Surface-expressed enolases of Plasmodium and other pathogens

Enolase is the eighth enzyme in the glycolytic pathway, a reaction that generates ATP from phosphoenol pyruvate in cytosolic compartments. Enolase is essential, especially for organisms devoid of the Krebs cycle that depend solely on glycolysis for energy. Interestingly, enolase appears to serve a separate function in some organisms, in that it is also exported to the cell surface via a poorly understood mechanism. In these organisms, surface enolase assists in the invasion of their host cells by binding plasminogen, an abundant plasma protease precursor. Binding is mediated by the interaction between a lysine motif of enolase with Kringle domains of plasminogen. The bound plasminogen is then cleaved by specific proteases to generate active plasmin. Plasmin is a potent serine protease that is thought to function in the degradation of the extracellular matrix surrounding the targeted host cell, thereby facilitating pathogen invasion. Recent work revealed that the malaria parasite Plasmodium also expresses surface enolase, and that this feature may be essential for completion of its life cycle. The therapeutic potential of targeting surface enolases of pathogens is discussed.

Cellular characterisation of Candida tropicalis presenting fluconazole-related trailing growth

We assessed fluconazole susceptibility in 52 Candida tropicalis clinical strains using seven antifungal susceptibility methods, including broth microdilution (BMD) [standard M27 A3 (with neutral and acid pH), ATB Fungus 3, Vitek 2 system and flow cytometric analysis] and agar-based methods (disk diffusion and E-test). Trailing growth, detection of cell-associated secreted aspartic proteases (Saps) and morphological and ultrastructural traits of these clinical strains were also examined. The ranges of fluconazole 24 h-minimum inhibitory concentration (MIC) values were similar among all methods. The essential agreement among the methods used for MIC determinations was excellent and all methods categorised all strains as susceptible, except for one strain that showed a minor error. The presence of the trailing effect was assessed by six methods. Trailing positivity was observed for 86.5-100% of the strains. The exception was the BMD-Ac method where trailing growth was not observed. Morphological and ultrastructural alterations were detected in C. tropicalis trailing cells, including mitochondrial swelling and cell walls with irregular shapes. We tested the production of Saps in 13 C. tropicalis strains expressing trailing growth through flow cytometry. Our results showed that all of the C. tropicalis strains up-regulated surface Sap expression after 24 h or 48 h of exposure to fluconazole, which was not observed in untreated yeast strains. We concluded that C. tropicalis strains expressing trailing growth presented some particular features on both biological and ultrastructural levels.

Treatment of an Aedes aegypti colony with the Cry11Aa toxin for 54 generations results in the development of resistance

To study the potential for the emergence of resistance in Aedes aegypti populations, a wild colony was subjected to selective pressure with Cry11Aa, one of four endotoxins that compose the Bacillus thuringiensis serovar israelensis toxin. This bacterium is the base component of the most important biopesticide used in the control of mosquitoes worldwide. After 54 generations of selection, significant resistance levels were observed. At the beginning of the selection experiment, the half lethal concentration was 26.3 ng/mL and had risen to 345.6 ng/mL by generation 54. The highest rate of resistance, 13.1, was detected in the 54th generation. Because digestive proteases play a key role in the processing and activation of B. thuringiensis toxin, we analysed the involvement of insect gut proteases in resistance to the Cry11Aa B. thuringiensis serovar israelensis toxin. The protease activity from larval gut extracts from the Cry11Aa resistant population was lower than that of the B. thuringiensisserovar israelensis susceptible colony. We suggest that differences in protoxin proteolysis could contribute to the resistance of this Ae. aegypti colony.

