A polymerase chain reaction for detection of Brucella canis in vaginal swabs of naturally infected bitches

A PCR assay for the detection of Brucella canis in canine vaginal swab samples was evaluated, comparing its performance with that of bacterial isolation, serological tests, and a blood PCR assay. One hundred and forty-four female dogs were clinically examined to detect reproductive problems and they were tested by the rapid slide agglutination test, with and without 2-mercaptoethanol (2ME-RSAT and RSAT, respectively). In addition, microbiological culture and PCR were performed on blood and vaginal swab samples. The results of the vaginal swab PCR were compared to those of the other tests using the Kappa coefficient and McNemar test. of the 144 females that were examined, 66 (45.8%) were RSAT positive, 23 (15.9%) were 2ME-RSAT positive, 49 (34.02%) were blood culture positive, 6 (4.1%) were vaginal swab culture positive, 54 (37.5%) were blood PCR positive, 52 (36.2%) were vaginal swab PCR positive, and 50.69% (73/144) were positive by the combined PCR. The PCR was able to detect as few as 3.8 fg of B. canis DNA experimentally diluted in 54 ng of canine DNA, extracted from vaginal swab samples of non-infected bitches. In addition, the PCR assay amplified B. canis genetic sequences from vaginal swab samples containing 1.0 x 10(0) cfu/mL. In conclusion, vaginal swab PCR was a good candidate as a confirmatory test for brucellosis diagnosis in bitches suspected to be infected, especially those negative on blood culture or blood PCR; these animals may be important reservoirs of infection and could complicate attempts to eradicate the disease in confined populations. (C) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

Mannheimiose pneumônica experimentalmente induzida em bezerros pela Mannheimia (Pasteurella) haemolytica A1-cepa D153: achados do exame físico, hemograma e swabs nasal e nasofaringeano

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Incidência de colonização retovaginal por Streptococcus agalactiae em gestantes e avaliação de cultura de swabs combinados

A identificação de fatores de risco para colonização vaginal materna por Streptococcus agalactiae tem sido objeto de estudo na literatura mundial pois essa colonização frequentemente é assintomática e pode causar bacteremia nos recémnascidos, com significante morbidade e mortalidade, especialmente em prematuros. O objetivo do estudo foi associar a colonização por S. agalactiae com o padrão da microbiota vaginal das gestantes e avaliar a eficácia de swabs combinados na detecção de S. agalactiae. Foram incluídas no estudo 405 gestantes em idade gestacional entre 35 e 37 semanas, atendidas no Pré-Natal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Utilizando-se swabs estéreis foram obtidas amostras da região anorretal, do intróito vaginal e do terço distal da parede vaginal. O material coletado foi cultivado em caldo Todd Hewit suplementado com colistina (10g/mL) e ácido nalidíxico (15g/mL), por 18 a 24 horas à 37oC, em seguida, realizada subcultura em ágar-sangue a 5% sob as mesmas condições. As colônias sugestivas de S. agalactiae foram submetidas a coloração de Gram e ao teste da catalase e ao CAMP test. O padrão de microbiota vaginal foi avaliado empregandose a técnica de coloração de Gram. Os dados sócio-demográficos e obstétricos foram obtidos por formulário próprio. Considerando como variável resposta a colonização materna ou não por S. agalactiae, foi ajustado um modelo de regressão logística adotando o método stepwise, considerando as variáveis explanatórias quantitativas e qualitativas. Para positividade de cultura em swabs combinados e isolados foi empregado o teste de Tukey. colonização materna por S. agalactiae foi de 25,4%. Em relação à microbiota vaginal, as alterações mais freqüentes foram vaginose citolítica (11,3%) seguido de vaginose bacteriana (10,9%), candidíase (8,2%) e Flora II ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Isolation and characterization of Flavobacterium columnare (Bernardet et al. 2002) from four tropical fish species in Brazil

Flavobacterium columnare é o agente etiológico da columnariose em peixes de água doce, ocasionando enfermidade na pele e nas brânquias, provocando freqüentemente um grande número de mortalidade. O objetivo deste estudo foi o isolamento e a caracterização de Flavobacterium columnare em peixes tropicais no Brasil. Piracanjuba (Brycon orbignyanus), pacu (Piaractus mesopotamicus), tambaqui (Colossoma macropomum) e cascudo (Hypostomus plecostomus) foram examinados externamente com relação a sinais característicos de columnariose, como manchas acinzentadas na cabeça, região dorsal e pedúnculo caudal dos peixes. A amostragem compreendeu a coleta de 50 exemplares de peixes, representando as quatro diferentes espécies escolhidas para este estudo. Amostras para o isolamento foram obtidas através de raspado com swab estéril das lesões e do rim dos peixes clinicamente diagnosticados como acometidos por columnarios e imediatamente semeados em meios de culturas artificiais (líquido e sólido) próprios para o estudo de Flavobacterium segundo Carlson e Pacha (1968). No meio líquido, houve o desenvolvimento de microrganismos que observados em gota pendente apresentaram a forma de bacilos finos, longos, móveis por deslizamento. Através da coloração de Gram, apresentaram morfologia de bacilos finos, Gram negativos, agrupados em colunas. em meio sólido, as colônias eram pequenas, cinza-amareladas, com borda em forma de raiz. No total, foram obtidos quatro isolamentos: 01 cepa de Brycon orbignyanus; 01 cepa de Piaractus mesopotamicus; 01 cepa de Colossoma macropomum; e 01 cepa de Hypostomus plecostomus. A caracterização bioquímica das amostras, como absorção do vermelho Congo, produção de flexirrubina, produção de H2S e redução do nitrato, sugere que os isolamentos poderiam ser classificados como Flavobacterium columnare.

