Serological monitoring of antibodies for an early diagnosis ofaspergillosis in captive penguins

Abstract: This study aimed to evaluate the efficacy of detection of anti-Aspergillus fumigatus antibodies in captive penguins by double radial agar gel immunodiffusion (AGID) for the aspergillosis diagnosis. We included 134 Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) in rehabilitation at the Center for Recovery of Marine Animals (CRAM / FURG). All of them were monitored by AGID weekly until its final destination (death or release), totalizing 660 serum samples studied. All animals were clinically accompanied and post-mortem examinations was performed in penguins that died during the studied period. A total of 28% (37/134) of the penguins died, 89.2% (33/37) due to aspergillosis, 11% (4/37) by other causes and 97 were released. From the 33 animals with proven aspergillosis, 21 presented anti- A. fumigatus antibodies by AGID, being the average interval between death and positive AGID 16.4 days. Twelve animals with negative serology died of aspergillosis. The sensitivity and specificity rates were 63.6% and 95% respectively, and the positive and negative predictive values were 80.7% and 88.9% respectively. These data demonstrate that the serological monitoring for detection of antibodies by AGID can be an important tool for the diagnosis of aspergillosis in penguins.

Enfermidades em bovinos associadas ao consumo de resíduos de cervejaria

Resumo: A utilização de subprodutos de cervejaria na alimentação de bovinos tem crescido nos últimos anos como uma excelente alternativa na manutenção ou aumento da produtividade na bovinocultura, sobretudo na Região Sudeste. Entre os resíduos mais empregados estão o bagaço de malte oriundo da "cevada" e o "levedo de cerveja", um subproduto líquido que contém álcool, muito utilizado no Estado do Rio de Janeiro. O uso incorreto ou sem os devidos cuidados, bem como o armazenamento de forma inadequada, contudo, podem ser responsáveis por quadros de intoxicação por etanol, neurotoxicose por Aspergillus clavatus, acidose ruminal e botulismo. Esse trabalho tem por intuito alertar para a importância dessas condições como causa de sérios prejuízos econômicos à pecuária e fornecer subsídios para o estabelecimento do diagnóstico, diagnóstico diferencial e profilaxia das mesmas.

Fungos filamentosos isolados de produtos derivados do milho comercializados em Recife, Pernambuco

A diversidade de fungos filamentosos foi analisada em três produtos derivados do milho: fubá, xerém e farinha de milho pré-cozida. Foi utilizado o método de plaqueamento em superfície e profundidade, utilizando meio de dicloran rosa de bengala cloranfenicol (DRBC). Foram isoladas 23 espécies de fungos filamentosos distribuídos em oito gêneros: Absidia, Aspergillus, Curvularia, Emericella, Fusarium, Monascus, Penicillium e Rhizopus. O maior número de espécies ocorrem no fubá (47%), seguido do xerém (29,5%) e farinha de milho (23,5%). Aspergillus flavus Link, Fusarium moniliforme Sheldon, Penicillium funiculosum Thom e P. duclauxii Delacroix estiveram presentes nos três substratos, enquanto Penicillium brevicompactum Dierckx foi isolado de fubá e xerém, e P. aurantiogriseum Dierckx e Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerlings foram detectados no fubá e farinha de milho pré-cozida. Fusarium moniliforme Sheldon produziu o maior número de unidades formadoras de colônias (352). Monascus ruber van Tieghen é citado pela primeira no Brasil, tendo sido isolado em milho processado. Espécies de Absidia, Aspergillus, Curvularia, Emericella, Fusarium, Monascus, Penicillium e Rhizopus são fungos contaminantes de produtos derivados do milho.

Isolamento e seleção de fungos filamentosos do solo de sistemas agroflorestais do Município de Bom Jardim (PE) com base na capacidade de produção de enzimas hidrolíticas

O presente trabalho teve por objetivo isolar e identificar fungos de solo de sistemas agroflorestais e avaliar a atividade enzimática destes fungos. Estes foram isolados pela técnica de diluição sucessiva e avaliados quanto à capacidade de degradar amido, celulose e caseína. Foram identificadas 11 espécies de fungos anamorfos (Hyphomycetes) distribuídos em cinco gêneros: Aspergillus, Cladosporium, Curvularia, Fusarium e Penicillium. As espécies estudadas não apresentaram atividade amilolítica satisfatória. Cladosporium cladosporioides (Fres.) De Vries e Penicillium chrysogenum Thom apresentaram maior índice de relação enzimática (IRE) para protease e celulase. Entre as espécies estudadas seis apresentaram maior Índice de Relação Enzimática (IRE) para celulase em comparação as demais enzimas.

