A new brain metalloendopeptidase which degrades the Alzheimer ß-amyloid 1-40 peptide producing soluble fragments without neurotoxic effects

A new metalloendopeptidase was purified to apparent homogeneity from a homogenate of normal human brain using successive steps of chromatography on DEAE-Trisacryl, hydroxylapatite and Sephacryl S-200. The purified enzyme cleaved the Gly33-Leu34 bond of the 25-35 neurotoxic sequence of the Alzheimer ß-amyloid 1-40 peptide producing soluble fragments without neurotoxic effects. This enzyme activity was only inhibited by divalent cation chelators such as EDTA, EGTA and o-phenanthroline (1 mM) and was insensitive to phosphoramidon and captopril (1 µM concentration), specific inhibitors of neutral endopeptidase (EC 3.4.24.11) and angiotensin-converting enzyme (EC 3.4.15.1), respectively. The high affinity of this human brain endopeptidase for ß-amyloid 1-40 peptide (Km = 5 µM) suggests that it may play a physiological role in the degradation of this substance produced by normal cellular metabolism. It may also be hypothesized that the abnormal accumulation of the amyloid ß-protein in Alzheimer's disease may be initiated by a defect or an inactivation of this enzyme.

Synthesis and secretion of transferrin by a bovine trabecular meshwork cell line

The trabecular meshwork (TM) is the main outflow pathway in the mammalian eye. Oxidative damage to TM cells has been suggested to be an important cause of impairment of TM functions, leading to deficient drainage of aqueous humor, with deleterious consequences to the eye. Transferrin, a metalloprotein involved in iron transport, has been characterized as an intrinsic eye protein. Since transferrin is implicated in the control of oxidative stress, the objective of the present study was to determine if a bovine TM cell line (CTOB) synthesizes and secretes transferrin. The CTOB cell line was cultured in the presence of 35S-methionine and the incubation medium was submitted to immunoprecipitation. Total RNAs from CTOB and isolated bovine TM (freshly isolated, incubated or not) were subjected to the reverse transcription-polymerase chain reaction and the amplification products were sequenced. Also, both CTOB and histological TM preparations were processed for transferrin immunolocalization. A labeled peptide of about 80 kDa, the expected size for transferrin, was immunopurified from CTOB samples obtained from the incubation assays. The reverse transcription-polymerase chain reaction and sequencing experiments detected the presence of transferrin mRNA in CTOB and isolated bovine TM. Reactivity to antibodies against transferrin was observed both in CTOB and TM. The results obtained in all of these experiments indicated that the TM is capable of synthesizing and secreting transferrin. The possible implications for the physiology of the eye are discussed.

Efficacy of the FEV1/FEV6 ratio compared to the FEV1/FVC ratio for the diagnosis of airway obstruction in subjects aged 40 years or over

The present cross-sectional, population-based study was designed to evaluate the performance of the FEV1/FEV6 ratio for the detection of airway-obstructed subjects compared to the FEV1/FVC <0.70 fixed ratio test, as well as the lower limit of normality (LLN) for 1000 subjects ³40 years of age in the metropolitan area of São Paulo, SP, Brazil. After the exclusion of 37 (3.7%) spirometries, a total of 963 pre-bronchodilator (BD) and 918 post-BD curves were constructed. The majority of the post-BD curves (93.1%) were of very good quality and achieved grade A (762 curves) or B (93 curves). The FEV1/FEV6 and FEV1/FVC ratios were highly correlated (r² = 0.92, P < 0.000). Two receiver operator characteristic curves were constructed in order to express the imbalance between the sensitivity and specificity of the FEV1/FEV6 ratio compared to two FEV1/FVC cut-off points for airway obstruction: equal to 70 (area under the curve = 0.98, P < 0.0001) and the LLN (area under the curve = 0.97, P < 0.0001), in the post-BD curves. According to an FEV1/FVC <0.70, the cut-off point for the FEV1/FEV6 ratio with the highest sum for sensitivity and specificity was 0.75. The FEV1/FEV6 ratio can be considered to be a good alternative to the FEV1/FVC ratio for the diagnosis of airway obstruction, both using a fixed cut-off point or below the LLN as reference. The FEV1/FEV6 ratio has the additional advantage of being an easier maneuver for the subjects and for the lung function technicians, providing a higher reproducibility than traditional spirometry maneuvers.

