Characterization of anti-silencing factor 1 in Leishmania major

Anti-silencing factor 1 (ASF1) is a histone chaperone that contributes to the histone deposition during nucleosome assembly in newly replicated DNA. It is involved in chromatin disassembly, transcription activation and in the cellular response to DNA damage. In Leishmania major the ASF1 gene (LmASF1) is located in chromosome 20 and codes for a protein showing 67% of identity with the Trypanosoma brucei TbASF1a. Compared to orthologous proteins, LmASF1 conserves the main residues relevant for its various biological functions. To study ASF1 in Leishmania we generated a mutant overexpressing LmASF1 in L. major. We observed that the excess of LmASF1 impaired promastigotes growth rates and had no impact on cell cycle progress. Differently from yeast, ASF1 overproduction in Leishmania did not affect expression levels of genes located on telomeres, but led to an upregulation of proteins involved in chromatin remodelling and physiological stress, such as heat shock proteins, oxidoreductase activity and proteolysis. In addition, we observed that LmASF1 mutant is more susceptible to the DNA damaging agent, methyl methane sulphonate, than the control line. Therefore, our study suggests that ASF1 from Leishmania pertains to the chromatin remodelling machinery of the parasite and acts on its response to DNA damage.

Comparison of two rapid tests for anti-phenolic glycolipid-I serology in Brazil and Nepal

The diagnosis of leprosy continues to be based on clinical symptoms and early diagnosis and treatment are critical to preventing disability and transmission. Sensitive and specific laboratory tests are not available for diagnosing leprosy. Despite the limited applicability of anti-phenolic glycolipid-I (PGL-I) serology for diagnosis, it has been suggested as an additional tool to classify leprosy patients (LPs) for treatment purposes. Two formats of rapid tests to detect anti-PGL-I antibodies [ML immunochromatography assay (ICA) and ML Flow] were compared in different groups, multibacillary patients, paucibacillary patients, household contacts and healthy controls in Brazil and Nepal. High ML Flow intra-test concordance was observed and low to moderate agreement between the results of ML ICA and ML Flow tests on the serum of LPs was observed. LPs were "seroclassified" according to the results of these tests and the seroclassification was compared to other currently used classification systems: the World Health Organization operational classification, the bacilloscopic index and the Ridley-Jopling classification. When analysing the usefulness of these tests in the operational classification of PB and MB leprosy for treatment and follow-up purposes, the ML Flow test was the best point-of-care test for subjects in Nepal and despite the need for sample dilution, the ML ICA test yielded better performance among Brazilian subjects. Our results identified possible ways to improve the performance of both tests.

Regulatory volume decrease in Leishmania mexicana: effect of anti-microtubule drugs

The trypanosomatid cytoskeleton is responsible for the parasite's shape and it is modulated throughout the different stages of the parasite's life cycle. When parasites are exposed to media with reduced osmolarity, they initially swell, but subsequently undergo compensatory shrinking referred to as regulatory volume decrease (RVD). We studied the effects of anti-microtubule (Mt) drugs on the proliferation of Leishmania mexicana promastigotes and their capacity to undergo RVD. All of the drugs tested exerted antiproliferative effects of varying magnitudes [ansamitocin P3 (AP3)> trifluoperazine > taxol > rhizoxin > chlorpromazine]. No direct relationship was found between antiproliferative drug treatment and RVD. Similarly, Mt stability was not affected by drug treatment. Ansamitocin P3, which is effective at nanomolar concentrations, blocked amastigote-promastigote differentiation and was the only drug that impeded RVD, as measured by light dispersion. AP3 induced 2 kinetoplasts (Kt) 1 nucleus cells that had numerous flagella-associated Kts throughout the cell. These results suggest that the dramatic morphological changes induced by AP3 alter the spatial organisation and directionality of the Mts that are necessary for the parasite's hypotonic stress-induced shape change, as well as its recovery.

