Natureza de anticorpos precipitantes específicos da paracoccidioidomicose (blastomicose Sul-Americana), revelados por contra-imunoeletroforese

Os Autores estudaram soros de 20 pacientes, portadores de paracoccidioidomicose (blastomicose Sul-Americana), utilizando coluna de Sephadex G-200 para a separação das imunoglobulinas e o método de contra-imunoeletroforese em agarose para a verificação de anticorpos específicos aos fungos. Como antígeno usaram culturas de Paracoccidioides em fase de levedura, tratadas por ultra-som. Os soros dos pacientes que apresentaram 1, 2, 3 ou 4 linhas de precipitação foram separados em coluna e as frações obtidas foram concentradas e examinadas em contra-imunoeletroforese, com o antígeno citado. Verificaram, assim, que apenas as frações com teor conveniente de imunoglobulinas IgG reproduziram os achados obtidos com os soros totais correspondentes; as frações com teor normal de IgA e IgM e com quantidade pequena ou nula de IgG não produziram linha de precipitação. Concluem que os anticorpos precipitantes em gel específicos do Paracoccidioides são do tipo IgG.

Resposta imune celular na vacinação anti-rábica canina

Os Autores estudaram a resposta imune celular e os níveis de anticorpos na vacinação e re-vacinação canina. A vacina utilizada foi a Fuenzalida & Palacios, empregada rotineiramente na imunização humana e canina, no Brasil. A avaliação da resposta mediada por células foi feita por testes de inibição de migração de leucócitos periféricos. Os níveis de anticorpos foram determinados por provas de soro-neutralização e fixação do complemento. Os cinco cães envolvidos no experimento receberam um esquema inicial de 5 doses e uma dose de reforço 210 dias após. Todos os animais exibiram níveis moderados de anticorpos após o esquema inicial e uma nítida resposta secundária após o reforço. A resposta imune celular, contudo, ocorreu apenas após a imunização inicial, não sendo detectada em resposta à dose de reforço. Concluem os Autores que a resposta imune celular ocorre na primo-vacinação anti-rábica canina nas condições experimentais empregadas e que embora a resposta secundária não tenha sido obtida neste estudo sua existência não pode ser descartada e deve ser reestudada em outras condições.

Aglutinina anti-T (Thomsen-Friedenreich) na doença de Chagas

Uma amostra de soros de pacientes e controles de uma área endêmica da Doença de Chagas do País foi titulada contra hemácias de grupo O tratadas pela neuraminidase (células OT ativadas) e hemacias normais de grupo A e B (sistema ABO). Também foram feitos alguns testes de aglutinação de hemácias de pacientes com cardiomiopatia com as lectinas de amendoim (anti-T + anti-Tk) e com anticorpo humano anti-T. O escore médio da aglutinina anti-T dos pacientes foi similar ao do grupo controle. En- tretanto, o escore médio dos indivíduos com a forma cardíaca íoi significantemente maior que o dos pacientes assintomáticos e também maior que o do grupo controle. A comparação entre indivíduos com sorologia diagnóstica positiva versus negativa foi não significante. Nem a sorologia para Chagas nem as variáveis raça, sexo, idade, idade ao quadrado, in-fecção intestinal parasitária, teor de proteínas do soro, volume globular eritrocitário (hema-tócrito), grau de palidez da mucosa bucal, cardíomiopatia e os termos de interação sexo x idade, sexo x idade ao quadrado, estão associados significativamente com o logaritmo do título ou com o logaritmo do escore de aglutinação. Os escores de aglutinação das aglutininas anti-A e anti-B do sistema de grupo sangüíneo ABO estão dentro da faixa de variação normal. As hemácias de pacientes com a forma cardíaca não são aglutinadas nem pelas lectinas de amendoim (antiT + anti-Tk) e da soja (anti-T) nem pela aglutinina anti-T de origem humana. A prova de Coombs direta foi negativa em todos os pacientes, demonstrando a aparente ausência de imunoglobulinas IgG e IgM na superfície eritrocitária. O fato de que o aumento dos níveis de anti-T só foi detectado em uma das formas clínicas da doença em pacientes da mesma área endêmica constitui um argumento contra a possibilidade de que a variação observada seja produzida por uma infecção concomitante.

