e 17 b etinilestradiol) e a determinação analítica foi feita por HPLC/Fluorescência. Um planejamento fatorial completo foi utilizado. Os fatores escolhidos incluíram: condicionamento da fase sólida, concentração dos analitos, volume da amostra e solvente de eluição. As melhores condições obtidas foram: 500 mL da amostra, condicionamento da fase sólida (C18) com acetona (4mL), metanol (6 mL) e água pH 3(10 mL), e eluição dos analitos com 4 mL de acetona.

Flow injection analysis of vancomycin

A flow injection method for the quantitative analysis of vancomycin hydrochloride, C66H75Cl2N9O24.HCl (HVCM), based on the reaction with copper (II) ions, is presented. HVCM forms a lilac-blue complex with copper ions at pH≅4.5 in aqueous solutions, with maximum absorption at 555 nm. The detection limit was estimated to be about 8.5×10-5 mol L-1; the quantitation limit is about 2.5×10-4 mol L-1 and about 30 determinations can be performed in an hour. The accuracy of the method was tested through recovery procedures in presence of four different excipients, in the proportion 1:1 w/w. The results were compared with those obtained with the batch spectrophotometric and with the HPLC methods. Statistical comparison was done using the Student's procedure. Complete agreement was found at a 0.95 significance level between the proposed flow injection and the batch spectrophotometric methods, which present similar precision (RSD: 2.1 % vs. 1.9%).

Determination of phenolic compounds and evaluation of antioxidant capacity of Campomanesia adamantium leaves

Five flavanones and three chalcones were isolated from Campomanesia adamantium Berg. (Myrtaceae) leaves. The contents of these compounds were determined by HPLC. The phenolic contents were also determined. The monitoring of the antioxidant activity was carried out by inhibition of peroxidation using the linoleic acid system and radical-scavenging (DPPH). The plants were collected from 4 distinct cities of the Mato Grosso do Sul State, Brazil. The different samples exhibited a range of 4.67-232.35 mg/g chalcones and 15.62-50.71 mg/g flavanones and phenolic contents of the 7.24-21.19 mg/g gallic acid. All extracts showed high antioxidant activity with a wide range of the radical-scavenging (DPPH) from 52.0 to 92.2 % and inhibition oxidation of linoleic acid from 14.6 to 94.2%.

Flavonoid extraction from Alpinia zerumbet (Pers.) Burtt et Smith leaves using different techniques and solvents

The current study aims to verify the best method for a rapid and efficient extraction of flavonoids from Alpinia zerumbet. Dried leaves were extracted using distillated water and ethanol 70% by extraction methods of shaking maceration, ultrasonic, microwave and stirring. By the application of TLC and reversed-phase HPLC techniques the rutin and kaempferol-3-O-glucuronide were detected. Ethanol 70% was more efficient for flavonoids extraction than water. No significant yielding variation was verified for ultrasonic, microwave and stirring methods using ethanol 70% (11 to 14%). The relative concentration of rutin and kaempferol-3-O-glucuronide, respectively, was higher by ultrasonic (1.5 and 5.62 mg g-1 dried leaves, respectively) and by microwave (1.0 and 6.64 mg g-1 dried leaves) methods using ethanol. Rapid and simplified extraction proceeding optimize phytochemical work and acquisition of secondary metabolites.

Flavonoids extraction from Alpinia zerumbet (Pers.) Burtt et Smith leaves using different procedures

The current study aims to verify the best method for a rapid and efficient extraction of flavonoids from Alpinia zerumbet. Dried leaves were extracted using distillated water and ethanol 70% by extraction methods of shaking maceration, ultrasonic, microwave and stirring. By the application of TLC and reversed-phase HPLC techniques the rutin and kaempferol-3-O-glucuronide were detected. Ethanol 70% was more efficient for flavonoids extraction than water. No significant yielding variation was verified for ultrasonic, microwave and stirring methods using ethanol 70% (11 to 14%). Relative concentration of rutin and kaempferol-3-O-glucuronide, respectively, was higher by ultrasonic (1.5 and 5.62 mg g-1 dried leaves) and by microwave (1.0 and 6.64 mg g-1 dried leaves) methods using 70% ethanol. Rapid and simplified extraction proceeding optimize phytochemical work and acquisition of secondary metabolites.

