Interaction of rheumatoid factor and Entamoeba histolytica

The amoebae's cytotoxicity test and the amoebae's lysis test were used to show possible interactions between rheumatoid factor (RF) and Entamoeba histolytica. Amoebae's cytotoxic activity (ACA) was inhibited by affinity chromatography purified antiamoebae rabbit IgG (RIgG). Enhanced inhibition could be demonstrated with RIgG plus RF. But the same marked inhibition of ACA could be seen when replacing RF by heat inactivated normal human serum as a control. About 50% amoebae's lysis occurred when amoebae were brought together with native normal human serum (NNHS) as a source of complement. Amoebae's lysis increased to 60% when incubated with NHS plus human antiamoebae antibodies. No further augmentation could be obtained by the addition of RF. Using RIgG instead of human antibodies the lysis rate did not increase. Incubation of amoebae, NNHS, RIgG and RF even reduced amoebae's lysis. RF neither has an effect on ACA nor on complement mediated AL in vitro.

Toxoplasmose aguda: avaliação da técnica de imunoensaio em camada delgada para a detecção de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii

Um método de reação antígeno-anticorpo denominado IMUNOENSAIO EM CAMADA DELGADA (ICD) foi padronizado e avaliado para o imunodiagnóstico da toxoplasmose aguda, através da detecção de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii (ICD-IgM). Um total de 300 amostras de soros, tendo ou não o perfil sorológico da toxoplasmose aguda, foi estudado pelo ICD-IgM e os resultados analisados quanto aos aspectos qualitativos e quantitativos em relação aos testes convencionais de imunofluorecência indireta para a detecção de IgM, (IFI-IgM) e de hemaglutinação pré e após tratamento com 2-mercaptoetanol (HA-2ME). Foram calculados os coeficientes de correlação entre os resultados fornecidos pelo ICD-IgM e as técnicas convencionais, de acordo com as concentrações do antígeno, assim como, foi verificada a influência dessas concentrações antigênicas nos índices relativos de sensibilidade e de especificidade. O estudo estatístico mostrou reprodutibilidades significativas dos resultados inter e intra testes, assim como no reaproveitamento do antígeno por 10 vezes. Os resultados de ICD-IgM mostraram que as concentrações antigênicas ideais foram de 70 a 100µg/ml, para o ensaio em questão, para se obter máximas sensibilidade e especificidade. Portanto, ICD-IgM, por fornecer resultados tão sensíveis e específicos quanto aqueles dos testes convencionais referidos, poderá ser empregado para fins diagnósticos.

El inmunoensayo enzimático (ELISA) en el diagnóstico serológico de Plasmodium vivax

Comunicamos nuestra experiencia con la aplicación del inmunoensayo enzimático al diagnóstico serológico de Plasmodium vivax con antígeno homólogo. Este se obtuvo a partir de una muestra de sangre de un paciente y luego de lisar los glóbulos rojos con detergente (NP-40). En un "pool" conformado con 11 sueros de pacientes con malaria por P. vivax se encontraron anticuerpos de las clases IgM, IgG e IgA. Se introdujo además la proteína A como sonda secundaria para determinar la respuesta anti-P. vivax en una muestra de 30 sueros de pacientes con un primer episodio palúdico. Se encontró un 93% de correlación con el diagnóstico parasitológico y la prueba resultó específica y reproducible.

Imunodiagnóstico da leptospirose humana através do teste ELISA-IgM, empregando-se diferentes preparações antigênicas a partir de sorotipos prevalentes de Leptospira interrogans

Realizou-se estudo comparativo de diferentes sorotipos de Leptospira interrogans utilizados na preparação de antígenos empregados no teste ELISA, para a detecção de anticorpos da classe IgM, em amostras de soro na fase precoce e tardia da leptospirose humana. Foram utilizados dez sorotipos, escolhidos entre os que apresentaram maior reatividade na soroaglutinação microscópica (SAM), na cidade de São Paulo. Os cinco sorotipos que apresentaram melhores resultados individualmente no teste ELISA-IgM (canicola, hebdomadis, icterohaemorrhagiae, cynopteri e brasiliensis), foram também estudados em mistura antigênica. Os antígenos não tratados apresentaram maior reatividade do que os antígenos tratados com Triton X - 100 (4%) à temperatura de 50ºC, durante 4 horas. O teste ELISA-IgM empregando os sorotipos não tratados, isoladamente, e em mistura antigênica, mostrou-se altamente sensível, podendo ser empregado como teste de triagem para o diagnóstico precoce da leptospirose humana. Outra aplicação do teste é permitir a detecção do início de situações epidêmicas ou de surtos, possibilitando acionar medidas de vigilância epidemiológica.