Cytogenetic study of the genus Saguinus (Callithrichidae, Primates)

Eight subspecies from the genus Saguinus (S. fuscicollis fuscicollis, S. fuscicollis weddelli, S. bicolor bicolor, S. bicolor martinsi, S. mystax mystax, S. imperator imperator, S. midas midas, and S. midas niger) were studied. Five of them (S. f. fuscicollis, S. f. weddelli, S. b. martinsi, S. m. mystax and S. i. imperator) had their karyotypes described for the first time. Conventional coloration, banding patterns G, C and NOR, and G/C sequential banding tecniques were used. All samples showed the same diploid number (2n = 46). The patterns of the G, C and NOR bands were very similar with little differences in the quantity and constitutive heterochromatin distribution of the autosomes. Constitutive heterochromatin was observed only in telomeric regions of some chromosomes of S. f. fuscicollis and S. f. weddelli. The X chromosome was the same in all subspecies, but chromosome Y differed in size and morphology. XX/XY chimerism was verified in all subspecies

Fungal infections in marrow transplant recipients under antifungal prophylaxis with fluconazole

Fungal infection is one of the most important causes of morbidity and mortality in bone marrow transplant (BMT) recipients. The growing incidence of these infections is related to several factors including prolonged granulocytopenia, use of broad-spectrum antibiotics, conditioning regimens, and use of immunosuppression to avoid graft-versus-host disease (GvHD). In the present series, we report five cases of invasive mold infections documented among 64 BMT recipients undergoing fluconazole antifungal prophylaxis: 1) A strain of Scedosporium prolificans was isolated from a skin lesion that developed on day +72 after BMT in a chronic myeloid leukemic patient. 2) Invasive pulmonary aspergillosis (Aspergillus fumigatus) was diagnosed on day +29 in a patient with a long period of hospitalization before being transplanted for severe aplastic anemia. 3) A tumoral lung lesion due to Rhizopus arrhizus (zygomycosis) was observed in a transplanted patient who presented severe chronic GvHD. 4) A tumoral lesion due to Aspergillus spp involving the 7th, 8th and 9th right ribs and local soft tissue was diagnosed in a BMT patient on day +110. 5) A patient with a history of Ph1-positive acute lymphocytic leukemia exhibited a cerebral lesion on day +477 after receiving a BMT during an episode of severe chronic GvHD. At that time, blood and spinal fluid cultures yielded Fusarium sp. Opportunistic infections due to fungi other than Candida spp are becoming a major problem among BMT patients receiving systemic antifungal prophylaxis with fluconazole.

Comparative performance of two air samplers for monitoring airborne fungal propagules

Many studies have attempted to evaluate the importance of airborne fungi in the development of invasive fungal infection, especially for immunocompromised hosts. Several kinds of instruments are available to quantitate fungal propagule levels in air. We compared the performance of the most frequently used air sampler, the Andersen sampler with six stages, with a portable one, the Reuter centrifugal sampler (RCS). A total of 84 samples were analyzed, 42 with each sampler. Twenty-eight different fungal genera were identified in samples analyzed with the Andersen instrument. In samples obtained with the RCS only seven different fungal genera were identified. The three most frequently isolated genera in samples analyzed with both devices were Penicillium, Aspergillus and Cladophialophora. In areas supplied with a high efficiency particulate air filter, fungal spore levels were usually lower when compared to areas without these filters. There was a significant correlation between total fungal propagule measurements taken with both devices on each sampling occasion (Pearson coefficient = 0.50). However, the Andersen device recovered a broader spectrum of fungi. We conclude that the RCS can be used for quantitative estimates of airborne microbiological concentrations. For qualitative studies, however, this device cannot be recommended.

Purificação de três diferentes beta-galactosidades microbianas por partição em sistemas de duas fases aquosas

Este trabalho tratou da investigação do efeito do peso molecular de polietilenoglicol (PEG) sobre a partição de enzimas beta-galactosidases de diferentes origens microbianas: Escherichia coli, Klueveromyces lactis e Aspergillus orizae em sistemas de duas fases aquosas (SDFA).Foi observado que os melhores sistemas para purificação da enzima de E. coli foram os formados por PEG 4000, 6000 e 8000/fosfato, fornecendo os mais elevados fatores de purificação da enzima. As enzimas de Klueveromyces lactis e Aspergillus orizae não foram eficientemente purificadas nestes sistemas sendo insensíveis à alterações do peso molecular do PEG. Portanto, um outro sistema de duas fases aquosas foi desenvolvido contendo um ligante específico, p-aminofenil 1-tio-beta-D-galactopiranosídeo (APGP), acoplado ao PEG para purificar a enzima de Klueveromyces lactis. Uma etapa simples de partição no SDFA formado por 6% APGP-PEG4000 + 12% dextrana T505.000 foi capaz de recuperar 83% da enzima na fase superior do sistema e de aumentar 1,6 vezes o fator de purificação.