Marcadores séricos de estresse oxidativo e resultados dos procedimentos de reprodução assistida em pacientes inférteis com síndrome dos ovários policísticos e controles

OBJETIVO: comparar os níveis séricos de cinco marcadores de estresse oxidativo e os resultados de reprodução assistida (RA), entre pacientes com infertilidade por fator tubário e/ou masculino e portadoras de síndrome dos ovários policísticos (SOP). MÉTODOS: foram inclusos 70 pacientes, sendo 58 com infertilidade por fator tubário e/ou masculino e 12 com SOP, que foram submetidas à estimulação ovariana controlada para realização de injeção intracitoplasmática de espermatozoide (ICSI). A coleta de sangue foi realizada entre o terceiro e o quinto dia do ciclo menstrual, no mês anterior à realização da estimulação ovariana. Foram analisados os níveis de malondialdeído, hidroperóxidos, produtos de oxidação proteica, glutationa e vitamina E, pela leitura da absorbância em espectrofotômetro e por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Para a análise estatística, utilizou-se o teste t de Student e o teste exato de Fisher. RESULTADOS: entre as pacientes com SOP, foi constatado maior índice de massa corporal, volume ovariano e número de folículos antrais e uma menor dose total utilizada de hormônio folículo estimulante. Não observamos diferença em relação à resposta à estimulação ovariana, aos resultados de RA e aos níveis séricos de malondialdeído, hidroperóxidos, produtos de oxidação proteica, glutationa e vitamina E entre os grupos. CONCLUSÕES: no estudo não evidenciamos diferença entre os níveis séricos de marcadores de estresse oxidativo, nem nos resultados de RA, comparando pacientes inférteis não-obesas com SOP e controles. Estes dados sugerem que, neste subgrupo específico de portadoras de SOP, os resultados de RA não estejam comprometidos. Todavia, as interpretações acerca da ação do estresse oxidativo sobre os resultados de RA ainda não estão claras e as implicações reprodutivas do estresse oxidativo precisam ser mais bem avaliadas.

Technological development of 40mg furosemide tablets: equivalence and bioavaibility study in dogs

Furosemide (40mg) was administered to 20 street dogs, 10 males and 10 females, in two different pharmaceutical forms: (1) compressed furosemide 40mg formulated at the Federal University of Pernambuco (UFPE-tablet), and (2) a commercial formulation with equal bioequivalence produced by the Laboratory for Pharmaceutical Technology of Pernambuco State (LAFEPE), the LAFEPE-furosemide. The study aimed to evaluate the kinetics of dissolution of the UFPE-tablet in order to analyze the behavior of bioavailability of the best formulation for veterinary use. The plasmatic concentrations of furosemide for the determination of parameters of pharmacological kinetics were analyzed by high-performance liquid chromatographic method (HPLC). The in vitro study accomplished through physiochemical analyses demonstrated that the formulas of the furosemide tablets attained the pharmaceutical requirements in agreement with USP 23 and the Brazilian Pharmacopoeia. The evaluation accomplished in dogs with UFPE-tablets given in only dose demonstrated uniformity in blood levels indicating stability in maintenance of the pharmaceutical formulation and efficiency in absorption of the active compound. These values are not significantly different in relation to the 5% confidence limit. Regarding maximum concentration (Tmax) time and global bioavaibility assessed by AUC means, there were no considerable differences as well. UFPE-furosemide displayed 743.492µg/mL.h as AUC average value whereas LAFEPE-furosemide had an average of 537.284µg/mL.h.