Simultaneous identification of Trypanosoma cruzi surface and internal antigens reactive to different immunoglobulin classes (radio-immunoblotting)

A radioactive Western-blotting technique was developed by which the reactivity of Immunoglobulins (Igs) from different classes to both membrane radiolabelled and internal parasite antigens is simultaneously identified. The method includes radioiodination of parasites, polypeptide fractionation by SDS-PAGE, Western-blot transfer and autoradiography of the immunoblots developed with anti-Igs conjugates labelled with enzymes. The analysis is then performed by the comparison of common bands on the autoradiograms and the respective substrate stained nitrocellulose blots. This technique was used to analyse T. cruzi trypomastigote surface labelled antigens reactive to IgM, IgA and IgG specific antibodies. A different pattern of reactivity with acute Chagas' disease patients sera was thus obtained.

Infecção perinatal pelo citomegalovírus em hospital público de São Paulo: estudo prospectivo

Com o objetivo de se avaliar a magnitude da infecção perinatal pelo citomegalovírus em hospital público do município de São Paulo, os autores acompanharam prospectivamente 98 recém-nascidos até o quarto mês de vida. Amostras de urina foram coletadas ao nascimento e posteriormente a cada mês, para inoculação em tubos contendo fibroblastos humanos. Amostras de sangue foram coletadas ao nascimento, no segundo e quarto mês de vida para pesquisa de anticorpos IgM específicos para o CMV, pelo método de imunofluorescência indireta. Dos 37 recém-nascidos que foram acompanhados até o quarto mês de vida, 9 se infectaram neste período, com diagnóstico feito pelo isolamento do CMV. O risco de aquisição da infecção pelo citomegalovírus no período perinatal estimado pela tábua de sobrevivência foi de 30,9%. A pesquisa de anticorpos IgM por imunofluorescência indireta só permitiu tal diagnóstico em 2 casos (8,1%). A diferença observada entre os dois métodos foi estatisticamente significante (p = 0,015). O estudo da prevalência de anticorpos IgG pelo ensaio imunoenzimático nas mães das crianças mostrou taxas de 92,7%. Não se isolou CMV nas amostras de leite materno, coletadas mensalmente até o terceiro mês de lactação. O acompanhamento clínico evidenciou que as crianças infectadas apresentaram-se de forma assintomática e com desenvolvimento neurop-sicomotor normal até o quarto mês.

Infecção pelo citomegalovírus em pacientes com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS): relações clínico-virológicas e anatomopatológicas

Com o objetivo de determinar a prevalência da infecção pelo Citomegalovírus (CMV) em pacientes com AIDS, bem como relacionar os achados clínico-virológicos decorrentes desta infecção com as repercussões anatomopatológicas, estudamos 50 pacientes adultos atendidos entre abril de 1986 a junho de 1987, em dois hospitais públicos de São Paulo (HSP e HSPE). Estes pacientes foram acompanhados clínica e laboratorialmente, por período médio de 2 meses com coletas seriadas de sangue, urina e saliva. Foram realizados isolamento do CMV em monocamadas de fibroblastos humanos e testes sorológicos de Imunofluorescência Indireta (IFI-IgG/IgM) e Reação Imunoenzimática (ELISA-IgG). No momento da admissão no estudo 20% (10/50) dos pacientes apresentavam anticorpos IgM CMV específicos e 100% (50/50) deles anticorpos IgG (IFI). Durante o acompanhamento, 5 pacientes inicialmente IgM negativos tornaram-se IgM positivos, sugerindo reativação ou reinfecção pelo CMV. O CMV foi isolado de sangue periférico em 12,5%, da urina em 23,2%, da saliva em 21,9% dos pacientes. Exames anatomopatológicos foram realizados em 24 pacientes, correspondendo a 60% dos pacientes que evoluiram para óbito durante o período de estudo. Corpúsculos de inclusão citomegálica característicos foram observados em 50% das necrópsias, sendo o aparelho digestivo, pulmões e supra-renais os sítios mais acometidos. Não se observou uma relação estatisticamente significante entre os achados clínicos e os achados virológicos e anatomopatológicos.