Influence of the polymorphisms of the α-major regulatory element HS-40 on in vitro gene expression

The α-MRE is the major regulatory element responsible for the expression of human α-like globin genes. It is genetically polymorphic, and six different haplotypes, named A to F, have been identified in some population groups from Europe, Africa and Asia and in native Indians from two Brazilian Indian tribes. Most of the mutations that constitute the α-MRE haplotypes are located in flanking sequences of binding sites for nuclear factors. To our knowledge, there are no experimental studies evaluating whether such variability may influence the α-MRE enhancer activity. We analyzed and compared the expression of luciferase of nine constructs containing different α-MRE elements as enhancers. Genomic DNA samples from controls with A (wild-type α-MRE) and B haplotypes were used to generate C-F haplotypes by site-directed mutagenesis. In addition, three other elements containing only the G→A polymorphism at positions +130, +199, and +209, separately, were also tested. The different α-MRE elements were amplified and cloned into a plasmid containing the luciferase reporter gene and the SV40 promoter and used to transiently transfect K562 cells. A noticeable reduction in luciferase expression was observed with all constructs compared with the A haplotype. The greatest reductions occurred with the F haplotype (+96, C→A) and the isolated polymorphism +209, both located near the SP1 protein-binding sites believed not to be active in vivo. These are the first analyses of α-MRE polymorphisms on gene expression and demonstrate that these single nucleotide polymorphisms, although outside the binding sites for nuclear factors, are able to influence in vitro gene expression.

The efficacy of YKL-40 and CA125 as biomarkers for epithelial ovarian cancer

Our objective was to estimate the efficacy of the measurement of serum YKL-40 alone or with CA125 as biomarkers for the diagnosis of epithelial ovarian cancer (EOC) using the YKL-40 ELISA kit. An experimental group of 49 ovarian cancer patients included 42 patients with EOC (53 ± 15 years, range: 19-81 years) and 7 patients (48 ± 13 years, range: 29-36 years) with borderline epithelial ovarian tumor. A control group of 88 non-malignant cases included 42 patients (43 ± 10 years, range: 26-77 years) with benign gynecological disease and 46 healthy women (45 ± 14 years, range: 30-68 years) at a teaching hospital. Both YKL-40 (220.1 ± 94.1 vs 61.6 ± 48.4 and 50.1 ± 41.2 ng/mL) and CA125 (524.9 ± 972.5 vs 13.4 ± 7.6 and 28.5 ± 29.6 U/mL) levels were significantly higher (P < 0.05) in patients with ovarian cancer compared to the healthy and non-malignant groups. YKL-40 had 92.9% sensitivity and 94.4% specificity for the diagnosis of EOC. When YKL-40 and CA125 were tested in parallel, the sensitivity was increased to 98.2%, but the specificity was decreased to 81.3%. The correlations between serum YKL-40 and tumor stage, grade histology, performance status, patient age, and extension of debulking surgery were tested. With increasing stage and grade of EOC, preoperative serum YKL-40 levels were significantly increased (P = 0.029, P = 0.05, respectively). Serum YKL-40 alone or with serum CA125 levels are useful, although with some limitations, to diagnose ovarian cancer. Our study showed that YKL-40 may not be an independent prognostic factor for ovarian cancer. This prospective study may be a new trend in looking for biomarkers that optimize diagnosis of ovarian cancer.

Increased immunohistochemical expression of YKL-40 in the spleen of patients with portal hypertension

YKL-40 has been identified as a growth factor in connective tissue cells and also a migration factor in vascular smooth muscle cells. To a large extent, the increase of serum YKL-40 is attributed to liver fibrosis and asthma. However, the relationship of the expression and clinical/prognostic significance of YKL-40 to the splenomegaly of patients with portal hypertension is unclear. In the present study, the expression of YKL-40 was studied by immunohistochemistry in 48 splenomegaly tissue samples from patients with portal hypertension and in 14 normal spleen specimens. All specimens were quickly stored at -80°C after resection. Primary antibodies YKL-40 (1:150 dilution, rabbit polyclonal IgG) and MMP-9 (1:200 dilution, rabbit monoclonal IgG) and antirabbit immunoglobulins (HRP K4010) were used in this study. The relationship of clinicopathologic features with YKL-40 is presented. The expression of YKL-40 indicated by increased immunochemical reactivity was significantly up-regulated in splenomegaly tissues compared to normal spleen tissues. Overexpression of YKL-40 was found in 68.8% of splenomegaly tissues and was significantly associated with Child-Pugh classification (P = 0.000), free portal pressure (correlation coefficient = 0.499, P < 0.01) and spleen fibrosis (correlation coefficient = 0.857, P < 0.01). Further study showed a significant correlation between YKL-40 and MMP-9 (correlation coefficient = -0.839, P < 0.01), indicating that YKL-40 might be an accelerator of spleen tissue remodeling by inhibiting the expression of MMP-9. In conclusion, YKL-40 is an important factor involved in the remodeling of spleen tissue of portal hypertension patients and can be used as a therapeutic target for splenomegaly.