Sheep poisoning by Panicum dichotomiflorum in northeastern Brazil

Different species of Panicum, including P. dichotomiflorum,have been reported as a cause of photosensitization in sheep, horses, cattle and goats. An outbreak of hepatogenous photosensitization occurred in 3 flocks of hair sheep in the Brazilian semiarid region. Eighty one out of 365 sheep were affected and 39 died. The main affected animals were nursing lambs and sheep younger than one year old. Donkeys, goats and cattle grazing in the same pasture were not affected. Clinical signs were edema of the head, followed by dermatitis, mainly in the face, ears, and croup, ocular discharge, corneal opacity with blindness, and redness of the coronary band and hoof. At necropsy of one affected lamb the liver was yellowish. Upon histologic examination scattered necrotic hepatocytes were observed in the liver and focal areas of necrosis of myocytes appeared in the heart. Samples of P. dicotomiflorum were analyzed by TLC and those containing saponins were isolated by HPLC using RP-C18 column and eluted with a mixture of MeOH and H2O. The isolated compounds were submitted to ¹H and 13C NMR spectroscopy. Reactions were positive to furostanol saponins with the same Rf of the standard protodioscin (0.21) and methylprotodioscin (0.32). The spectroscopic results indicated a mixture of (25R)- and (25S)-protodioscin isomers in a proportion of 3:1, and methylprotodioscin.

Curva de dissipação de imazapyr em água de drenos de irrigação, após aplicação para controle da taboa

O herbicida sistêmico imazapyr foi usado no controle da taboa (Typha subulata Crespo & Peres-Moreau f.) em drenos de irrigação, como alternativa ao controle mecânico. O resíduo do princípio ativo do herbicida na água foi analisado por cromatografia líquida de alta performance (HPLC). A curva de dissipação de imazapyr mostrou que o herbicida pode ser usado para o controle de taboa em drenos de irrigação, sem causar danos a culturas vizinhas, desde que a água seja usada, no mínimo, depois de 1,6 a 3,7 dias da aplicação das doses de 500 a 1500 g ha-1, respectivamente.

Efeito residual dos herbicidas imazaquin e imazethapyr, aplicados na soja, sobre o milho safrinha

Com o objetivo de se avaliar os efeitos da persistência dos herbicidas imazaquin e imazethapyr na cultura do milho safrinha em sucessão à da soja, tratada com estes produtos, foi instalado um ensaio na Fazenda Escola da Universidade Estadual de Londrina, solo argiloso (75% de argila), na safra agrícola 1995/96. O delineamento experimental adotado foi o de blocos ao acaso, com parcelas subdivididas em faixas. Os tratamentos principais foram constituídos pelos herbicidas: 1.Testemunha; 2.Imazaquin PPI -120 g.i.a./ha; 3.Imazaquin PPI - 240 g.i.a./ha; 4.Imazethapyr PRE - 80 g.i.a./ha e 5.Imazethapyr PRE - 160 g.i.a./ha. Os tratamentos secundários foram constituídos pelas épocas de semeadura do milho: 0 (zero), 30, 60, 90, 120 e 150 dias após a aplicação - DAA. As avaliações, tanto de fitotoxicidade visual como de biomassa seca das plantas e produtividade do milho, revelaram uma maior sensibilidade da cultura ao imazaquin do que ao imazethapyr, embora a quantidade (ppb) de imazethapyr encontrada nas análises cromatográficas das amostras de solo (HPLC) tenha sido maior que a de imazaquin. Nos primeiros plantios, o imazaquin causou dano praticamente total às plantas, enquanto o imazethapyr proporcionou uma injúria de 30-40% na dose normal(80 g.i.a./ha). Nos plantios após 120 DAA esses sintomas foram diminuindo gradativamente até desaparecerem. A curva de regressão dos dados de colheita revelou intervalos de 87 e 112 dias para imazethapyr e imazaquin, respectivamente, para que não mais houvesse diminuição na produtividade do milho semeado após a aplicação da dose normal destes produtos. Correlacionando-se os parâmetros avaliados, observou-se que, mesmo havendo fitotoxicidade no início do desenvolvimento das plantas de milho, essas se recuperaram, tendo produtividade normal após os referidos intervalos. Dos parâmetros avaliados no bioensaio com pepino (Cucumis sativus), a biomassa seca das plantas confirmou a maior sensibilidade do pepino em relação ao milho, sendo prejudicada pela ação residual dos herbicidas no solo até o intervalo mínimo de 127 e 135 DAA para imazethapyr - 80 g.i.a./ha e imazaquin - 120 g.i.a./ha, respectivamente.