Performance indexes of a dot-enzime-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) and an ezyme-linked immunosorbent assay (IgG-ELISA) for field surveys of new world leishmaniasis

Diagnostic performance indexes of sensitivity, specificity, positive predictive value and efficiency were determined for dot-ELISA and IgG-ELISA tests in 340 leishmaniasis sera. Sensitivity of the dot-ELISA was significantly lower than IgG-ELISA's; the two tests had indexes of specificity and positive predictive value of the same magnitude. Seventy-eight sera gave a negative dot-ELISA test result and a positive IgG-ELISA test result. When sera were classified according to different criteria as how to interpret this diversity, the kappa statistic did not corroborate the classification indicating that the two tests display a substantial strength of agreement. The results presented indicate that performance indexes accrued in a survey where variables arc well known may be extrapolated to other population studies if the disease presents itself as highly prevalent (due to a selection bias or not) and may be expected to discriminate a disease status among test positives.

Comparison on the performance of Leishmania major-like and Leishmania braziliensis braziliensis as antigen for new world leishmaniasis IgG-immunofluorescence test

The performance of an antigen of L. major-like promastigotes for the serological diagnosis of mucocutaneous leishmaniasis in the IgG-immunofluorescent test was compared to that of an antigen of L. braziliensis braziliensis. Each antigen was used to test two hundred and twenty-four sera of etiologies such as mucocutaneous leishmaniasis, deep mycoses, toxoplasmosis, malaria, Chagas' disease, visceral leishmaniasis, anti-nuclear factor, schistosomaiasis, rheumatoid factor and normal controls. Agreement between responses to each antigen was high: 77.2% of leishmaniases sera agreed on a positive or a negative result to both antigens and 91.1 % of control sera. Cross reactivity was restricted to Chagas' disease sera, visceral leishmaniasis, anti-nuclear factor and paracoccidiodomycosis. The quantitative response of leishmaniasis and Chagas' disease sera to both antigens was evaluated by a linear regression; although the y-intercept and the slope were different for each antigen, neither was better than the other in the disclosure of anti-Leishmania antibodies. In the case of Chagas' disease sera the L. major-like antigen was better than L. b. braziliensis' to disclose cross-reacting antibodies.

Use of MAC-ELISA for evaluation of yellow fever vaccination

An evaluation of the IgM antibody immune response against yellow fever using strain 17D was carried out by MAC-ELISA and PRNT. The results showed an agreement of 97% between both tests and the authors conclude that MAC-ELISA can be used as a specific and sensitive asssay to replace the PRNT for detecting yellow fever antibodies in human sera, after vaccination programs.

Quimiotipagem do Cryptococcus neoformans. Revisão da literatura. Novos dados epidemiológicos sobre a criptococose. Nossa experiência com o emprego do meio de C.G.B. no estudo daquela levedura

O presente trabalho, além da revisão da literatura sobre quimiotipagem do C. neoformans, com novos dados sobre a epidemiologia da criptococose, teve por finalidade principal a caracterização das duas variedades desta levedura em pacientes com neurocriptococose, HIV + e HIV -. As variedades neoformans e gattii estão hoje bem definidas bioquimicamente, com o emprego do meio C.G.B., proposto por KWON-CHUNG et al. (1982) 24. O isolamento do C. neoformans var. gattii das flores e folhas do Eucalyptus camaldulensis e do Eucalyptus tereticornis, na Austrália, através dos trabalhos de ELLIS & PFEIFFER (1990)16 e PFEIFFER & ELLIS (1992)41, possibilitou investigações epidemiológicas das mais interessantes sobre este microrganismo, levedura capsulada a qual SANFELICE50, 51, na Itália, em 1894 e 1895 despertou a atenção do meio médico. BUSSE8, em 1894, descrevia o primeiro caso de criptococose humana sob a forma de lesão óssea, simulando sarcoma. As pesquisas nacionais sobre o assunto em foco foram destacadas, seguindo-se a experiência dos Autores com o meio de C.G.B. (L - canavanina, glicina e azul de bromotimol). Foi possível, através deste meio o estudo de 50 amostras de líquor, sendo 39 procedentes de aidéticos (78%) e 11 de não aidéticos (22%). De pacientes HIV+, 37 (74%) foram identificados como C. neoformans var. neoformans e 2 (4%) como C. neoformans var. gattii. Dos HIV- 8 ( 16%) foram classificados como C. neoformans var. neoformans e 3 (6%) como C. neoformans var. gattii. Através deste trabalho, evidencia-se a importância da neurocriptococose, principalmente entre os aidéticos, demonstrando-se mais uma vez o interesse do meio CGB na quimiotipagem do C. neoformans em suas duas variedades, ganhando em importância a demonstração de que duas espécies de eucalipto podem funcionar como "árvores-hospedeiras" para o Cryptococcus neoformans var. gattii.