Proteolytic activity in the adult and larval stages of the human roundworm parasite Angiostrongylus costaricensis

Angiostrongylus costaricensis is a nematode that causes abdominal angiostrongyliasis, a widespread human parasitism in Latin America. This study aimed to characterize the protease profiles of different developmental stages of this helminth. First-stage larvae (L1) were obtained from the faeces of infected Sigmodon hispidus rodents and third-stage larvae (L3) were collected from mollusks Biomphalaria glabrata previously infected with L1. Adult worms were recovered from rodent mesenteric arteries. Protein extraction was performed after repeated freeze-thaw cycles followed by maceration of the nematodes in 40 mM Tris base. Proteolysis of gelatin was observed by zymography and found only in the larval stages. In L3, the gelatinolytic activity was effectively inhibited by orthophenanthroline, indicating the involvement of metalloproteases. The mechanistic class of the gelatinases from L1 could not be precisely determined using traditional class-specific inhibitors. Adult worm extracts were able to hydrolyze haemoglobin in solution, although no activity was observed by zymography. This haemoglobinolytic activity was ascribed to aspartic proteases following its effective inhibition by pepstatin, which also inhibited the haemoglobinolytic activity of L1 and L3 extracts. The characterization of protease expression throughout the A. costaricensis life cycle may reveal key factors influencing the process of parasitic infection and thus foster our understanding of the disease pathogenesis.

Antagonistic activity expressed by Shigella sonnei: identification of a putative new bacteriocin

Bacteriocins are antibacterial, proteinaceous substances that mediate microbial dynamics. Bacteriocin production is a highly disseminated property among all major lineages of bacteria, including Shigella. In this paper, we addressed the purification and characterisation of a bacteriocin produced by a Shigella sonnei strain (SS9) isolated from a child with acute diarrhoea. The substance was purified through ammonium-sulphate precipitation and sequential steps of chromatography. The intracellular fraction obtained at 75% ammonium sulphate maintained activity following exposure to pH values from 1-11 and storage at -80ºC for more than two years and was inactivated by high temperatures and proteases. The molecular mass of the purified bacteriocin was determined by mass spectrometry to be 18.56 kDa. The N-terminal sequence of the bacteriocin did not match any other antibacterial proteins described. A putative new bacteriocin produced by S. sonnei has been detected. This bacteriocin may represent a newly described protein or a previously described protein with a newly detected function. Considering that SS9 expresses antagonism against other diarrhoeagenic bacteria, the bacteriocin may contribute to S. sonnei virulence and is potentially applicable to either preventing or controlling diarrhoeal disease.

Study of the antimalarial properties of hydroxyethylamine derivatives using green fluorescent protein transformed Plasmodium berghei

A rapid decrease in parasitaemia remains the major goal for new antimalarial drugs and thus, in vivo models must provide precise results concerning parasitaemia modulation. Hydroxyethylamine comprise an important group of alkanolamine compounds that exhibit pharmacological properties as proteases inhibitors that has already been proposed as a new class of antimalarial drugs. Herein, it was tested the antimalarial property of new nine different hydroxyethylamine derivatives using the green fluorescent protein (GFP)-expressing Plasmodium bergheistrain. By comparing flow cytometry and microscopic analysis to evaluate parasitaemia recrudescence, it was observed that flow cytometry was a more sensitive methodology. The nine hydroxyethylamine derivatives were obtained by inserting one of the following radical in the para position: H, 4Cl, 4-Br, 4-F, 4-CH3, 4-OCH3, 4-NO2, 4-NH2 and 3-Br. The antimalarial test showed that the compound that received the methyl group (4-CH3) inhibited 70% of parasite growth. Our results suggest that GFP-transfected P. berghei is a useful tool to study the recrudescence of novel antimalarial drugs through parasitaemia examination by flow cytometry. Furthermore, it was demonstrated that the insertion of a methyl group at the para position of the sulfonamide ring appears to be critical for the antimalarial activity of this class of compounds.