Lectins for the detection of IgM antibodies to T. gondii in the diagnosis of acute toxoplasmosis by immunofluorescence test

Lectins were labeled with fluorescein and tried as conjugates in the immunofluorescence (IP) test for the detection of IgM antibodies to T. gondii, in the diagnosis of acute toxoplasmosis. This approach was an attempt to find alternative reagents for anti-human IgM fluorescent conjugates (AHIgMFC), which contain quite frequently anaibcdies to toxoplasma, as contaminants, due to natural T. gondii infections among animals used for imunization. Lentil (Lens culinaris) lectin fluorescence conjugates (LcFC) provided most satisfactory results. The evaluation of LcFC carried out in a total of 179 sera from patients with acute and chronic toxoplasmosis, with non-related infections or healthy subjects, gave high values of relative efficiency, co-positivity and co-negativity indices, respectively 0.989, 0.969 and 1.000, in reference to the conventional AHIgMFC. Moreover, three batches of LcFC successively prepared gave reproducible test results. The advantage of LcFC as an alternative reagent for the serodiagnosis of acute toxoplasmosis is supported by practical aspects of its preparation.

Prevalência de anticorpos para chlamydia trachomatis em grupos populacionais do Brasil, Inglaterra e Portugal

A prevalência de anticorpos IgG, grupo-específico para Chlamydia, em populações do Brasil, Inglaterra e Portugal foi determinada através do teste de imunofluorescência indireta, tendo-se como antígeno a cepa SA2 (f). Foram considerados positivos os soros com títulos de IgG >1:32. Dentre as populações brasileiras, a prevalência de anticorpos para Chlamydia foi maior em Serra Norte (76,2%, p < 0,01) do que nas das populações de Belém (53,6%) e dos Índios Xicrins (51,3%). Entre os pacientes do Departamento de Medicina Genito-Urinária do University College Hospital (UCH) e do quadro do mesmo Hospital, a prevalência de anticorpos anti-Chlamydia foi de 62% e 53,1%, respectivamente. Anticorpos anti-Chlamydia foram detectados em 54% e 66% na Inglaterra e em 56% e 68% em Portugal, nas pacientes do sexo feminino que freqüentavam Clínicas de Pré-Natal e de Infertilidade, respectivamente, Os resultados encontrados mostram uma alta exposição das populações testadas, à Chlamydia, principalmente do grupo de baixo nível sócio-econômico de Serra Norte, Brasil. A evidência de infecção por Chlamydia é da mesma ordem, tanto no Brasil, quanto na Inglaterra e Portugal.

Chagas' disease: IgA, IgM and IgG antibodies to T. cruzi amastigote, trypomastigote and epimastigote antigens in acute and in different chronic forms of the disease

In an attempt to find a better T. cruzi antigen and possible immunological markers for the diagnosis of different clinical forms of Chagas' disease, amastigote and trypomastigote antigens obtained from immunosuppressed mice infected with T. cruzi (Y strain) were assessed in comparison with conventional epimastigote antigens. A total of 506 serum samples from patients with acute and with chronic (indeterminate, cardiac and digestive) forms, from nonchagasic infections, and from healthy individuals were assayed in immunofluorescence (IF) tests, to search for IgG, IgM and IgA antibodies. Amastigote proved to be the most convenient antigen for our purposes, providing higher relative efficiency indexes of 0.946, 0.871 and 0.914 for IgG, IgM and IgA IF tests, respectively. Anti-amastigote antibodies presented higher geometric mean titers (GMT) than anti-trypomastigote and anti-epimastigote. Anti-amastigote IgG antibodies were found in all forms of Chagas' disease, and predominantly IgA antibodies, in chronic digestive and in acute forms, as well as IgM antibodies, in latter forms. Thus, tests with amastigote antigen could be helpful for screening chagasic infections in blood banks. Practical and economical aspects in obtaining amastigotes as here described speak in favour of its use in developing countries, since those from other sources require more complex system of substruction, specialized personnel or equipment.

Imunodiagnóstico da leptospirose humana através do teste ELISA-IgM, empregando-se diferentes preparações antigênicas a partir de sorotipos prevalentes de Leptospira interrogans

Realizou-se estudo comparativo de diferentes sorotipos de Leptospira interrogans utilizados na preparação de antígenos empregados no teste ELISA, para a detecção de anticorpos da classe IgM, em amostras de soro na fase precoce e tardia da leptospirose humana. Foram utilizados dez sorotipos, escolhidos entre os que apresentaram maior reatividade na soroaglutinação microscópica (SAM), na cidade de São Paulo. Os cinco sorotipos que apresentaram melhores resultados individualmente no teste ELISA-IgM (canicola, hebdomadis, icterohaemorrhagiae, cynopteri e brasiliensis), foram também estudados em mistura antigênica. Os antígenos não tratados apresentaram maior reatividade do que os antígenos tratados com Triton X - 100 (4%) à temperatura de 50ºC, durante 4 horas. O teste ELISA-IgM empregando os sorotipos não tratados, isoladamente, e em mistura antigênica, mostrou-se altamente sensível, podendo ser empregado como teste de triagem para o diagnóstico precoce da leptospirose humana. Outra aplicação do teste é permitir a detecção do início de situações epidêmicas ou de surtos, possibilitando acionar medidas de vigilância epidemiológica.

