Establishing the reference range for t lymphocytes subpopulations in adults and children from Brazil

Os valores de refer��ncias de linf��citos T existentes no Brasil s��o baseados em dados originados de outros pa��ses. N��o existem dados locais da varia����o normal para estes par��metros em adultos e crian��as brasileiras. Avaliamos a varia����o normal encontrada em doadores de sangue de cinco grandes cidades brasileiras em diferentes regi��es e em crian��as residentes em Salvador e Rio de Janeiro. Todas as amostras foram processadas por citometria de fluxo. Os resultados foram analisados de acordo com regi��o, g��nero e estilo de vida dos doadores. Um total de 641 adultos (63% homens) e 280 crian��as (58% meninos) participaram do estudo. Valores absolutos de CD3+ e CD4+ foram significantemente maiores no g��nero feminino (adultos e crian��as). Maiores valores de CD4+ em adultos foram associados com tabagismo, enquanto que maiores valores de CD8+ foram encontrados entre crian��as do sexo feminino. Adultos das regi��es sul e sudeste apresentaram maiores valores absolutos para todas as c��lulas T enquanto que adultos da regi��o norte, apresentaram menores valores. Indiv��duos residentes no nordeste e centro-oeste obtiveram contagens intermedi��rias para todas as popula����es de c��lulas T. Entretanto, estas diferen��as entre as regi��es, n��o demonstraram diferen��a estat��stica. No Brasil, g��nero e tabagismo foram os principais determinantes para diferen��as em valores de refer��ncias de linf��citos T.

Reference range for T lymphocytes populations in blood donors from two different regions in Brazil

ABSTRACT: This study defined the normal variation range for different subsets of T-lymphocyte cells count in two different Brazilian regions. We analysed the T-lymphocytes subpopulations (CD3+, CD4+, CD8+) in blood donors of two Brazilian cities, located in North (Belem, capital state of Para, indian background) and Northeast (Salvador, capital state od Bahia, African background) regions of Brazil. Results were compared according to gender, stress level (sleep time lower than 8 hours/day), smoking, and alcohol intake. Lymphocytes subpopulations were measured by flow cytometry. Five hundred twenty-six blood donors from two Brazilians cities participated in the study: 450 samples from Bahia and 76 samples from Par��. Most (60%) were men, 59% reported alcohol intake, 12% were smokers, and 80% slept at least 8 h/day. Donors from Bahia presented with significantly higher counts for all parameters, compared with Para. Women had higher lymphocytes levels, in both states, but only CD4+ cells count was significantly higher than men's values. Smokers had higher CD4+ counts, but sleep time had effect on lymphocytes levels only for Para's donors (higher CD3+ and CD4+ counts). That state had also, a higher proportion of donors reporting sleep time <8 h/day. The values for CD3, CD4 and CD8+ cells count were significantly higher in blood donors from Bahia than among those from Par��. Female gender, alcohol intake, stress level, and smoking were associated with higher lymphocyte counts. The use of a single reference range for normal lymphocytes count is not appropriate for a country with such diversity, like Brazil is.

Mutagenicity of hydroxyurea in lymphocytes from patients with sickle cell disease

Hydroxyurea is commonly used in the treatment of myeloproliferative diseases and in patients with sickle cell disease (SCD). The use of this antineoplastic agent in patients with SCD is justified because of the drug's ability to increase fetal hemoglobin levels, thereby decreasing the severity of SCD. However, high doses or prolonged treatment with hydroxyurea can be cytotoxic or genotoxic for these patients, with an increased risk of developing acute leukemia. This danger can be avoided by monitoring the lymphocytes of patients treated with hydroxyurea. Cytogenetic tests are important endpoints for monitoring the physiological effects of physical and chemical agents, including drugs. In this work, we assessed the genotoxicity of hydroxyurea in short-term cultures of lymphocytes from SCD patients. Hydroxyurea was not cytotoxic or genotoxic at the concentrations tested in the G2 phase of the cell cycle. These results support the use of hydroxyurea in the treatment of SCD, although further work is necessary to understand the effects of this drug in vivo