Cross-reactive anti-PfCLAG9 antibodies in the sera of asymptomatic parasite carriers of Plasmodium vivax

The PfCLAG9 has been extensively studied because their immunogenicity. Thereby, the gene product is important for therapeutics interventions and a potential vaccine candidate. Antibodies against synthetic peptides corresponding to selected sequences of the Plasmodium falciparum antigen PfCLAG9 were found in sera of falciparum malaria patients from Rondônia, in the Brazilian Amazon. Much higher antibody titres were found in semi-immune and immune asymptomatic parasite carriers than in subjects suffering clinical infections, corroborating original findings in Papua Guinea. However, sera of Plasmodium vivax patients from the same Amazon area, in particular from asymptomatic vivax parasite carriers, reacted strongly with the same peptides. Bioinformatic analyses revealed regions of similarity between P. falciparum Pfclag9 and the P. vivax ortholog Pvclag7. Indirect fluorescent microscopy analysis showed that antibodies against PfCLAG9 peptides elicited in BALB/c mice react with human red blood cells (RBCs) infected with both P. falciparum and P. vivax parasites. The patterns of reactivity on the surface of the parasitised RBCs are very similar. The present observations support previous findings that PfCLAG9 may be a target of protective immune responses and raises the possibility that the cross reactive antibodies to PvCLAG7 in mixed infections play a role in regulate the fate of Plasmodium mixed infections.

Asymptomatic infection in individuals from the municipality of Barcelos (Brazilian Amazon) is not associated with the anti-Plasmodium falciparum glycosylphosphatidylinositol antibody response

Anti-glycosylphosphatidylinositol (GPI) antibodies (Abs) may reflect and mediate, at least partially, anti-disease immunity in malaria by neutralising the toxic effect of parasitic GPI. Thus, we assessed the anti-GPI Ab response in asymptomatic individuals living in an area of the Brazilian Amazon that has a high level of malaria transmission. For comparative purposes, we also investigated the Ab response to a crude extract prepared from Plasmodium falciparum, the merozoite surface protein (MSP)3 antigen of P. falciparum and the MSP 1 antigen of Plasmodium vivax (PvMSP1-19) in these individuals and in Angolan patients with acute malaria. Our data suggest that the Ab response against P. falciparum GPI is not associated with P. falciparum asymptomatic infection in individuals who have been chronically exposed to malaria in the Brazilian Amazon. However, this Ab response could be related to ongoing parasitaemia (as was previously shown) in the Angolan patients. In addition, our data show that PvMSP1-19may be a good marker antigen to reflect previous exposure to Plasmodium in areas that have a high transmission rate of P. vivax.

Anti-Mycobacterium tuberculosis activity and cytotoxicity of Calophyllum brasiliense Cambess (Clusiaceae)

We evaluated the in vitro anti-Mycobacterium tuberculosis activity and the cytotoxicity of dichloromethane extract and pure compounds from the leaves of Calophyllum brasiliense. Purification of the dichloromethane extract yielded the pure compounds (-) mammea A/BB (1), (-) mammea B/BB (2) and amentoflavone (3). The compound structures were elucidated on the basis of spectroscopic and spectrometric data. The contents of bioactive compounds in the extracts were quantified using high performance liquid chromatography coupled to an ultraviolet detector. The anti-M. tuberculosis activity of the extracts and the pure compounds was evaluated using a resazurin microtitre assay plate. The cytotoxicity assay was performed in J774G.8 macrophages using the 3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide colourimetric method. The quantification of the dichloromethane extract showed (1) and (2) at concentrations of 31.86 ± 2.6 and 8.24 ± 1.1 µg/mg of extract, respectively. The dichloromethane and aqueous extracts showed anti-M. tuberculosis H37Rv activity of 62.5 and 125 µg/mL, respectively. Coumarins (1) and (2) showed minimal inhibitory concentration ranges of 31.2 and 62.5 µg/mL against M. tuberculosis H37Rv and clinical isolates. Compound (3) showed no activity against M. tuberculosis H37Rv. The selectivity index ranged from 0.59-1.06. We report the activity of the extracts and coumarins from the leaves of C. brasiliense against M. tuberculosis.