Estudo sobre o diagnóstico laboratorial e sintomas do dengue, durante epidemia ocorrida na região de Ribeirão Preto, SP, Brasil

Uma epidemia de dengue tipo 1 se iniciou em Novembro de 1990 na Região de Ribeirão Preto, Norte do Estado de São Paulo. Foram confirmados por exames laboratoriais cerca de 3.500 casos até fevereiro de 1991. A Unidade de Pesquisa em Virologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP, estudou soros de 502 pessoas suspeitas de apresentarem dengue. Fez-se o diagnóstico sorológico através do método da inibição da hemaglutinação (HAI) para dengue tipo 1 em 19% dos analisados. Passou-se a utlilizar um teste imuno-enzimático para dengue em culturas celulares infectadas (EIA-ICC), que permite identificação simultânea de IgG e IgM. O EIA-ICC embora menos sensível quando comparado ao HAI (89%), mostrou-se mais eficiente, porque: dispensou a obtenção de segundas amostras séricas para o diagnóstico; trata-se de técnica simples, podendo ser efetuada em apenas 5 horas. O vírus dengue tipo 1 foi isolado do sangue de 21 pacientes, por inoculação em células de mosquitos C6/36. Fez-se a identificação dos vírus isolados por método de imunofluorescência indireta, utilizando anti-soro contra todos os flavivirus e anticorpos monoclonais tipo-específicos de dengue. Os sintomas mais freqüentemente observados em 71 indivíduos com diagnóstico de dengue confirmado foram febre (90% dos casos), mialgias (57%) e artralgias (41%)

Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva. Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl. In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution. In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Application of anti-leptospira ELISA-lgM for the etiologic elucidation of meningitis

Leptospirosis is one of the causes of meningitis, although its importance is not well known. In the present study we contributed to this knowledge by demonstrating specific IgM class anti-leptospira antibodies by the immunoenzymatic method ELISA in 14.6% of cerebrospinal fluid (CSF) samples from 171 patients with meningitis considered to be of indeterminate etiology. The frequencies of positivity were similar in cases with predominance of polymorphonuclear or lymphomononuclear leucocytes in the CSF. Age distribution showed a predominance of the 5 to 15 year age range (72%), and sex distribution showed a predominance of males (68%). The authors discuss the contribution of this method to the etiologic elucidation of meningitis.

Identification of Toxoplasma gondii antigens involved in the IgM AND IgG indirect hemagglutination tests for the diagnosis of toxoplasmosis

Crude Toxoplasma gondii antigens represent raw material used to prepare reagents to be employed in different serologic tests for the diagnosis of toxoplasmosis, including the IgM and IgG indirect hemagglutination (IgG-HA and IgM-HA) tests. So far, the actual antigenic molecules of the parasite involved in the interaction with agglutinating anti-T. gondii antibodies in these tests are unknown. The absorption process of serum samples from toxoplasmosis patients with the IgG-HA reagent (G-toxo-HA) demonstrated that red cells from this reagent were coated with T. gondii antigens with Mr of 39, 35, 30, 27, 22 and 14 kDa. The immune-absorption process with the IgM-HA reagent (M-toxo-HA), in turn, provided antibody eluates which recognized antigenic bands of the parasite corresponding to Mr of 54, 35 and 30 kDa, implying that these antigens are coating red cells from this reagent. The identification of most relevant antigens for each type of HA reagent seems to be useful for the inspection of the raw antigenic material, as well as of reagent batches routinely produced. Moreover the present findings can be used to modify these reagents in order to improve the performance of HA tests for the diagnosis of toxoplasmosis

Serological diagnosis of toxoplasmosis: usefulness of IgA detection and IgG avidity determination in a patient with a persistent IgM antibody response to Toxoplasma gondii