Farinha de yacon e inulina como ingredientes na formulação de bolo de chocolate

Novos ingredientes têm sido investigados para que possam atender às exigências do mercado consumidor atual que deseja produtos com qualidade sensorial e nutricional associada a benefícios para a saúde. Os frutooligossacarídeos (FOS) presentes no yacon (Polymnia sonchifolia), e a inulina apresentam propriedades promotoras de saúde (fibra alimentar e efeito prebiótico) e podem melhorar aspectos sensoriais em alimentos. O presente trabalho teve como objetivos utilizar a inulina e/ou farinha de yacon como ingredientes do bolo de chocolate. Os bolos obtidos das formulações padrão (P), da formulação (A) contendo a farinha de trigo substituída em 20% por farinha de yacon e da formulação (B) contendo a farinha de trigo substituída em 40% por farinha de yacon e em 6% por inulina, foram avaliados quanto às suas propriedades químicas e físicas, preferência e estabilidade de armazenamento em relação ao bolo padrão de chocolate. Os bolos das formulações A e B apresentaram propriedades químicas, físicas, preferência e estabilidade comparáveis ao da formulação padrão. Como vantagens, apresentaram menores valores de dureza, maiores teores em fibra alimentar total (12,35% e 23,6%) em relação ao P (9,02%). O valor calórico foi semelhante (2,09kal para A) e menor (1,62kal para B) que do padrão (2,13kcal), além da presença de frutooligossacarídeos e ou inulina. Portanto, a farinha de yacon e inulina podem ser utilizadas como ingredientes para formular bolo de chocolate, fornecendo produtos com características que atendem às exigências do mercado consumidor.

Simulação da dinâmica operacional de uma linha industrial de abate de suínos

Este trabalho teve como objetivo implementar um modelo computacional para simular a dinâmica operacional de uma linha industrial de abate de suínos. O sistema real modelado pertence à empresa Frigorífico Frimesa, sediada no município de Medianeira (PR). O modelo implementado é tipo dinâmico, discreto e estocástico. Este simula 34 operações unitárias e foi estruturado com o uso da linguagem de simulação EXTEND TM. Para validação do modelo foram coletados dados relativos a cinco dias de operação, em que foram abatidos 1.346, 1.630, 1.360, 1.585 e 1.550 suínos, respectivamente. Como parâmetros de comparação entre os dados obtidos a partir do sistema e gerados pelo modelo foram selecionadas as seguintes variáveis: (i) tempo de duração da operação; (ii) tempo de deslocamento da insensibilização até a depiladeira; (iii) tempo deslocamento da insensibilização até a câmara fria; (iv) número de carcaças re-inspecionadas; e (v) número final de carcaças. Na validação do modelo, foi constatado que, para a variável tempo de duração da operação por meio do teste Tukey a 1% de significância, não foram detectadas diferenças estatísticas entre os valores obtidos do sistema real e os gerados pelo modelo. Considerando-se esta e outras análises, foi concluído que o modelo aplica-se à finalidade para a qual foi implementado. Sendo assim, foram realizadas duas análises de sensibilidade. Na primeira, ao alterar o número de suínos a abater de 1 mil para 2 mil, foi determinado que os tempos de duração da operação variariam de 6,20 a 10,10 h, respectivamente. Para a segunda, ao abater 1.340 suínos e alterar a velocidade das nórias de 300 para 600 animais por hora, o tempo de duração da operação passou de 8,10 para 7,40 h, respectivamente.