Evaluating anti-Orthopoxvirus antibodies in individuals from Brazilian rural areas prior to the bovine vaccinia era

Vaccinia virus naturally circulates in Brazil and is the causative agent of a zoonotic disease known as bovine vaccinia (BV). We retrospectively evaluated two populations from the Amazon and Southeast Regions. BV outbreaks had not been reported in these regions before sample collection. Neutralising antibodies were found in 13 individuals (n = 132) with titres ranging from 100 ≥ 6,400 neutralising units/mL. Univariate analysis identified age and vaccination as statistically significant risk factors in individuals from the Southeast Region. The absence of detectable antibodies in vaccinated individuals raises questions about the protection of smallpox vaccine years after vaccination and reinforces the need for surveillance of Orthopoxvirus in Brazilian populations without evidence of previous outbreaks.

A representação do portador do vírus da imunodeficiência humana sobre o tratamento com os anti-retrovirais

Tendo como objeto de investigação a percepção dos portadores do HIV/AIDS sobre a adesão à terapêutica com medicamentos anti-retrovirais, este estudo de abordagem qualitativa teve como objetivos: conhecer as representações sociais dos portadores do HIV/AIDS sobre a terapêutica medicamentosa e analisar a relação entre a percepção do portador do HIV/AIDS sobre a terapêutica medicamentosa e a motivação para aderir ao tratamento. Os sujeitos do estudo foram nove usuários, internados na unidade de doenças infecciosas de um hospital de ensino na cidade de Juiz de Fora. Os dados foram colhidos através de entrevista semi-estruturada. A categoria de análise permitiu discutir as diversas facetas da adesão aos anti-retrovirais, partindo das representações elaboradas pelos sujeitos que fazem o tratamento, os quais, tomando como mediação o diálogo, falam dos aspectos dificultadores e as motivações para a gestão do tratamento.

Adherence to anti-hypertensive treatment within a chronic disease management program: A longitudinal, retrospective study

Objective This study assessed pharmacological treatment adherence using the Morisky-Green Test and identified related variables. Method A longitudinal and retrospective study examined 283 patients with hypertension (62.5% women, 73.4 [10.9] years old) who were being monitored by a chronic disease management program for 17 months between 2011 and 2012. Nurses performed all the actions of the program, which consisted of advice via telephone and periodic home visits based on the risk stratification of the patients. Results A significant increase in treatment adherence (25.1% vs. 85.5%) and a decrease in blood pressure were observed (p<0.05). Patients with hypertension and chronic renal failure as well as those treated using angiotensin-converting enzyme inhibitors were the most adherent (p<0.05). Patients with hypertension who received angiotensin receptor blockers were less adherent (p<0.05). Conclusions Strategies such as nurse-performed chronic disease management can increase adherence to anti-hypertensive treatment and therefore contribute to the control of blood pressure, minimizing the morbidity profiles of patients with hypertension.

Atributos físicos e teor de matéria orgânica na camada superficial de um argissolo vermelho cultivado com mandioca sob diferentes manejos