Indu����o de escler��ticas in vitro e an��lise da resposta imune dos pacientes de cromoblastomicose em tratamento com itraconazol

A cromoblastomicose (CBM) �� uma doen��a f��ngica cr��nica que acomete a pele, caracterizada pelo desenvolvimento de les��es polim��rficas, que apresentam infiltrado inflamat��rio granulomatoso na presen��a de c��lulas escler��ticas, patognom��nicas desta doen��a. Um dos objetivos deste estudo foi avaliar a indu����o de c��lulas escler��ticas por meios naturais, com biomassas de Bactris gasipaes e de Theobroma grandiflorum, cujas respectivas esp��cies induziram in vitro c��lulas escler��ticas similares ��quelas encontradas nos tecidos de les��es humanas, em 10 e 2 dias, respectivamente, o que viabilizou a produ����o de um meio indutor em p��, j�� disponibilizado a outros grupos que estudam a CBM. Outro objetivo foi avaliar a imunopatologia da CBM nos pacientes, antes e durante a utiliza����o de itraconazol (ITZ). Para isto, foi utilizada a t��cnica de ELISA para as citocinas TNF-���, IL-4 e IL-10 circulantes, e a imunohistoqu��mica de bi��psias das les��es em diferentes tempos de tratamento ��� que permitiu analisar as altera����es quantitativas e qualitativas dos tipos celulares durante 12 meses do tratamento com ITZ na dose de 200 mg/dia ��� com anticorpos anti-CD20, anti-CD8 e anti-CD68. Quanto as citocinas, a IL-10 circulante n��o mostrou nenhuma mudan��a significativa, enquanto IL-4 e TNF-�� apresentaram um aumento da titula����o ao longo de 12 meses de tratamento. Em rela����o �� imunofenotipagem, houve uma diminui����o significativa no processo inflamat��rio e nos infiltrados celulares durante 3 e 6 meses do tratamento, enquanto que apenas aos 12 meses houve a regress��o significativa do n��mero de escler��ticas. A Imunofenotipagem revelou que os macr��fagos est��o localizados principalmente nas ��reas centrais do granuloma, enquanto que as c��lulas TCD8+ est��o na periferia e as c��lulas TCD20+ encontram-se homogeneamente distribu��das, com um aumento significativo ap��s 6 meses do tratamento, retornando aos n��veis iniciais ap��s um ano. Os macr��fagos e linf��citos citot��xicos s��o recrutados para o s��tio de infec����o durante o tratamento, apresentando um aumento significativo ap��s 12 meses de tratamento com ITZ. Estes resultados demonstram que a forma����o do granuloma na CBM �� semelhante ��queles observados em outras doen��as infecciosas granulomatosas, e que a presen��a de IL-4 e IL-10 podem estar relacionadas com a persist��ncia do fungo nas les��es e com a dificuldade de cura observada nestes pacientes.

Cytotoxicity and genotoxicity of low doses of mercury chloride and methylmercury chloride on human lymphocytes in vitro

Mercury is a xenobiotic metal that is a highly deleterious environmental pollutant. The biotransformation of mercury chloride (HgCl2) into methylmercury chloride (CH3HgCl) in aquatic environments is well-known and humans are exposed by consumption of contaminated fish, shellfish and algae. The objective of the present study was to determine the changes induced in vitro by two mercury compounds (HgCl2 and CH3HgCl) in cultured human lymphocytes. Short-term human leukocyte cultures from 10 healthy donors (5 females and 5 males) were set-up by adding drops of whole blood in complete medium. Cultures were separately and simultaneously treated with low doses (0.1 to 1000 ��g/l) of HgCl2 and CH3HgCl and incubated at 37��C for 48 h. Genotoxicity was assessed by chromosome aberrations and polyploid cells. Mitotic index was used as a measure of cytotoxicity. A significant increase (P < 0.05) in the relative frequency of chromosome aberrations was observed for all concentrations of CH3HgCl when compared to control, whether alone or in an evident sinergistic combination with HgCl2. The frequency of polyploid cells was also significantly increased (P < 0.05) when compared to control after exposure to all concentrations of CH3HgCl alone or in combination with HgCl2. CH3HgCl significantly decreased (P < 0.05) the mitotic index at 100 and 1000 ��g/l alone, and at 1, 10, 100, and 1000 ��g/l when combined with HgCl2, showing a synergistic cytotoxic effect. Our data showed that low concentrations of CH3HgCl might be cytotoxic/genotoxic. Such effects may indicate early cellular changes with possible biological consequences and should be considered in the preliminary evaluation of the risks of populations exposed in vivo to low doses of mercury.