Extrusão de misturas de castanha do Brasil com mandioca

Considerando-se que a castanha do Brasil apresenta elevado potencial nutritivo, baixo consumo no Brasil, baixo valor agregado e é um produto orgânico, além da alta produtividade, do baixo custo da mandioca e da tecnologia de extrusão termoplástica apresentarem ampla aplicabilidade e vantagens, este trabalho teve como objetivo empregar estas três variáveis, para formular misturas com castanha do Brasil e farinha de mandioca e processá-las por extrusão, visando à obtenção de produtos extrusados ricos em proteína vegetal e prontos para o consumo. Foram utilizadas torta de amêndoa de castanha do Brasil semidesengordurada e farinha de mandioca para formulações das misturas para extrusão. Aplicou-se o delineamento fatorial completo composto central (2³), com 3 variáveis independentes e a metodologia de superfície de resposta foi usada para avaliar os resultados da composição centesimal e o valor calórico, frente às variações de castanha, umidade e temperatura. Os resultados indicam que as formulações com maiores quantidades de castanha apresentam quantidades de proteínas, lipídios e cinzas mais elevadas, já as formulações com menores teores de castanha apresentam maiores percentuais de carboidratos. Os coeficientes de regressão médios do modelo estatístico para as respostas são: umidade 7,40; carboidratos 51,09; proteínas 15,34; lipídios 11,77; fibra total 9,92 e kcal 371,65. Os ensaios com menores teores de castanha e maiores de farinha apresentam-se mais expandidos e de cor clara, enquanto que aqueles com maiores teores de castanha não se expandem e têm a cor acinzentada. Conclui-se que a adição de castanha semidesengordurada à farinha de mandioca pode ser submetida à extrusão, originando um produto extrusado fonte de proteína vegetal, pronto para o consumo e que pode atender à exigência de consumidores que não utilizam proteínas de origem animal.

Seleção de Basidiomycetes da Amazônia para produção de enzimas de interesse biotecnológico

Os fungos têm sido bastante usados como produtores de diferentes substâncias de interesse econômico, tais como: enzimas, antibióticos, vitaminas, aminoácidos e esteróides. Este estudo teve como objetivo detectar a produção de enzimas por linhagens de Basidiomycetes, oriundas de áreas de floresta da Amazônia. Para a produção de enzimas, os fungos foram cultivados em meio líquido adicionado de substrato indutor (0,5%), pH ajustado para cada enzima e incubados a 28 °C, sob agitação a 140 rpm, durante 96 ou 120 horas. A massa micelial foi separada for filtração e os filtrados foram inoculados em cup plates de 6 mm de diâmetro, perfurados na superfície de meios de cultura sólidos, adequados para a detecção das enzimas amilases, proteases, celulases, fenoloxidases e pectinases em placa de Petri. As placas foram incubadas à temperatura de 28 °C por 24 horas, e reveladas para observação dos halos indicativos da atividade enzimática. Foi verificada também a atividade da amilase e protease produzida pelos fungos, crescidos em meio líquido, com diferentes fontes nutricionais. Foi possível detectar a produção de celulases e proteases por todos os isolados, 40% produziram amilases, 50% produziram fenoloxidases e 10% produziram pectinases. Quanto à atividade da amilase, o substrato farelo de trigo foi o que proporcionou os maiores halos de degradação, destacando-se os fungos Daedalea sp. 4E6 e Daedalea sp. 1A, Stereaceae 22B e Pycnoporus sanguineus 12B. Considerando os substratos testados para produção de proteases, o substrato concentrado protéico de peixe se destacou como a melhor fonte protéica. Os fungos P. sanguineus 12B, Stereaceae 22B e Cantharellus guyanensis 4Bl foram os melhores produtores de protease.

Análise da tendência temporal de dano renal agudo entre pacientes graves conforme polimorfi smos I/D e -262A > T da enzima conversora da angiotensina