Comparação dos caldos selenito cistina, tetrationato Muller-Kauffmann e Rappaport-Vassiliadis no isolamento de Salmonella Typhimurium

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Detecção de formas amastigotas em exame parasitológico de esfregaço obtido a partir de suabe conjuntival de cães com leishmaniose visceral

Leishmaniose é uma enfermidade multissistêmica cujas manifestações clínicas são extremamente variáveis. em cães sinais clínicos oftálmicos são relativamente frequentes, ainda que outros sinais sistêmicos não sejam identificados. Atualmente, o diagnóstico da doença baseia-se em métodos parasitológicos, sorológicos e moleculares, mas, até o momento, a identificação de formas amastigotas desse parasito em esfregaços feitos a partir de suabes conjuntivais não é empregada rotineiramente. Valendo-se de cães sorologicamente positivos para leishmaniose, portadores (G1) ou não (G2) de alterações oftálmicas, este estudo avaliou a viabilidade do esfregaço a partir de suabe conjuntival como método de diagnóstico para a enfermidade. O exame suprarreferido foi positivo em 60% dos animais do G1 e 38,1% do G2, no entanto não houve diferença estatisticamente significativa em relação à positividade nos dois grupos (P=0,2167). Os dados apontam para uma tendência de os cães com leishmaniose e com sinais oftálmicos serem positivos ao exame parasitológico de esfregaço a partir de suabe conjuntival, podendo esse método ser útil no diagnóstico parasitológico da leishmaniose canina.

Avaliação clínica da infecção experimental de bezerros com Salmonella Typhimurium

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Prevalence of newcastle disease virus in broiler chickens (Gallus gallus) in Brazil

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Newcastle disease in white Pekin ducks: response to experimental vaccination and challenge

A total of 120 Pekin ducks were distributed at random into four experimental groups, vaccinated or not against Newcastle disease (ND): G1 (Ulster 2C strain), G2 (B1 strain), G3 (LaSota strain), and G4 (nonvaccinated group). At 60 days of age, all groups were challenged with a pathogenic ND virus (NDV) suspension, and a group of specific pathogen free (SPF) chicks (G5) was also inoculated. Cloacal and tracheal swabs from all birds were collected after six, 14, 20, and 30 days post-challenge for virus isolation. NDV was isolated in 100% of SPF chicks. Pekin ducks from all groups, vaccinated or not, did not show any ND clinical signs, demonstrating that these birds are not susceptible to ND clinical disease. In the control group (G4), the virus was isolated 20 to 30 days after challenge, suggesting their possible NDV carrier state. In the vaccinated groups, no virus was isolated. This demonstrates that vaccination of white Pekin ducks against NDV is important to reduce NDV shedding in the field.

Experimental airborne transmission of Salmonella Agona and Salmonella Typhimurium in weaned pigs

This study tested the hypothesis of airborne transmission of Salmonella Agona (Trial I) and Salmonella Typhimurium (Trial II) in weaned pigs. The trials were performed using stainless-steel/glass isolation cabinets connected by air ducts to permit an unidirectional airflow from cabinet 1 (two control pigs) to cabinet 3 (two sentinel pigs), passing through cabinet 2 (two inoculated pigs). Air samples, pooled faecal samples from the floor and rectal swabs were collected daily and assessed by culture and PCR. A fumigation chamber and rubber gloves coupled to the cabinets allowed sampling without opening the system. Trials I and II lasted 15 and 19 days respectively. The recovery of S. Agona and S. Typhimurium and detection of scroconversion in sentinel pigs indicate that airborne Salmonella transmission in weaned pigs over short distances is possible. Further studies on the role of aerosols in the epidemiology of Salmonella in intensive pig production should be performed.

