Refolding and purification of bothropstoxin-1, a Lys49 - Phospholipase A(2) homologue, expressed as inclusion bodies in Escherichia coli

Hydrolysis of phospholipids by Group II phospholipase A(2) enzymes involves a nucleophilic attack on the sn-2 ester bond by the His48 residue and stabilization of the reaction intermediate by a Ca2+ ion cofactor bound to the Asp49 residue in the protein active site region, Bothropstoxin-I (BthTX-I) is a PLA, variant present in the venom of the snake Bothrops jararacussu which shows a Asp49 to Lys substitution and which lacks hydrolytic activity yet damages artificial membranes by a noncatalytic Ca2+-independent mechanism. In order to better characterize this unusual mechanism of membrane damage, we have established an expression system for BthTX-I in Escherichia coli. The DNA-coding sequence for BthTX-I was subcloned into the vector pET11-d, and the BthTX-I was expressed as inclusion bodies in E, coli BL21(DE3). The native BthTX-I contains seven disulfide bonds, and a straightforward protocol has been developed to refold the recombinant protein at high protein concentration in the presence of surfactants using a size-exclusion chromatography matrix. After refolding, recovery yields of 2.5% (corresponding to 4-5 mg of refolded recombinant BthTX-I per liter of bacterial culture) were routinely obtained. After refolding, identical fluorescent and circular dichroism spectra were obtained for the recombinant BthTX-I compared to those of the native protein. Furthermore, the native and refolded recombinant protein demonstrated identical membrane-damaging properties as evaluated by measuring the release of an entrapped fluorescent marker from liposomes, (C) 2001 Academic Press.

Representações de estudantes universitários sobre alunos cotistas: confronto de valores

A inclusão da política de cotas, nas universidades brasileiras, é recente. Apesar da adesão de várias instituições de ensino, esse tipo de política tem gerado posições contraditórias. Este estudo teve como objetivo investigar quais valores estão mais presentes na avaliação que universitários fazem a respeito de supostos usuários das cotas. Na pesquisa, foram aplicados diferentes tipos de questionários em 403 estudantes de uma universidade pública paulista, os quais objetivaram verificar se suas representações sobre esse tema variavam conforme as possibilidades de ingresso na universidade, a saber: vestibular simples, cursinhos para alunos carentes e cotas e, conforme os públicos-alvo enfocados, negros ou alunos de escolas públicas. Como método de análise, foi utilizado o programa ALCESTE e, como recurso complementar, a análise de conteúdo. Os resultados demonstraram que há uma rejeição às políticas relacionadas às cotas, uma vez que estas foram percebidas como mais ameaçadoras do que aquelas referentes ao vestibular e ao cursinho gratuito. Na grande parte das respostas dadas pelos alunos, fica evidente o conflito de valores: mérito versus igualdade compensatória. O vestibular, baseado apenas no mérito, é representado como o sistema mais justo para ingresso de alunos de escola pública e, principalmente de negros, na universidade. Valores como justiça, igualdade, esforço próprio, sobre os quais a maioria dos universitários respalda suas respostas contrárias às cotas, estão sendo questionados pelas políticas de ação afirmativa, o que indica que enfrentá-los é o grande desafio posto a essas políticas.

Multifuncionalidade e gramaticalização de Já no português falado culto

Pós-graduação em Estudos Linguísticos - IBILCE

Novas tecnologias para detecção de lesões de cárie oclusal

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudos fisiológicos e moleculares durante a superação da dormência morfológica de sementes de Annona crassiflora

Pós-graduação em Agronomia (Agricultura) - FCA

O ensino profissional estadual paulista dos anos de 1940 a 1970: trajetória na cidade de Orlândia

Pós-graduação em Educação Escolar - FCLAR

Reabilitação estética com enfoque nas diferentes cores de substratos e na escolha da cor do cimento adesivo

The evolution of techniques and materials applied to adhesive ceramic restorations resulted in the intensification of its use, proving to be an excellent method of aesthetic restoration. Some important features of this technique are its conservative preparation, which avoids an excessive loss of tooth structure and its high aesthetic value provided by the ceramic even when utilized under different color of dental substrates. The aim of this paper was to report a clinical case with full crowns, porcelain veneers and non-prep veneers, enhancing peculiarities related to the material used, tooth preparation techniques, cementing, indications and contraindications.