Espiritualidade na formação do administrador sob a ótica dos professores: um estudo de caso na Faculdade Gamma

Nos últimos 25 anos, as teorias administrativas têm sido alvo de uma série de críticas, sobretudo quanto ao seu caráter instrumental. Como possível resposta a esse problema, na década de 1990 intensificaram-se as discussões sobre a temática da espiritualidade nas organizações. Todavia, apesar do crescente interesse internacional por esse assunto, a revisão de literatura acadêmica revela que, no Brasil, são quase inexistentes os estudos sobre esse tema. Ainda são mais raras as pesquisas que relacionam a formação do administrador com a temática da espiritualidade. Assim, o propósito neste estudo foi entender como tem sido a formação do administrador, no que tange aos princípios da espiritualidade. Para cumprir o objetivo da investigação, inicialmente se procurou realizar uma discussão teórica dos conceitos essenciais a este trabalho: críticas à formação tradicional do administrador, espiritualidade e espiritualidade na formação do administrador. A metodologia escolhida foi a qualitativa do tipo exploratório-descritiva, optando-se pelo estudo de caso como estratégia metodológica. Os resultados obtidos sinalizam, na faculdade pesquisada, um contexto marcado por inibidores de uma formação do administrador que contemple, de forma significativa, a questão da espiritualidade.

Problemas com a mama puerperal revelados por mães soropositivas

Em virtude da recomendação de não amamentar, a mulher soropositiva para o HIV poderá enfrentar problemas mamários. Objetivou-se conhecer situações vivenciadas e reveladas por mulheres HIV positivas, diante da não-amamentação. Estudo qualitativo, com 15 mulheres com HIV/Aids, realizado em ambulatório de um hospital referência em Fortaleza, Ceará. Entrevistas gravadas tiveram seus conteúdos transcritos e analisados. As mães revelaram problemas com as mamas após o parto, como o ingurgitamento e dores neste local. Informaram ter recebido orientação no pré-natal para não amamentar, mas não houve continuidade do cuidado no pós-parto. Foi reduzido o uso de inibidores da lactação e enfaixamento das mamas. Para orientar as puérperas soropositivas, os profissionais de saúde devem adotar medidas adequadas. Também os serviços de saúde necessitam ampliar estratégias para minimizar os problemas emocionais decorrentes da não-amamentação, bem como do desconforto na mama puerperal.

Absorção e utilização do fósforo pelas culturas da soja e do feijão e por plantas daninhas

A aplicação de fertilizantes pode, em determinadas situações, beneficiar mais as plantas daninhas do que as próprias culturas. O manejo de fertilizantes em sistemas agrícolas pode ser um importante componente em programas de manejo integrado das culturas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência na absorção e utilização do P pelas culturas da soja e do feijão e por espécies de plantas daninhas. O experimento foi realizado em casa de vegetação, no período de agosto a novembro de 2002. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados com três repetições; os tratamentos originaram-se de esquema fatorial 6 x 4, sendo seis espécies vegetais: soja (Glycine max), feijão (Phaseolus vulgaris), dois biótipos de Euphorbia heterophylla (suscetível e resistente aos herbicidas inibidores de ALS), Bidens pilosa e Desmodium tortuosum; e quatro doses de P (0,00 12,00; 24,00 e 48,00 mg dm-3), aplicadas na semeadura sob a forma de superfosfato simples. A soja foi a espécie que revelou maior aumento na sua massa seca de raízes com o incremento do fornecimento de P. D. tortuosum, soja e B. pilosa apresentaram maior resposta à adição de doses crescentes de P em relação ao acúmulo de massa seca. O maior teor de P foi constatado para o feijão, independente da dose de P aplicada, contudo D. tortuosum foi a única espécie a ter seu teor de P aumentado em quase três vezes, quando cultivado com o dobro da dose aplicada (48,00 mg dm-3), com base nas necessidades da cultura do feijão. Até a avaliação realizada no início do florescimento, as plantas de soja e D. tortuosum foram as espécies que acumularam a maior quantidade de P em seus tecidos, porém, durante a fase reprodutiva foi D. tortuosum a qual, juntamente com feijão, apresentaram variações quanto à eficiência de suas raízes em absorver P, de acordo com a dose desse nutriente, enquanto as demais espécies mantiveram a mesma eficiência radicular, independente do teor de P do solo. A eficiência na utilização do P absorvido, observado para D. tortuosum, soja e feijão, diminuiu com o aumento da dose. Nos biótipos de E. heterophylla e no feijão, foi verificado baixo desempenho quanto ao uso eficiente do P disponível no solo. A maior porcentagem de recuperação do P aplicado até à fase de formação de propágulos foi constatada nas plantas de D. tortuosum.