Chlamydophila psittaci in free-living Blue-fronted Amazon parrots (Amazona aestiva) and Hyacinth macaws (Anodorhynchus hyacinthinus) in the Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil

Chlamydophila psittaci (C. psittaci) infection was evaluated in 77 free-living nestlings of Blue-fronted Amazon parrots (Amazona aestiva) and Hyacinth macaws (Anodorhynchus hyacinthinus) in the Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. Tracheal and cloacal swab samples from 32 wild parrot and 45 macaw nestlings were submitted to semi-nested PCR, while serum samples were submitted to complement fixation test (CFT). Although all 32 Amazon parrot serum samples were negative by CFT, cloacal swabs from two birds were positive for Chlamydophila DNA by semi-nested PCR (6.3%); these positive birds were 32 and 45 days old. In macaws, tracheal and cloacal swabs were positive in 8.9% and 26.7% of the samples, respectively. Complement-fixing antibodies were detected in 4.8% of the macaw nestlings; macaw nestlings with positive findings were between 33 and 88 days old. These results indicate widespread dissemination of this pathogen in the two evaluated psittacine populations. No birds had clinical signs suggestive of chlamydiosis. To the best of our knowledge, this is the first report on C. psittaci in free-living Blue-fronted Amazon parrots and Hyacinth macaws in Brazil. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Systemic and local antibodies induced by an experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus type 1

Uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) foi produzida com o objetivo de se avaliar a resposta imune humoral local e sistêmica contra o BoHV-1, em 12 novilhas soronegativas, após a vacinação e a revacinação. Os soros foram submetidos à prova de vírus-neutralização para quantificação do título de anticorpos neutralizantes e a um ELISA para detecção de IgG1 e IgG2. Os swabs nasais também foram submetidos ao ELISA para detecção de IgG1 e IgG2 na secreção nasal. Os resultados demonstraram que títulos de anticorpos neutralizantes foram induzidos após a revacinação, em níveis moderados a altos, permanecendo em níveis significativos no soro sanguíneo e na secreção nasal até o dia 114 pós-vacinação. O IgG2 foi o isótipo predominante na maior parte do período pós-vacinação, tanto na secreção nasal, como no compartimento sistêmico. A vacina experimental inativada contra o BoHV-1 estimulou níveis de anticorpos potencialmente protetores dos isótipos IgG1 e IgG2, tanto no compartimento sistêmico, como nas mucosas.

Genetic similarity between staphylococcus sp isolated from human and hospital settings, and susceptibility to different antimicrobials

Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de swabs no caldo BHI, em um hospital escola da cidade de Ribeirão Preto/SP. As amostras coletadas foram incubadas a 37ºC por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar Staphylococcus Médium 110. As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram colhidas e estocados a 4ºC até o momento de elaboração das provas de catalase, manitol, hemólise, DNAse e coagulase. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 10 diferentes antibióticos. Das 92 cepas de Staphylococcus sp isoladas, 67 (72,8%) foram identificados como Staphylococcus coagulase-negativas e 25 (27,2%) como Staphylococcus coagulase-positivas. A análise de similaridade mostrou uma grande heterogeneidade entre as cepas, entretanto foram isoladas algumas cepas com 100% de similaridade. Resistência a oxacilina foi encontrada em 39 (42%) cepas. Duas cepas de estafilococos coagulase-negativos mostraram-se resistentes a vancomicina. Onze cepas (12%) de estafilococos foram consideradas multirresistentes. Medidas de desinfecção das mãos de pessoal e dos leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos podem contribuir para a queda da transmissão de patógenos e diminuição da pressão de seleção, e conseqüentemente diminuindo a freqüência e letalidade das infecções nosocomiais.

Avaliação clínica da infecção experimental de bezerros com Salmonella Dublin

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Survey on Chlamydophila psittaci in captive ramphastids in São Paulo State, Brazil

Chlamydophila psittaci (C. psittaci) has been detected in 460 avian species, among them the most frequent are the Psittaciformes, Columbiformes, Anseriformes and raptors. In Brazil, the main avian species recognized as healthy carriers belong to the order Psittaciformes and Columbiformes, but very few studies have been done in other bird families. Reports of the occurrence of this disease in the clinical form are rare in the Ramphastids; consequently, they are not commonly evaluated for this agent. The present study reports the investigation of C. psittaci in 25 captive ramphastids from a zoological park in São Paulo State, Brazil. Swabs samples from the cloaca were submitted to semi-nested polymerase chain reaction (semi-nested PCR) for direct detection of the microorganism. Additionally, blood samples obtained from these birds were submitted to the Complement Fixation Test (CFT) for detection of antibodies anti-C. psittaci. The presence of C. psittaci was not detected in the cloacal swab samples tested by the PCR. Nevertheless, 16% (4/25) of the bird's sera were positive by the CFT. Among the species with positive results, there are the saffron toucanet (Pteroglossus bailloni) and black-necked-aracari (Pteroglossus aracari), two species with no descriptions of the survey of C. psittaci published in the literature. Intermittent elimination of C. psittaci is a feature of chronically infected birds; however the absence of a positive-antigen sample did not guarantee that the bird is Chlamydophila-free. The serological results obtained show that the ramphastids tested were previously exposed to the pathogen and developed immune response, but showed no clinical signs of the disease and didn't eliminate regularly the organism in their feces in the moment of the sample collection.