Iron from haemoglobin and haemin modulates nucleotide hydrolysis inTrichomonas vaginalis

Extracellular ATP may act as a danger signalling molecule, inducing inflammation and immune responses in infection sites. The ectonucleotidases NTPDase and ecto-5’-nucleotidase are enzymes that modulate extracellular nucleotide levels; these enzymes have been previously characterised in Trichomonas vaginalis. Iron plays an important role in the complex trichomonal pathogenesis. Herein, the effects of iron on growth, nucleotide hydrolysis and NTPDase gene expression in T. vaginalisisolates from female and male patients were evaluated. Iron from different sources sustainedT. vaginalis growth. Importantly, iron from haemoglobin (HB) and haemin (HM) enhanced NTPDase activity in isolates from female patients and conversely reduced the enzyme activity in isolates from male patients. Iron treatments could not alter the NTPDase transcript levels in T. vaginalis. Furthermore, our results reveal a distinct ATP, ADP and AMP hydrolysis profile between isolates from female and male patients influenced by iron from HB and HM. Our data indicate the participation of NTPDase and ecto-5’-nucleotidase in the establishment of trichomonas infection through ATP degradation and adenosine production influenced by iron.

Brain ischemia alters platelet ATP diphosphohydrolase and 5'-nucleotidase activities in naive and preconditioned rats

The effects of transient forebrain ischemia, reperfusion and ischemic preconditioning on rat blood platelet ATP diphosphohydrolase and 5'-nucleotidase activities were evaluated. Adult Wistar rats were submitted to 2 or 10 min of single ischemic episodes, or to 10 min of ischemia 1 day after a 2-min ischemic episode (ischemic preconditioning) by the four-vessel occlusion method. Rats submitted to single ischemic insults were reperfused for 60 min and for 1, 2, 5, 10 and 30 days after ischemia; preconditioned rats were reperfused for 60 min 1 and 2 days after the long ischemic episode. Brain ischemia (2 or 10 min) inhibited ATP and ADP hydrolysis by platelet ATP diphosphohydrolase. On the other hand, AMP hydrolysis by 5'-nucleotidase was increased after 2, but not 10, min of ischemia. Ischemic preconditioning followed by 10 min of ischemia caused activation of both enzymes. Variable periods of reperfusion distinctly affected each experimental group. Enzyme activities returned to control levels in the 2-min group. However, the decrease in ATP diphosphohydrolase activity was maintained up to 30 days of reperfusion after 10-min ischemia. 5'-Nucleotidase activity was decreased 60 min and 1 day following 10-min ischemia; interestingly, enzymatic activity was increased after 2 and 5 days of reperfusion, and returned to control levels after 10 days. Ischemic preconditioning cancelled the effects of 10-min ischemia on the enzymatic activities. These results indicate that brain ischemia and ischemic preconditioning induce peripheral effects on ecto-enzymes from rat platelets involved in nucleotide metabolism. Thus, ATP, ADP and AMP degradation and probably the generation of adenosine in the circulation may be altered, leading to regulation of microthrombus formation since ADP aggregates platelets and adenosine is an inhibitor of platelet aggregation.

Ectonucleotidase activities in Sertoli cells from immature rats

Sertoli cells have been shown to be targets for extracellular purines such as ATP and adenosine. These purines evoke responses in Sertoli cells through two subtypes of purinoreceptors, P2Y2 and P A1. The signals to purinoreceptors are usually terminated by the action of ectonucleotidases. To demonstrate these enzymatic activities, we cultured rat Sertoli cells for four days and then used them for different assays. ATP, ADP and AMP hydrolysis was estimated by measuring the Pi released using a colorimetric method. Adenosine deaminase activity (EC 3.5.4.4) was determined by HPLC. The cells were not disrupted after 40 min of incubation and the enzymatic activities were considered to be ectocellularly localized. ATP and ADP hydrolysis was markedly increased by the addition of divalent cations to the reaction medium. A competition plot demonstrated that only one enzymatic site is responsible for the hydrolysis of ATP and ADP. This result indicates that the enzyme that acts on the degradation of tri- and diphosphate nucleosides on the surface of Sertoli cells is a true ATP diphosphohydrolase (EC 3.6.1.5) (specific activities of 113 ± 6 and 21 ± 2 nmol Pi mg-1 min-1 for ATP and ADP, respectively). The ecto-5'-nucleotidase (EC 3.1.3.5) and ectoadenosine deaminase activities (specific activities of 32 ± 2 nmol Pi mg-1 min-1 for AMP and 1.52 ± 0.13 nmol adenosine mg-1 min-1, respectively) were shown to be able to terminate the effects of purines and may be relevant for the physiological control of extracellular levels of nucleotides and nucleosides inside the seminiferous tubules.