FONTES ESTABILIZADAS DE NITROGÊNIO COMO ALTERNATIVA PARA AUMENTAR O RENDIMENTO DE GRÃOS E A EFICIÊNCIA DE USO DO NITROGÊNIO PELO MILHO

A utilização de fontes estabilizadas de N, a partir dos mecanismos de inibição da enzima urease e de inibidores da nitrificação do amônio, pode auxiliar na obtenção de maiores tetos produtivos, contribuindo para a sustentabilidade da atividade agrícola. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito de diferentes fontes e doses de fertilizantes nitrogenados minerais sobre o rendimento de grãos e a eficiência de uso do N pelo milho. Fez-se o experimento no campo, no município de Lages, SC, onde foi implantado no delineamento de blocos casualizados, dispostos em parcelas subdivididas. Na parcela principal, foram avaliadas quatro doses de N em cobertura: 0, 70, 140 e 280 kg ha-1, equivalentes a 0, 25, 50 e 100 % da dose recomendada para obter 18.000 kg ha-1 de grãos. Para cada dose, foram testadas, nas subparcelas, quatro fontes de N mineral: nitrato de amônio, ureia comum, ureia com inibidor da enzima urease e ureia com inibidor da nitrificação do amônio. O experimento foi implantado nos dias 31/10/2011 e 28/10/2012, no sistema de semeadura direta. O híbrido utilizado foi o P30R50H, semeado na densidade de 90.000 plantas ha-1 e espaçamento entrelinhas de 70 cm. As características agronômicas como teor percentual de N foliar, índice do teor relativo de clorofila e rendimento de grãos aumentaram linearmente com a elevação das doses de N em cobertura; porém, não foram influenciadas pelas fontes de adubação nitrogenada. A eficiência de uso do N diminuiu com o incremento das doses de N em cobertura no primeiro ano de execução do trabalho. Não houve diferenças entre as quatro fontes, quanto à eficiência de uso do N. A utilização da ureia contendo inibidor da enzima urease e da nitrificação de amônio não aumentou o rendimento de grãos do milho e nem melhorou a eficiência de uso do N, em relação aos fertilizantes nitrogenados convencionais (ureia comum e nitrato de amônio).

Eficiência da farinha desengordurada de gergelim como complemento protéico da farinha extrudada de caupi1

O objetivo deste trabalho foi promover uma avaliação nutricional da mistura protéica desengordurada, obtida do gergelim (Sesamum indicum L.), com a farinha extrudada do caupi (Vigna unguiculata L. Walp), utilizando-se métodos físicos, bioquímicos, nutricionais e sensoriais. Usando-se semente integral do gergelim, com 54,08% de óleo e 21,83% de proteína, obteve-se a semente descascada com baixa concentração de oxalatos, que foi usada para a produção de farinha desengordurada de gergelim (FDG) contendo 2,81% de óleo e 59,16% de proteína. A principal característica desta farinha foi sua alta concentração de aminoácidos sulfurados (30,88 mg/g proteína). Esta FDG foi usada como complemento da proteína da farinha do caupi obtida pelo processo de cozimento por extrusão (FEC), o que ocasionou a inativação de grande parte dos inibidores de tripsina. A proteína da farinha FEC mostrou uma concentração de 24,29%, um baixo conteúdo de aminoácidos sulfurados (17,22 mg/g proteína) e alto teor de lisina (58,47 mg/g proteína). O alimento formulado foi considerado de boa qualidade nutricional.