Lixiviação do glyphosate e do imazapyr em solos com diferentes texturas e composição química: II. método analítico

Em razão das poucas de informações existente na literatura, sobre a mobilidade do glyphosate e do imazapyr, em solos de baixa atividade, comum em países tropicais, foi conduzido, em laboratório, um estudo sobre a mobilidade vertical desses herbicida s em dois solos com diferente s composições químicas e fisicas. Para estudar essa mobilidade, foram utilizadas colunas de solo com diferentes alturas, as quais, após aplicação dos produtos na dose comerc ial de 4 L ha-1, foram submetida s a um regime hídrico de 40 mm h-1, por um período de 4 h. As análises dos resíduos nas diferentes profundidades foram feitas utilizando-se os métodos voltamétrico (polarografia) e HPLC, para o glyphosate e imazapyr, respectivame nte. Com base nos resultados, foi possível concluir que: a) os métodos voltamétrico, para o glyphosate, e HPLC, para o imazapyr, são adequados para os estudos de identificação e quantificação de resíduos em água e solo; b) os limites de quantificação dos resíduos foram de 0,4 μg mL-1 e 5 μg L-1 para o glyphosate e o imazapyr, respectivamente; c) a taxa de recuperação do glyphosate, nas amostr as de solo (76 e 78% para os solos de Viçosa e Sabará, respectivamente) foi menor que na amostra de água (83%); d) a taxa de recuperação do imazapyr, em água e solo, foi próxima de 100%; e) a lixiviação do glyphosate nos solos foi muito baixa; e f) o imazapyr apresentou alta lix iviação, porém dif ere nciada entre os solos estudados, sendo essa maior no solo de tex tura franco -are nosa de Viçosa que no de argila de Sabará.

Sorção, dessorção e potencial de lixiviação de dimethenamid em solos brasileiros

Determinar a sorção, a dessorção e o potencial de lixiviação do dimethenamid em diferentes solos foi o objetivo deste trabalho. As amostras dos solos foram agitadas por 24 horas e centrifugadas, sendo o sobrenadante filtrado e analisado por HPLC. As etapas da dessorção foram conduzidas por meio da reposição do sobrenadante removido com o mesmo volume de solução de 0,01 M de CaCl2 com agitação por 24 h e posterior centrifugação, repetindo-se o processo por três vezes consecutivas (24, 48 e 72 h) sendo o sobrenadante filtrado e analisado por HPLC. A sorção do dimethenamid, descrita pela isoterma de Freundlich, foi calculada pela diferença entre as concentrações adicionadas e aquelas quantificadas no HPLC. Foram calculadas as percentagens de dessorção a 24, 48 e 72 horas, pela diferença entre as quantidades sorvidas e aquelas quantificadas no HPLC. Correlações de Pearson foram feitas entre kf, kfoc e dessorção e as principais propriedades dos solos. O coeficiente GUS foi utilizado para estimar o potencial de lixiviação. Os baixos valores encontrados para o kf do dimethenamid indicam que este herbicida é pouco sorvido pelos solos estudados. No perfil LVd-a, a sorção se correlacionou significativa e positivamente com o teor de carbono orgânico, quando analisado isoladamente. Os valores de kfoc variaram de 37,66 a 138,24 nas amostras superficiais dos solos estudados e apresentaram correlação significativa com o teor de carbono orgânico quando analisado somente o perfil do LVd-a. A avaliação do potencial de lixiviação demonstrou que o dimethenamid pode ser classificado como herbicida lixiviador apenas no solo LVdf. O processo de dessorção foi menor que o processo de sorção, até 72 horas após a aplicação. A dessorção é maior em camadas mais profundas no perfil do solo LVd-a, onde o teor de carbono orgânico é menor.