Influência do AMP cíclico na regeneração do nervo facial em ratos

Estimular a regeneração do nervo facial é ainda hoje um desafio. OBJETIVO: Estudar a possível influência neurotrófica do nucleotídeo cíclico adenosina monofosfato (AMPc) na regeneração do nervo facial de ratos Wistar. MÉTODO: Trinta e dois animais foram submetidos à transecção completa com sutura imediata do nervo facial direito, sendo divididos em expostos ou não expostos à aplicação tópica de AMPc, com análises comportamentais (movimentação de vibrissas e fechamento da rima palpebral) e histométrica (contagem de fibras mielinizadas) em dois períodos, 14 e 28 dias após a lesão. RESULTADO: Encontramos diferenças estatísticas (p<0,05) nas análises comportamental e histométrica no 14º dia, sugerindo uma precocidade na regeneração do nervo facial exposto ao AMPc. CONCLUSÃO: Nosso estudo constatou uma possível ação neurotrófica do AMPc na regeneração do nervo facial em ratos.

Influência de temperatura, luz e giberelina na germinação de sementes de Thlaspi caerulescens J. Presl &amp; C. Presl (Brassicaceae)

Thlaspi caerulescens é espécie hiperacumuladora de metais como Cd2+, Ni2+ e Zn2+, considerada como uma plantamodelo para estudar a acumulação e tolerância a metais pesados. No entanto, a baixa produção de sementes em nossas condições climáticas tornam necessária a determinação de condições que possam maximizar a germinação e o vigor de suas sementes. Para identificar as melhores condições para a germinação, sementes de T. caerulescens foram colocadas na presença (15 mmol.m-2.s-1, 8 h luz/16 h escuro) ou ausência de luz nas temperaturas de 10, 15, 20 e 25 ºC, em papel germitest previamente umedecido com solução de ácido giberélico (GA3) a 0,05% ou água destilada. Foram avaliados a porcentagem de germinação (%G) e o índice de velocidade de germinação (IVG). Maior porcentagem de germinação (66%) foi observada nos tratamentos com GA3 e temperaturas de 15 e 20 ºC, na presença de luz. Maiores valores do IVG foram obtidos com a utilização de GA3 nas temperaturas de 15 e 20 ºC, tanto na presença quanto na ausência de luz. Maiores germinação e IVG de T. caerulescens foram observados com uso de GA3 na presença de luz nas temperaturas de 15 e 20 ºC.

Influência do substrato e do enraizamento na aclimatização de Melocactus glaucescens Buining &amp; Brederoo propagados in vitro

Melocactus glaucescens (Cactaceae) é espécie endêmica da Bahia e está incluída na lista da IUCN e MMA como ameaçada de extinção. A transferência da condição in vitro para o ambiente ex vitro é uma etapa crítica, podendo ser um fator limitante para a produção das mudas micropropagadas. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito de diferentes substratos e do enraizamento na aclimatização de Melocactus glaucescens. As plantas propagadas in vitro foram mantidas sob 100% de luminosidade, com regas diárias por 75 dias. Os resultados demonstraram que o substrato adequado para a aclimatização deve conter 50% de terra vegetal e 50% de areia lavada; o tamanho mínimo do diâmetro e do comprimento da parte aérea para transferência para as condições ex vitro é de 5 mm e que as etapas de enraizamento in vitro e rustificação podem ser eliminadas da micropropagação de M. glaucescens. Estudos para demonstrar tempos de dessecação dos brotos acima de 5 mm são necessários, para se eliminar completamente a etapa do enraizamento in vitro para esta espécie.

Seletividade de inseticidas, recomendados para cucurbitáceas para Trichogramma atopovirilia Oatman &amp; Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae) em condições de laboratório

As brocas-das-cucurbitáceas Diaphania spp. são as principais pragas das cucurbitáceas, podendo ocasionar perdas de até 100% na produção. A fim de reduzir o uso de inseticidas, o controle biológico, aplicado com parasitoides do gênero Trichogramma, tem-se destacado. Objetivou-se avaliar a seletividade dos ingredientes ativos abamectina, tiacloprido e clorfenapir, para Trichogramma atopovirilia Oatman &amp; Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae). Para isso, 20 fêmeas recém-emergidas de T. atopovirilla foram individualizadas, em tubos de vidro (2,5 cm de diâmetro x 8,5 cm de comprimento), e oferecidas cartelas com 30 ovos de Diaphania hyalinata (Linnaeus) (Lepidoptera: Pyralidae), previamente imersas por cinco segundos em calda química. Os ingredientes ativos abamectina, tiacloprido e clorfenapir não afetaram o parasitismo de T. atopovirilia. Clorfenapir reduziu a emergência. Abamectina e tiacloprido são os mais recomendados no manejo integrado de pragas, pois foram os que se mostraram mais seletivos a T. atopovirilia em ovos de D. hyalinata.