Caracteriza����o molecular e imunol��gica da infec����o pelo V��rus linfotr��pico de c��lulas T humanas

O presente estudo teve como objetivos efetuar a caracteriza����o molecular e imunol��gica da infec����o pelo HTLV em 42 portadores assintom��ticos da infec����o pelo HTLV; e 19 portadores com sintomas neurol��gicos associados �� infec����o (16 com PET/MAH e outros tr��s com neuropatia perif��rica). Outro grupo de 100 indiv��duos soronegativos para HTLV procedentes de Bel��m-PA tamb��m foi analisado. As amostras de sangue foram processadas para realiza����o da sorologia para HTLV, para contagem de linf��citos T CD4+ e T CD8+ (incluindo os soronegativos), para as t��cnicas de quantifica����o da carga proviral do HTLV e caracteriza����o dos tipos e subtipos de HTLV circulantes nos infectados. Entre os 42 assintom��ticos, foi positiva para o HTLV-1 35 amostras (83.3%), e para o HTLV-2 07 amostras (16.7%) (p < 0.0001). Entre os 19 sintom��ticos, foi positiva para o HTLV-1 18 amostras (94.7%), e para o HTLV-2 01 amostra (5.3%) (p = 0.0002), onde as 16 amostras que tiveram diagn��stico de PET/MAH foram positivas HTLV-1. As an��lises filogen��ticas das regi��es 5���LTR agruparam 34 amostras (60%) de HTLV-1 no Subgrupo Transcontinental do Subtipo Cosmopolita; e 05 amostras (72.2%) de HTLV-2, no subtipo HTLV-2c. As m��dias de distribui����o dos n��veis de linf��citos T CD4+ e T CD8+ foi maior entre os sintom��ticos, por��m n��o havendo diferen��as significantes quando comparados com os assintom��ticos e controles soronegativos. Foi observada uma maior m��dia de carga proviral entre os portadores sintom��ticos quando comparados aos assintom��ticos (p = 0.0123). Os resultados obtidos confirmam a ocorr��ncia de PET/MAH associada �� infec����o pelo HTLV-1 na regi��o de Bel��m-PA. A predomin��ncia do subtipo A de HTLV-1 corrobora outros resultados que demonstram a presen��a deste subtipo como o mais prevalente em ��reas urbanas do Brasil, assim como a predomin��ncia de HTLV-2c entre as infectadas pelo HTLV-2 confirma a maior frequ��ncia deste subtipo na Amaz��nia brasileira, ressaltando que dentre as amostras de HTLV-2 est�� a de um paciente sintom��tico (neuropatia perif��rica). A maior m��dia de carga proviral entre sintom��ticos corrobora resultados de achados que associam esta vari��vel ao desenvolvimento de PET/MAH entre os infectados pelo HTLV. Sendo assim, estes resultados indicam ainda a necessidade do monitoramento da descri����o de casos de infec����o pelo HTLV com diagn��stico cl��nicolaboratorial adequado.