UltramicroELISA para la deteccion de anticuerpos IgM al Mycobacterium leprae utilizando muestras de sangre seca

En este trabajo se establecen las condiciones optimas para la detección de anticuerpos IgM al glicolipido fenólico-I (GF-I) en muestras de sangre en papel de filtro utilizando el UltramicroELISA HANSEN y la tecnologia SUMA. Se estudiaron 300 donantes de sangre y 58 pacientes leprosos. Para estas dos poblaciones se compararon los resultados de muestras de sangre seca colectadas en papel de filtro SS-2992 con los de suero, y se obtuvo una correlación de 0.919 para donantes de sangre, 0.969 para pacientes y 0.954 para el total de las dos poblaciones. Se obtuvo una coincidencia de 98% en pacientes y 96% en donantes. En la población de pacientes la sensibilidad fue de 93% y la especificidad de 100% para las muestras de sangre seca evaluadas por el UMELISA HANSEN, con respecto a las muestras de suero analizadas por esta misma tecnica.

Measles serodiagnosis: standardization and evaluation of a dot-ELISA

A Dot-ELISA using a measles virus (MV) antigen obtained by sodium deoxycholate treatment was standardized and evaluated for IgM and IgG antibody detection in measles patients and measles-vaccinated subjects. A total of 192 serum samples were studied, comprising 47 from patients with acute and convalescent measles, 55 from 9-month old children prior to measles vaccination and 41 from children of the same age after vaccination, and 49 from patients with unrelated diseases. The diagnostic performances of the IgG Dot-ELISA and IgG immuno fluorescence test (IFT) were found to be close, varying from 0.97 to 1.00 in sensitivity and the specificities were maximum (1.00). Nevertheless, the sensitivity of the IgM Dot-ELISA (0.85) was higher than that (0.63) of the IgM IFT, although both assays had comparably high (1.00) specificities. The IgM Dot-ELISA in particular proved to be more sensitive in relation to other assays studied by revealing antibodies in 80.0% (12/15) of vaccinated children on the 15th day after immunization. In contrast the IgM IFT, failed to detect antibodies in the same group of vaccinated children. The stability of the MV antigen was longer than that of the IFT antigen, and the reproducibility of the Dot-Elisa was satisfactory.

An evaluation of the direct agglutination test to diagnose "Mal de Caderas" disease

Se evaluó la utilidad de la prueba de aglutinación directa (AD) para diagnosticar el Mal de Caderas. Se emplearon cuarenta y cuatro sueros provenientes de dos lotes de equinos naturalmente infectados con el Trypanosoma evansi (Lote 1 y Lote 2). La AD fue positiva (Aglutinación > 1:512) en 13 de 16 equinos (81.2%), de los que se aislaron los parásitos. En doce de estos animales (92%) se detectaron IgM anti T. evansi mediante la AD realizada con 2-mercaptoetanol (AD + 2-ME). La AD fue positiva en 17 de los 28 equinos que resultaron negativos al diagnóstico parasitológico. Un tercer lote de cinco equinos infectados con T. evansi que presentaba elevados títulos de AD, fue tratado con Suramina Sódica (Nagano1-Bayer). La AD + 2-ME evidenció en cuatro animales que, gran parte de estos anticuerpos se ubicaban en la fracción IgM. Posterior al tratamiento farmacológico y, en concordancia de la negativización de la parasitemia, la detección de la IgM anti T. evansi no fue posible, mientras que los anticuerpos IgG continuaron detectándose a los doce meses post-tratamiento en valores de 1:512, en tres animales. Cincuenta sueros de equinos de una zona libre del parásito, que se emplearon como controles, fueron negativos a la AD. Se recomienda la utilización de la AD y AD + 2-ME para el uso de rutina en el diagnóstico del Mal de Caderas de los equinos, en combinación con otros métodos parasitológicos sensibles.

A prospective study with children whose mothers had dengue during pregnancy

Dengue congenital disease was not confirmed in 10 children whose mothers had the infection during pregnancy. The fetal sera presented anti-dengue IgG antibodies which progressively declined, and disappeared after 8 months. IgM antibodies to dengue were not observed in the sera. Other normal data suggesting the healthy state of the children included: absence of malformations, pregnancy time, Apgar index, weight, and placenta aspect