We report the detection of specific IgA antibodies and the determination of IgG avidity in sequential serum samples from a patient exhibiting significant levels of Toxoplasma-specific IgM antibodies for seven years after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. IgM antibodies were detected by an indirect immunofluorescence test and by three commercial enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Anti-T. gondii IgA was quantified by the a-capture ELISA technique using a commercial kit. As defined by the manufacturer of the IgA ELISA test used, most patients with acute toxoplasmosis have antibody levels > 40 arbitrary units per ml (AU/mL). At this cut-off level, the patient still had a positive ELISA result (45 AU/mL) in a serum sample taken one year after the beginning of clinical manifestations. The IgG avidity-ELISA test was performed with the Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA system. Avidity indices compatible with a recent Toxoplasma infection were found only in serum samples taken during the first 5 months after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. These results show that the interpretation of positive IgM results as indicative of recently acquired toxoplasmosis requires additional laboratory confirmation either by other tests or by the demonstration of a significant rise in the antibody titers in sequential serum samples.

Production of monoclonal antibodies anti-Taenia crassiceps cysticerci with cross-reactivity with Taenia solium antigens

We describe the production of the potential monoclonal antibodies (MoAbs) using BALB/c mice immunized with vesicular fluid (VF)-Tcra (T. crassiceps) antigen. Immune sera presented anti-VF-Tcra (<20kD) IgG and IgM antibodies with cross-reactivity with T. solium (Tso) antigen (8-12, 14, and 18 kD). After cell fusion, we selected 33 anti-Tcra and anti-Tso reactive IgM-clones and 53 anti-Tcra specific IgG-clones, 5 of them also recognizing Tso antigens. Two clones identified the 8-14 and 18kD peptides of VF-Tcra.

Study of chronic hemolytic anaemia patients in Rio de Janeiro: prevalence of anti-human parvovirus B19 IgG antibodies and the developement aplastic crises

The prevalence of anti-human parvovirus B19 IgG antibodies was determined in sera from 165 chronic hemolytic anemia patients, receiving medical care at Instituto Estadual de Hematologia (IEHE), Rio de Janeiro, during the year of 1994. This sample represents around 10% of the chronic hemolytic anemia patients attending at IEHE. Most of these patients (140) have sickle cell disease. Anti-B19 IgG antibodies were detected in 32.1% of patients. No statistically significant difference (p > 0.05) was seen between IgG antibody prevalence in male (27.8%) and female (35.5%) patients. Anti-B19 IgG antibodies were more frequent in older (37.6%) than younger (28.2%) than 20 years old patients, although this difference had no statistical significance (p > 0.05). Anti-B19 IgG antibody prevalence showed that 67.9% of patients enrolled in the study were susceptible to B19 acute infection. With the aim to detect acute B19 infection, patients follow up continued until February 1996. During this period four patients presented transient aplastic crisis due to human parvovirus B19 as confirmed by the detection of specific IgM antibodies. All four patients were younger than 20 years old, and 3 were younger than 10 years old. Three of them were sickle cell disease patients. Three of the four acute B19 infection occurred during 1994 springtime.

Toxoplasma-IgM and IgG-avidity in single samples from areas with a high infection rate can determine the risk of mother-to-child transmission

Anti-Toxoplasma IgG-avidity was determined in 168 serum samples from IgG- and IgM-positive pregnant women at various times during pregnancy, in order to evaluate the predictive value for risk of mother-to-child transmission in a single sample, taking the limitations of conventional serology into account. The neonatal IgM was considered the serologic marker of transmission. Fluorometric tests for IgG, IgM (immunocapture) and IgG-avidity were performed. Fifty-one of the 128 pregnant women tested gave birth in the hospital and neonatal IgM was obtained. The results showed 32 (62.75%) pregnant women having high avidity, IgM indexes between 0.6 and 2.4, and no infected newborn. Nineteen (37.25%) had low or inconclusive avidity, IgM indexes between 0.6 and 11.9, and five infected newborns and one stillbirth. In two infected newborns and the stillbirth maternal IgM indexes were low and in one infected newborn the only maternal parameter that suggested fetal risk was IgG-avidity. In the present study, IgG-avidity performed in single samples from positive IgM pregnant women helped to determine the risk of transmission at any time during pregnancy, especially when the indexes of the two tests were analysed with respect to gestational age. This model may be less expensive in developing countries where there is a high prevalence of infection than the follow-up of susceptible mothers until childbirth with monthly serology, and it creates a new perspective for the diagnosis of congenital toxoplasmosis.