Senescência pós-colheita de inflorescências de esporinha (Consolida ajacis)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de inibidores da ação e síntese de etileno sobre a longevidade, respiração e produção de etileno em inflorescências de Consolida ajacis Nieuwl. As hastes foram colhidas e imediatamente condicionadas em 5% de sacarose e em 1 mM de tiossulfato de prata (STS) em combinação, ou não, com 5% de sacarose por 30 minutos, e pulverizadas com 0,5, 1,0, 1,5 e 2,0 mM de ácido aminooxiacético (AOA) e com 5, 10, 15 e 20 mM de ácido acetilsalicílico (AAS). A senescência da flor de C. ajacis foi caracterizada pela produção climatérica de etileno e CO2, que atingiu níveis máximos aos seis dias após a colheita, coincidentes com os estádios tardios da abscisão e murchamento das flores. A longevidade prolongou-se 2,46 vezes nas flores condicionadas com 1 mM de STS. Porém, a adição de 5% de sacarose ao STS reduziu a longevidade das flores. O condicionamento das hastes com 5% de sacarose ou pulverização com 2 mM de AOA e 20 mM de AAS não prolongou a longevidade ou inibiu a respiração e o etileno climatéricos. O STS foi efetivo em reduzir a respiração e a produção de etileno.

Desenvolvimento de plantas de algodão provenientes de sementes embebidas em cloreto de mepiquat

O efeito da embebição de sementes de algodão cultivar IPR-120 com cloreto de mepiquat no crescimento e desenvolvimento inicial das plantas foi avaliado em casa de vegetação. Os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 5x3 (cinco concentrações do produto, três tempos de embebição), com cinco repetições. Altura e área foliar foram avaliadas, da emergência até o início do florescimento. Os tratamentos com cloreto de mepiquat reduziram a altura da planta desde a emergência, com interações entre os fatores analisados. O número de botões florais e de ramos, a área foliar, a matéria seca da parte aérea e a altura da inserção do nó cotiledonar também foram reduzidos pelos tratamentos.

Reguladores vegetais no desenvolvimento e produtividade da cana-de-açúcar

O objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento e a produtividade de colmos de cana-de-açúcar, resultantes da aplicação de reguladores vegetais no iníco da safra. Ostratamentos consistiram na aplicação de três reguladores vegetais inibidores de crescimento - sulfometuron metil, glifosato e compostos de radicais carboxílicos orgânicos + glifosato - e na maturação natural como testemunha, em delineamento experimental em blocos ao acaso, com cinco repetições. Os maturadores retardam o processo de crescimento em altura das plantas, sem afetar o número e o diâmetro de colmos na colheita, e influenciam de forma e intensidade distintas a ocorrência do florescimento e chochamento. O glifosato proporciona elevados índices de brotação lateral e prejudica a rebrota da soqueira. Os maturadores induzem o aumento do teor de açúcares redutores totais, o que contribui para a melhoria da qualidade tecnológica da cana-de-açúcar.

Avaliação reológica e físico-química da gelificação térmica do surimi de jundiá

O objetivo deste trabalho foi avaliar as características reológicas e físico-químicas da gelificação térmica do surimi de jundiá (Rhamdia quelen). Utilizaram-se quatro tratamentos térmicos, três estágios duplos - pré-aquecimentos a 60ºC durante 30, 45 e 60 min, seguidos de aquecimento a 90ºC por 15 min, e um único aquecimento direto a 90ºC por 15 min - e três formulações: duas com inibidores protéicos - soroalbumina bovina + alfa2-macroglobulina e clara de ovo - e uma sem inibidores. Amostras com inibidores protéicos e aquecimento direto alcançaram melhor gelificação, pelo incremento no módulo de elasticidade e decréscimo no ângulo de fase. Os géis pré-aquecidos apresentaram grande oscilação dos parâmetros viscoelásticos, o que comprometeu a formação da rede protéica tridimensional, formada durante a gelificação térmica do surimi. A concentração de peptídeos solúveis não sofreu alteração significativa, mesmo durante os estágios duplos, o que indica a ausência de proteólise, além de mostrar a proteção pelosinibidores àmatriz protéica.