MONITORAMENTO DE FUNGOS EM MILHO EM GRÃO, GRITS E FUBÁ

O conhecimento de como a qualidade sanitária da matéria-prima afeta a qualidade dos seus subprodutos é muito importante para a indústria e para o consumidor. Para tanto foram analisadas 81 amostras de milho em grão, 81 de grits (canjica) e 81 de fubá coletadas semanalmente antes e após o processamento, durante aproximadamente 4 meses, para determinar a contaminação interna dos grãos por fungos. Os grãos destas amostras foram lavados externamente com uma solução de hipoclorito de sódio à 2% e semeados em dois meios de cultura, Ágar Batata Dextrose e Ágar Suco de Tomate. O fubá não sofreu lavagem sendo colocado pequenas porções diretamente sobre os meios de cultura. Após a incubação à 25° C durante 4 a 7 dias, os fungos foram contados e identificados. Os fungos encontrados pertenciam aos gêneros Aspergillus, Fusarium, Penicillium, Mucor e Rhizopus. Amostras de fubá apresentaram a maior porcentagem de infecção fúngica, provavelmente originada da matéria prima e/ou das condições de processamento e/ou armazenamento do mesmo. Os fungos isolados das amostras de milho em grão, grits e fubá estão normalmente presentes em produtos e subprodutos armazenados, e alguns deles podem ser toxigênicos e vir a causar sérios problemas à saúde humana.

ATIVIDADE ENZIMÁTICA DE MICRORGANISMOS ISOLADOS DO JACATUPÉ (Pachyrhizus erosus L. Urban)

O isolamento e a identificação de microrganismos produtores de enzimas de interesse comercial, utilizando tubérculos de jacatupé (Pachyrhizus erosus L. Urban), foi o objetivo principal deste trabalho. Isolaram-se microrganismos endofíticos e epifíticos identificados por observação micromorfológica. A avaliação da atividade enzimática das linhagens foi determinada pelo método de difusão em ágar. As sessenta e oito linhagens isoladas dos tubérculos de jacatupé foram cultivadas em meio sólido específico para amilase, lipase, protease e celulase por 96h a 280 C. Os microrganismos epifíticos encontrados foram Pithomyces (7,3%), Aspergillus (19,2%), Fusarium (5,9%) e Trichoderma (5,8%), e os endofíticos foram Mucor (7,3%), Rhizopus (10,3%), Bacillus (19,0%), Staphylococcus (10,3%) e Nocardiopsis (15%). As linhagens de Nocardiopsis sp. apresentaram atividade lipolítica superior à do padrão, porém a atividade amilolítica não apresentou diferença significativa comparada com o padrão. As linhagens de Mucor sp., Pithomyces sp. e Staphylococcus sp. produziram atividade proteolítica abaixo do padrão. Nenhum isolado apresentou atividade celulolítica.

Mycoflora and aflatoxigenic species in derivatives of milled rice

Thirty samples of rough rice stored for 6, 12 and 24 months in government authorized warehouses of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, were simultaneously collected. After milling of the product, 90 samples (30 of polished rice, 30 of rice bran and 30 of rice hull) were evaluated for their mycoflora, aflatoxigenic species and aflatoxin contamination. The following fungi, listed in decreasing order of frequency, were isolated on Potato-Dextrose Agar: Aspergillus spp., Nigrospora spp., Penicillium spp.; Fusarium spp.; Mucor spp.; Cladosporium spp.; Trichosporon spp. and non-sporulated fungi. The degree of fungal contamination (colony forming units per gram of product) was lowest in polished rice, increasing progressively in samples of rice bran and rice hull. Among the Aspergillus species, A. flavus and A. candidus were isolated most frequently. Of the A. flavus isolates, 52.6% strains were found to be toxigenic and produced only Group B aflatoxins. Analysis of the 90 samples did not reveal the presence of aflatoxins in the rice derivatives.