Germinação in vitro e desenvolvimento pós-seminal de plântulas de Pilosocereus aurisetus (Werderm.) Byles &amp; G.D. Rowley (Cactaceae)

Pilosocereus aurisetus é uma espécie de cactos de importância econômica e ambiental que se encontra em risco de extinção. A propagação em áreas naturais ocorre, principalmente, de forma sexuada; entretanto, não há registro da germinação e viabilidade de sementes e morfologia pós-seminal de plântulas dessa espécie. Assim, objetivou-se avaliar a germinação de sementes e descrever a morfologia do desenvolvimento pós-seminal de plântulas de P. aurisetus. Para isso, sementes, armazenadas em condições ambientais por 19 meses, foram submetidas aos tratamentos: embebição em água por 24 horas; pré-resfriamento; imersão em solução de giberelina, nas concentrações de 250 mg L-1 e 500 mg L-1; e um tratamento controle. As sementes foram colocadas para germinar em meio de cultura MS, por 30 dias, quando se avaliou a percentagem de germinação. O delineamento estatístico foi o inteiramente casualizado, com cinco tratamentos e quatro repetições, sendo dispostas 25 sementes por parcela. A caracterização pós-seminal foi realizada por um período de 60 dias, utilizando-se microscópio binocular, com base nas Regras para Análise de Sementes. Maior percentagem da germinação de sementes ocorreu no controle, ou quando embebidas por 24 horas, sendo observados 90% e 83%, respectivamente. A morfologia do desenvolvimento pós-seminal indicou que a germinação é do tipo epígea, com hipocótilo de reserva; suas plântulas sofrem modificações na região do colo, para a emissão de raízes, e apresentam cerdas no ápice caulinar, mesmo na fase inicial da expansão cotiledonar. A diferenciação e início da formação das costelas iniciam-se aos 60 dias após a germinação, com o desenvolvimento do epicótilo.

Parasitismo de ovos de Leptopharsa heveae Drake &amp; Poor por Erythmelus tingitiphagus (Soares) em plantios de seringueira com aplicação de produtos fitossanitários

O percevejo-de-renda Leptopharsa heveae Drake &amp; Poor (Hemiptera: Tingidae) é uma das principais pragas da heveicultura no Brasil, podendo causar prejuízos de até 30% na produtividade de látex. Seu controle é realizado principalmente com uso de produtos fitossanitários e uma das alternativas a seu uso seria a utilização de inimigos naturais. O parasitoide Erythmelus tingitiphagus (Soares) (Hymenoptera: Mymaridae) é um importante inimigo natural de L. heveae, por parasitar seus ovos em condições naturais. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência e o parasitismo de E. tingitiphagus, em ovos de L. heveae, em talhões comerciais de cinco clones de seringueira onde se realizaram aplicações regulares de produtos fitossanitários, no município de Itiquira, MT. Semanalmente, entre agosto de 2006 a janeiro de 2007, foram coletadas aleatoriamente quatro folhas maduras em cinco árvores dos clones RRIM 600, PR 255, GT 1, PB 235 e PB 217. Na área de estudo, E. tingitiphagus ocorreu em todos os clones estudados, com pico populacional em outubro de 2006. A porcentagem de parasitismo nos diferentes clones variou de 13,8% no clone PB 235 a 30,8% no RRIM 600 e a porcentagem média de parasitismo foi de 24,2%. Os produtos fitossanitários, no método em que foram aplicados nos talhões, não atuaram negativamente no parasitismo de E. tingitiphagus.

Profundidade de semeadura e superação de dormência no crescimento inicial de sementes de Brachiaria dictyoneura (Fig. &amp; De Not.) Stapf (1919) cv. Llanero

O Brasil é o maior produtor, consumidor e exportador de sementes de espécies forrageiras de clima tropical. Objetivou-se, com este estudo, avaliar o desenvolvimento inicial de Brachiaria dictyoneura cv. Llanero, em função da profundidade de semeadura e dos métodos de superação de dormência. O trabalho foi realizado em casa de vegetação, em blocos casualizados, com quatro repetições e em esquema de parcela subdividida. Os tratamentos aplicados às parcelas foram cinco, com as profundidades de semeadura de 0,0; 2,0; 4,0; 6,0 e 8,0 cm e, nas subparcelas, os métodos de superação da dormência com e sem escarificação. Cada parcela experimental foi constituída de 25 sementes. A partir do 10º dia de semeadura iniciou-se a contagem de plantas emergidas, a fim de se determinar o índice de velocidade de emergência e, aos 35 dias posteriores à semeadura, avaliou-se a emergência das plântulas, a altura de plantas e a matéria seca da parte aérea. As sementes de B. dictioneura semeadas em torno de 4,0 cm de profundidade e submetidas à escarificação mecânica apresentaram melhor desenvolvimento em todos os parâmetros avaliados. A semeadura superficial e aquela em profundidades abaixo de 4,0 cm mostraram-se ineficientes para o desenvolvimento inicial de B. dictioneura.