A síndrome de disfunção de múltiplos órgãos e sistemas (DMOS) e a disfunção renal aguda compartilham muitos dos fatores fisiológicos envolvidos em seu desenvolvimento. Estudos recentes correlacionam suscetibilidades individuais, determinadas geneticamente, à disfunção de órgãos em pacientes criticamente enfermos, situação em que o gene da enzima conversora da angiotensina (ECA) poderia ser um candidato para elucidar predisposição ou risco genético. Nosso objetivo foi examinar os efeitos da presença de dois polimorfismos, I/D e -262A > T, na disfunção renal em pacientes agudamente graves do Sul do Brasil. O escore SOFA (sequential organ failure assessment) à admissão e a tendência da função renal (medida pelo escore renal diário do SOFA) foram determinados em pacientes de unidade de terapia intensiva (UTI). Um total de 153 pacientes adultos (79 homens) foi incluído no estudo. Houve monitoração diária da função renal durante toda a permanência na UTI e também pós-UTI. Observou-se a progressão para insuficiência renal (SOFA 3 e 4) nos primeiros sete dias de internação em UTI, bem como necessidade de diálise. As frequências genotípicas gerais em nossa amostra foram II = 0,17; ID = 0,46; DD = 0,37; e AA = 0,30; AT = 0,55; TT = 0,15; e as frequências alélicas foram I = 0,40, D = 0,60; e A = 0,56; T = 0,44. Este é o primeiro estudo para verificar a influência de polimorfismos I/D e -262A > T da ECA em disfunção renal aguda em pacientes críticos. Nenhuma associação significativa foi encontrada entre os genótipos ou as frequências alélicas e a evolução da função renal. Os polimorfismos I/D e -262A > T da ECA não têm impacto significativo sobre a evolução da função renal durante a primeira semana de internação na UTI nem exercem qualquer influência sobre a mortalidade em pacientes graves.

Avaliação do acesso vascular para hemodiálise em crianças e adolescentes: um estudo de coorte retrospectivo de 10 anos

INTRODUÇÃO: As intercorrências do acesso vascular têm sido a maior causa de internação entre os pacientes com estágio V da doença renal crônica (DRC) em hemodiálise (HD). Apesar de campanhas para a diminuição do uso de cateter venoso central (CVC) como via de acesso para HD, este ainda representa a principal via de acesso para crianças e adolescentes que iniciam HD. OBJETIVOS E MÉTODOS: Este estudo tem o objetivo de avaliar, por meio de um coorte retrospectivo, o tipo de acesso vascular inicial, a incidência de complicações dos acessos vasculares e as razões de falência dos acessos em crianças e adolescentes com idade entre 0 e 18 anos que iniciaram HD no período de 1997 a 2007. RESULTADOS: Foram estudados 251 acessos em 61 pacientes, sendo 97 fístulas arteriovenosas (FAV) e 154 CVC de curta permanência. Dos pacientes do estudo 51 % iniciaram HD pelo CVC. A média de idade dos pacientes no início da HD foi de 12,5 anos. A doença de base predominante foi glomerulopatia (46%). A principal causa de retirada de CVC foi infecção, em 35%. A sobrevida média do CVC foi de 40 dias. A falência primária da FAV foi detectada em 37,8% das FAV confeccionadas. Para as FAV funcionantes, a principal causa de falência foi a trombose (84%). A infecção não foi a causa de nenhuma falência de FAV. Comparando-se os tipos de acesso, constatou-se risco de infecção 34 vezes maior para os pacientes em uso de CVC em relação aos em uso de FAV. CONCLUSÃO: A infecção foi a maior causa de retirada de CVC temporário. Esse estudo sugere que o CVC temporário deve ser evitado, e, sempre que possível, substituído por FAV ou CVC de longa permanência. A trombose foi a principal causa de perda da FAV, reforçando a importância de um programa para a detecção precoce da disfunção do acesso.

Tradução e adaptação cultural do Peds QL TM ESRD para a língua portuguesa

OBJETIVO: Traduzir e adaptar a versão 3.0 do questionário Peds QL TM - End Stage Renal Disease para a língua portuguesa. METODOLOGIA: A metodologia adotada foi proposta pelo idealizador do questionário original e é composta por 4 fases: tradução da versão original, retradução para o idioma inglês, aplicação em grupos de pacientes e prova de leitura e finalização, sendo que, as traduções e a revisão foram realizadas por profissionais especialistas nas línguas portuguesa e inglesa. Os questionários são compostos pelas versões de relato da criança e do adolescente e relato dos pais, e divididos em faixas etárias de 2 a 4 anos (apenas relato dos pais), 5 a 7 anos, 8 a 12 anos e 13 a 18 anos. Ao todo, foram realizadas 35 entrevistas, sendo 15 de crianças e adolescentes e 20 dos responsáveis. CONCLUSÕES: O processo de tradução e adaptação cultural, que consistiu na equivalência semântica (equivalência entre as palavras), equivalência idiomática (expressões equivalentes não encontradas ou itens que precisavam ser substituídos) e equivalência experimental (palavras e situações adequadas ao contexto cultural brasileiro), resultaram em uma versão de fácil compreensão e administração.