A manutenção e a melhoria da qualidade do solo são determinantes para a estabilidade, sustentabilidade e produtividade de ecossistemas naturais e de agroecossistemas. A compreensão e a quantificação do impacto dos sistemas de preparo do solo na sua qualidade física são fundamentais no desenvolvimento de sistemas agrícolas sustentáveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do sistema convencional de preparo do solo e do sistema plantio direto, associado ao uso de diferentes plantas de cobertura, nas propriedades físicas e no teor de matéria orgânica de um solo cultivado com mandioca. O estudo foi realizado no município de Glória de Dourados, MS, num Argissolo Vermelho textura arenosa. Foram estudados o sistema convencional de preparo do solo (SC), o plantio direto sobre resíduos culturais de mucuna (PDMu), sorgo (PDSo) e milheto (PDMi) e a vegetação nativa (VN) como área-referência. As avaliações foram realizadas em maio de 2003 (após o plantio da mandioca) e agosto de 2004. Os teores de matéria orgânica foram semelhantes entre os diferentes sistemas de manejo. Os efeitos dos sistemas nas propriedades físicas do solo foram verificados apenas na fase inicial do estabelecimento da cultura. A maior estabilidade dos agregados ocorreu em sistemas de cultivo que utilizaram gramíneas como plantas de cobertura. O sistema convencional apresentou menor densidade e maior porosidade total do solo, especialmente na macroposidade, quando comparado aos valores verificados nos sistemas plantio direto com uso de plantas de cobertura.

Caracterização química e espectroscópica de ácidos húmicos e fúlvicos isolados da camada superficial de latossolos brasileiros

A determinação de características estruturais das substâncias húmicas (SH) é essencial para o entendimento do comportamento da química de superfície dos solos altamente intemperizados. Ácidos húmicos (AH) e fúlvicos (AF) obtidos no horizonte superficial de sete Latossolos de diferentes regiões do Brasil foram caracterizados mediante a análise da composição elementar, da acidez total e carboxílica, da capacidade de oxidação e por métodos espectroscópicos. As substâncias húmicas apresentaram elevado grau de oxidação, acidez e massa molecular relativamente baixas, caracterizando a matéria orgânica alcalina solúvel como bastante reativa. Os AF apresentaram menor teor de C e maior de O do que os AH. Foram observados valores elevados da relação entre absorvância em 465 e 665 nm (E4/E6) e a massa molar média foi estimada em 1.106 e 618 g mol-1 para AH e AF, respectivamente. A menor massa molar estimada para os AF foi compatível com sua menor complexidade química revelada pelos espectros de IV-TF, que apresentaram menor número de bandas de absorção bem definidas. A ressonância magnética nuclear (RMN ¹H) mostrou a presença de H mais hidrofóbico nos AH e de H ligado a átomos de O em maior quantidade nos AF, compatível com sua maior acidez e, portanto, solubilidade em qualquer valor de pH. Apesar da mesma funcionalidade química encontrada tanto nos AH como nos AF, a análise estatística permitiu separar a maioria desses ácidos, indicando a presença de frações humificadas de natureza química individual.

Camada de resíduos florestais e pressão de preconsolidação de dois latossolos

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da camada de resíduos da colheita sobre a pressão de preconsolidação, com o uso dos modelos de capacidade de suporte de carga de um Latossolo Amarelo e de um Latossolo Vermelho. Foram coletadas 20 amostras indeformadas, em cada tipo de solo, à profundidade de 10-13 cm, na linha de tráfego do "forwarder", depois de este ter trafegado duas e oito vezes em três condições de disposição de resíduo: sobre a galhada (G); sobre a galhada mais a casca (GC); sobre o solo sem resíduo (SR); e onde não houve tráfego do "forwarder" (ST). As amostras indeformadas foram utilizadas nos ensaios de compressão uniaxial. Determinaram-se, também, textura, matéria orgânica e densidade de partículas dos solos. O tráfego sobre os resíduos florestais atenuou a compactação nos solos estudados, principalmente na condição de galhada + casca (GC), onde a pior situação foi a condição de solo limpo (SR) nos dois tipos de solos. Quando a intensidade de tráfego foi aumentada de duas para oito vezes, houve maior compactação do solo.