Ochratoxin A in Brazilian green coffee

Ochratoxin A is a nephrotoxic, teratogenic and imunotoxic compound produced by Aspergillus and Penicillium spp. It is a suspected carcinogen to humans and it is carcinogenic to rats. Recently it has drawn attention because it has been found in coffee and it has been the object of regulation by coffee importing countries. Brazil is the largest coffee producing country and its largest consumer. In order to conduct an initial assessment of the situation of the coffee produced in the country and offered to its population, one hundred and thirty two samples of Brazilian green coffee from 5 producing states (Minas Gerais, Paraná, São Paulo, Espírito Santo and Bahia) and destined for the home market, were collected at sales points at the cities of Londrina and Santos, Brazil, and analyzed for ochratoxin A. The toxin was isolated in immunoaffinity columns and quantified by HPLC with florescence detection. The limit of detection was 0.7ng/g and the average RSD for duplicates of the samples was 11%. Twenty seven samples were found contaminated with the toxin and the average concentration for the contaminated samples was 7.1ng/g ochratoxin A. Neither the total number of defects nor the number of specific defects according to the Brazilian coffee classification system (black, partly -- black, sour, stinkers-black, stinkers-green, pod beans) showed any relation to the contamination of the samples with ochratoxin A.

Aflatoxinas em produtos à base de milho comercializados no Brasil e riscos para a saúde humana

As aflatoxinas são metabólitos secundários tóxicos, produzidos por fungos do gênero Aspergillus. As técnicas de ensaio imunoenzimático (ELISA) e cromatografia em camada delgada (CCD) foram utilizadas na determinação de aflatoxina total, em produtos alimentícios à base de milho comercializados em Maringá e Marialva, Paraná, Brasil, entre abril de 2003 e março de 2004. Foram analisadas 123 amostras, das quais sete apresentaram-se positivas na CCD e 16 no ELISA. O valor médio de aflatoxina total encontrado nas amostras utilizando-se a CCD foi 0,62 µg/kg, enquanto que pela técnica ELISA foi encontrado o valor de 0,78 µg/kg. Os resultados apresentaram diferenças significativas entre ELISA e CCD (T=12, p=0,0469). Os dados demonstraram baixa ocorrência de aflatoxinas nos produtos à base de milho analisados. Entretanto, a Ingestão Diária Provável Média (IDP M) de AFB1 foi acima da Ingestão Diária Tolerável (IDT), indicando um risco de hepatocarcinogenicidade na população brasileira da Região Sul do Brasil, devido ao consumo de produtos à base de milho. O método ELISA mostrou-se simples, rápido e com menor uso de solventes orgânicos, porém apresentou resultados presuntivos positivos e negativos, tornando necessária a confirmação da identidade das micotoxinas pesquisadas por CCD.

Contaminação fúngica em granola comercial

O presente trabalho objetivou verificar a ocorrência de fungos produtores de micotoxinas, especialmente dos gêneros Aspergillus, Fusarium e Penicillium, em granola comercializada em Porto Alegre, uma vez que este alimento vem apresentando crescente consumo. Estes fungos filamentosos são evidenciados freqüentemente em cereais, os quais apresentam grande incidência em produtos à base de granola. Amostras de granola foram adquiridas no Mercado Público de Porto Alegre, no período de agosto de 2004 a abril de 2005, nas quatro estações do ano. A coleta baseou-se em quatro amostras de diferentes procedências, duas das quais são comercializadas embaladas e lacradas e duas comercializadas a granel. As análises seguiram os procedimentos descritos pelo Compendium of Methods for Examination of Foods. A identificação dos fungos baseou-se na morfologia macroscópica e microscópica, com auxílio de chaves de identificação. Os resultados evidenciaram a presença dos três gêneros fúngicos, com predominância de Aspergillus em três estações. No verão houve maior desenvolvimento micelial e no outono, menor crescimento de fungos. Os resultados sugerem maior controle e fiscalização, visando eliminar qualquer ocorrência de microrganismos produtores de toxinas em granola.

Caracterização de compostos nitrogenados presentes em farelos fermentados em estado sólido

Farelo de arroz desengordurado e farelo de trigo foram submetidos à fermentação em estado sólido pelos fungos Rhizopus sp. e Aspergillus oryzae, visando a obtenção de um produto enriquecido em proteínas, reaproveitando um subproduto da indústria beneficiadora de cereais. Os farelos fermentados obtidos foram caracterizados quanto aos seus compostos nitrogenados. Foi determinado o conteúdo protéico, de aminoácidos totais e digeríveis e de metionina disponível. Os maiores aumentos nos teores protéicos dos farelos foram observados com o microrganismo Rhizopus sp.. Os teores de aminoácidos totais, aminoácidos digeríveis e metionina disponíveis foram aumentados nos farelos fermentados por ambos os fungos, sendo que o escore químico, após 72 horas, variou entre 37,5 e 54,3%.