Microwave-assisted solvent extraction and analysis of shikimic acid from plant tissues

A better method for determination of shikimate in plant tissues is needed to monitor exposure of plants to the herbicide glyphosate [N-(phosphonomethyl)glycine] and to screen the plant kingdom for high levels of this valuable phytochemical precursor to the pharmaceutical oseltamivir. A simple, rapid, and efficient method using microwave-assisted extraction (MWAE) with water as the extraction solvent was developed for the determination of shikimic acid in plant tissues. High performance liquid chromatography was used for the separation of shikimic acid, and chromatographic data were acquired using photodiode array detection. This MWAE technique was successful in recovering shikimic acid from a series of fortified plant tissues at more than 90% efficiency with an interference-free chromatogram. This allowed the use of lower amounts of reagents and organic solvents, reducing the use of toxic and/or hazardous chemicals, as compared to currently used methodologies. The method was used to determine the level of endogenous shikimic acid in several species of Brachiaria and sugarcane (Saccharum officinarum) and on B. decumbens and soybean (Glycine max) after treatment with glyphosate. The method was sensitive, rapid and reliable in all cases.

Sorption and desorption of picloram in soils under pastures in Brazil

The objective of this work was to determine the coefficients of sorption and desorption of picloram in Ultisol (PVA) and Oxisol (LVA), displaying different physical and chemical characteristics. Samples of soil were collected at the 0 20 cm depth in degraded pasture areas in Viçosa-MG. Firstly, the equilibrium time between the herbicide in solution and the herbicide which was sorbed in the soil was determined by the Batch Equilibrium method. The time required was 24 hours. Sorption and desorption studies were carried out under controlled laboratory conditions; the sorption evaluation consisted in adding 10.0 mL of herbicide solutions at different concentrations to tubes containing 2.00 g of soil, with vertical rotary agitation being maintained during the pre-determined equilibrium time. After centrifugation, supernatant extract cleaning and filtration, herbicide concentration was determined by high performance liquid chromatography (HPLC) with UV detection at 254 nm. Desorption was evaluated using the samples in the tubes after the sorption tests. The Freundlich model was used for interpretation of the sorption process. Ultisol showed higher adsorption coefficient (Kf a) compared with Oxisol, which may be attributed to the lower pH of the soil and its higher organic matter content. Desorption process occurred in both soils; the LVA allowed greater release of the previously sorbed molecules.

Quantificação de sorgoleone em extratos e raízes de sorgo sob diferentes períodos de armazenamento

Neste trabalho, foi realizada a purificação, a obtenção do padrão de sorgoleone (2 - hidroxi - 5 - metoxi - 3 - [(8'Z,11'Z)-8',11',14'-pentadecatrieno]-p-benzoquinona) e a quantificação desse marcador em raízes primárias de sorgo. As sementes de sorgo foram desinfectadas, colocadas em placas gerbox opacas e acondicionadas em câmara de germinação a 30 ºC durante sete dias no escuro. Posteriormente, a extração foi feita mergulhando-se as raízes por 5 min em solução de ácido acético glacial em diclorometano 0,0025% v/v. A quantificação de sorgoleone nos extratos obtidos foi feita por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), utilizando-se uma curva de calibração. Foi avaliado o efeito do armazenamento de extratos e de raízes, utilizando-se três repetições para cada tratamento. Os extratos de raízes recém-coletadas foram armazenados a -20 ºC por 0, 1, 3, 5, 7, 14 e 21 dias. As raízes foram coletadas e imediatamente congeladas (20 ºC) e armazenadas pelo mesmo período, quando foram submetidas à extração. Não foi observada diferença significativa entre a quantidade de sorgoleone em extratos armazenados e a de não armazenados, sendo observado o mesmo resultado em extratos obtidos de raízes frescas e armazenadas. Os resultados obtidos mostram que o armazenamento por até 21 dias não altera o conteúdo de sorgoleone nos extratos.