Eficácia anti-helmíntica comparativa da associação albendazole, levamisole e ivermectina à moxidectina em ovinos

Avaliou-se a eficácia anti-helmíntica da associação de albendazole 2,0%, cloridrato de levamisole 2,55% e ivermectina 0,08% comparativamente à moxidectina 1% em ovinos naturalmente infectados. Foram selecionados 24 ovinos para a composição de três grupos experimentais com oito animais cada: T1, ovinos tratados com a associação albendazole, levamisole e ivermectina, na dosagem de 1 mL 4 kg-1 de peso corporal; T2, ovinos tratados com moxidectina, na dosagem de 1 mL 50 kg-1 de peso corporal e T3, ovinos sem tratamento anti-helmíntico. Foram realizadas contagens de ovos por grama de fezes (OPG) no primeiro, terceiro, quinto e sétimo dia após os tratamentos. No sétimo dia todos os ovinos foram necropsiados e todos os helmintos encontrados no trato gastrintestinal foram quantificados e identificados quanto ao gênero e à espécie. A associação dos diferentes princípios ativos foi 100% eficaz no combate às espécies Cooperia punctata, C. pectinata, C. spatulata, Trichostrongylus axei, Oesophagostomum columbianum, Trichuris ovis, C. curticei e Strongyloides papillosus e, a moxidectina eliminou as seis primeiras espécies citadas. Contra Haemonchus contortus a associação apresentou eficácia superior (93%) à moxidectina (51,4%). Ambas formulações foram eficazes contra Trichostrongylus colubriformis. A associação medicamentosa utilizada constitui alternativa no controle das nematodioses ovinas.

Características testiculares de touros imunizados com vacina anti-hormônio liberador do hormônio luteinizante

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação imunoesterilizadora de uma vacina anti-hormônio liberador de hormônio luteinizante (LHRH), composta por ovalbumina-LHRH-7 e tiorredoxina-LHRH-7, em touros mestiços Nelore. Vinte e seis touros, com dois anos de idade, foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos de 13 animais. No grupo I, os animais receberam uma dose e dois reforços da vacina nos dias 0, 141, e 287 do experimento. No grupo II, os animais não receberam nenhum tratamento (controle). Para avaliar o efeito da vacina nos touros, foi realizada a mensuração da circunferência escrotal no início do experimento e no dia do abate, 741 dias depois. Por ocasião do abate, também foi coletada uma amostra dos testículos para avaliação histológica. O grupo imunizado apresentou circunferência escrotal ao abate de 22±5,98 cm, menor do que a do grupo controle que foi de 35,6±2,4 cm. Na análise histológica dos animais do grupo imunizado, foi observada degeneração testicular com ausência de espermatozoides em 85% dos animais avaliados, os outros 15% apresentaram redução no número de espermatozoides, em comparação aos animais do grupo controle. A vacina anti-LHRH, com fusão de proteínas, é efetiva na castração imunológica de touros e deve ser considerada como alternativa para utilização na produção bovina extensiva no Brasil.

Modelagem matemática da secagem em camada delgada de bagaço de uva fermentado

O objetivo deste trabalho foi determinar as características da secagem de bagaço de uva fermentado em secador com ar aquecido, avaliar a capacidade descritiva de conhecidos modelos matemáticos de secagem em camada delgada, e obter os valores de difusividade efetiva e a energia de ativação. Os experimentos de secagem foram conduzidos a 50, 60, 70, 80 e 90ºC, com a velocidade do ar de secagem de 1,0 m s-1. Foram comparados dez diferentes modelos matemáticos de secagem em camada delgada, de acordo com os valores do coeficiente de determinação (R²), qui-quadrado (χ²), raiz do quadrado médio residual (RQMR) e erro médio relativo (P), estimados pelas curvas de secagem. Os efeitos da temperatura de secagem nos coeficientes e nas constantes foram preditos pelos modelos de regressão. O modelo de Page modificado foi selecionado para representar o comportamento da secagem em camada delgada de bagaço de uva. Os valores médios da difusividade efetiva variaram de 1,0091 x 10-9 m² s-1 a 3,0421 x 10-9 m² s-1 nas temperaturas avaliadas. A dependência da difusividade efetiva pela temperatura foi descrita pela equação de Arrhenius, com o valor de energia de ativação de 24,512 kJ mol-1.