Estudo soroepidemiol��gico da co-infec����o pelo V��rus da hepatite B em portadores do HIV-1 e/ou com SIDA/AIDS no Estado do Amap��

Fatores de risco e formas de transmiss��o do V��rus da Imunodefici��ncia humana (HIV) e o V��rus da hepatite B (VHB) s��o freq��entemente os mesmos, o qual explica a alta freq����ncia de co-infec����o envolvendo esses dois agentes. O objetivo desta pesquisa foi estimar a preval��ncia da infec����o pelo VHB, analisar poss��veis fatores de risco bem como examinar a associa����o entre a contagem de linf��citos T CD4⁺, CD8⁺ e carga viral plasm��tica em 129 portadores do HIV. Cada participante foi submetido a um question��rio espec��fico e tinha uma amostra de sangue testada para os marcadores sorol��gicos HBsAg, anti-HBc total, anti-HBs, contagem de linf��citos T CD4⁺, CD8⁺ e carga viral plasm��tica. A preval��ncia total de marcadores para o VHB foi de 46,5%, com 3,1% de soropositividade para o HBsAg, 27,1% para o anti-HBc total e 36,4% para o anti-HBs. Ap��s ajuste por regress��o log��stica, os marcadores sorol��gicos para hepatite B foram associados com as seguintes vari��veis: sexo, prefer��ncia sexual e escolaridade. A freq����ncia de marcadores para hepatite B foi de 39,1% em homens e 16,6% em mulheres. A preval��ncia de marcadores para hepatite B foi 14,4% em homo/bissexuais e 15,4% em heterossexuais. A menor freq����ncia de hepatite B (1%) foi encontrada em pessoas com n��vel superior de escolaridade. N��o foram observadas diferen��as estatisticamente significante entre contagem de linf��citos CD4⁺, CD8⁺ e carga viral plasm��tica em pacientes co-infectados com VHB comparados com aqueles pacientes infectados somente com HIV.

Investiga����o dos polimorfismos nos genes FAS e FASL em indiv��duos infectados pelo V��rus da imunodefici��ncia humana-1 (HIV-1)

No presente estudo foram investigadas as freq����ncias dos polimorfismos nos genes FAS e FASL em um grupo de 198 indiv��duos soropositivos para o HIV-1 e 191 indiv��duos controles soronegativos, com o objetivo de avaliar a ocorr��ncia de uma poss��vel associa����o entre os polimorfismos nestes genes e a infec����o pelo HIV-1. A identifica����o dos alelos A e G do polimorfismo -670 FAS foi realizada por meio da t��cnica de PCR, utilizando seq����ncias de iniciadores espec��ficos e posterior digest��o enzim��tica (RFLP) com a enzima MvaI. A identifica����o dos alelos A e G do polimorfismo -124 FASL, bem como T e delT do polimorfismo -169 FASL foi realizada atrav��s da t��cnica de ACRS, seguido de RFLP com as endonucleases de restri����o FokI e HincII, respectivamente. As an��lises das freq����ncias al��licas e genot��picas dos polimorfismos analisados n��o mostraram qualquer diferen��a significativa entre soropositivos e soronegativos. A an��lise da quantifica����o dos linf��citos T CD4⁺ entre os portadores dos diferentes gen��tipos do polimorfismo -670 FAS revelou uma associa����o significativa, sugerindo que o estado de portador do alelo G, em homo ou heterozigose, nos indiv��duos infectados pelo HIV-1 pode ser um fator de prote����o �� deple����o destas c��lulas no curso da infec����o pelo HIV-1. As associa����es entre o n��mero de linf��citos TCD8⁺, a carga viral plasm��tica e os polimorfismos analisados n��o foram estatisticamente significantes. Desse modo, pode-se sugerir, que o polimorfismo -670 do gene FAS, influencie na apoptose dos linf��citos T CD4⁺ no curso da infec����o pelo HIV-1, assim, faz-se necess��rio estudos adicionais visando confirmar ou n��o esta associa����o, uma vez que a identifica����o desse polimorfismo pode ser, no futuro, uma importante ferramenta a ser utilizada no acompanhamento da infec����o.