Aberrant expression of E-cadherin and beta-catenin proteins in placenta of bovine embryos derived from somatic cell nuclear transfer

Abnormal placental development is common in the bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT)-derived fetus. In the present study, we characterised the expression of E-cadherin and beta-catenin, structural proteins of adherens junctions, in SCNT gestations as a model for impaired placentation. Cotyledonary tissues were separated from pregnant uteri of SCNT (n - 6) and control pregnancies (n - 8) obtained by artificial insemination. Samples were analysed by western blot, quantitative RT-PCR (qRT-PCR) and immunohistochemistry. Bovine trophectoderm cell lines derived from SCNT and control embryos were analysed to compare with the in utero condition. Although no differences in E-cadherin or beta-catenin mRNA abundance were observed in fetal tissues between the two groups, proteins encoded by these genes were markedly under-expressed in SCNT trophoblast cells. Immunohistochemistry revealed a different pattern of E-cadherin and total beta-catenin localisation in SCNT placentas compared with controls. No difference was observed in subcellular localisation of dephosphorylated active-beta-catenin protein in SCNT tissues compared with controls. However, qRT-PCR confirmed that the wingless (WNT)/beta-catenin signalling pathway target genes CCND1, CLDN1 and MSX1 were downregulated in SCNT placentas. No differences were detected between two groups of bovine trophectoderm cell lines. Our results suggest that impaired expression of E-cadherin and beta-catenin proteins, along with defective beta-catenin signalling during embryo attachment, specifically during placentation, is a molecular mechanism explaining insufficient placentation in the bovine SCNT-derived fetus.

The effects of genistein and daidzein on cell proliferation kinetics in HT29 colon cancer cells: the expression of CTNNBIP1 (beta-catenin), APC (adenomatous polyposis coli) and BIRC5 (survivin)

Soybean isoflavonoids have received significant attention due to their potential anticarcinogenic and antiproliferative effects and possible role in many signal transduction pathways. However, their mechanisms of action and their molecular targets remain to be further elucidated. In this paper, we demonstrated that two soybean isoflavones (genistein and daidzein) reduced the proliferation of the human colon adenocarcinoma grade II cell line (HT-29) at concentrations of 25 and 50-100 mu M, respectively. We then investigated the effects of genistein and daidzein by RT-PCR on molecules that involved in tumor development and progression by their regulation of cell proliferation. At a concentration of 50 mu M genistein, there was suppressed expression of beta-catenin (CTNNBIP1). Neither genistein nor daidzein affected APC (adenomatous polyposis coli) or survivin (BIRC5) expression when cells were treated with concentrations of 10 or 50 mu M. These data suggest that the down-regulation of beta-catenin by genistein may constitute an important determinant of the suppression of HT-29 cell growth and may be exploited for the prevention and treatment of colon cancer.

Desenvolvimento ponderal de bubalinos da raça Murrah criados em pastagem de Brachiaria brizantha no Centro-Oeste do Estado de São Paulo, Brasil

Foram analisados os dados de desempenho ponderal de bubalinos Murrah do Sistema de Produção de Leite da Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, campus de Botucatu. Os pesos foram corrigidos às diversas idades-padrão e o modelo incluiu os efeitos de sexo (S), mês (M) e ano (A) de nascimento, classe de idade da búfala ao parto (C) e as interações S x M, S x A, S x C e M x A. As médias ajustadas e respectivos erros-padrão estimados para as características estudadas foram: Peso ao Nascer (PN): 37,71 ± 8,25kg; Peso aos 120 dias (P120): 102,08 ± 16,27kg; Peso aos 240 dias (P240): 169,84 ± 22,83kg; Peso aos 365 dias (P365): 250,59 ± 25,12kg; Peso aos 550 dias (P550): 326,13 ± 39,27kg e Peso aos 730 dias (P730): 389,80 ± 31,26kg. O efeito de sexo (S) foi significativo somente para PN e P365, sendo que machos tenderam a nascer mais pesados que fêmeas. O mês de nascimento (M) exerceu efeito sobre o PN, P120 e P730 sendo que animais nascidos em maio foram os mais pesados ao nascer, enquanto os nascidos em janeiro e maio, foram os mais pesados aos 120 e 730 dias, respectivamente. O efeito de ano de foi significativo sobre o PN, P120, P240 e P730. Os filhos de búfalas das classes de idade 1 (3 anos ou menos) e da classe 6 (10,11 e 12 anos) foram os mais leves e mais pesados ao nascer, respectivamente. O fato de a classe de idade da búfala não exercer efeito sobre os P365, P550 e P730 sugere que, em rebanhos comerciais possa ser feita a substituição de búfalas não gestantes por novilhas prenhes, apesar de esta prática reduzir a média de idade do rebanho de cria. Bubalinos da raça Murrah oriundos de rebanhos leiteiros podem ser utilizados para a produção de carne.

Análise da variabilidade genética aditiva de características de crescimento na raça Nelore

Foram utilizados dados de cinqüenta e um rebanhos participantes do Programa de Melhoramento Genético da Raça Nelore (PMGRN), distribuídos nos estados de Goiás (GO), Mato Grosso do Sul (MS), Mato Grosso (MT), Minas Gerais (MG), São Paulo (SP), Maranhão (MA) e Bahia (BA). Foram obtidas estimativas de parâmetros genéticos para os pesos padronizados aos 120 (P120), 455 (P455) e 550 (P550) dias de idade. Análises unicaráter e bicaráter foram realizadas por modelo animal usando o aplicativo MTDFREML. Para P120 foi utilizado um modelo que incluiu como efeitos fixos, grupo de contemporâneos e classe de idade da vaca ao parto, e como aleatórios, os efeitos genéticos direto, materno e de ambiente permanente da vaca. Para P455 e P550, o modelo utilizado incluiu os mesmos efeitos fixos e o efeito genético direto do animal. ANas análises unicaráter, as estimativas de herdabilidade direta foram 0,29, 0,51 e 0,47 para P120, P455 e P550, respectivamente. Nas análises bicaráter, observaram-se coeficientes de herdabilidade direta de 0,50 e 0,58 para P120, 0,50 e 0,53 para P455 e 0,44 e 0,49 para P550. As correlações genéticas estimadas entre P120 e P455, P120 e P550 e P455 e P550, foram 0,92, 0,93 e 0,96, respectivamente. As estimativas de herdabilidade obtidas para P455 e as correlações genéticas deste peso com P120 e P550 sugerem que a avaliação genética pode ser feita aos 15 meses de idade em substituição aos 18 meses.

Seleção para peso pós-desmama em um rebanho Gir. 2. Estimativas de variâncias e parâmetros genéticos dos efeitos direto e materno para características de crescimento

Componentes de variância e parâmetros genéticos para características de crescimento foram estimados usando diferentes modelos em um rebanho da raça Gir. Utilizou-se o método da máxima verossimilhança restrita sob modelo animal univariado. Os modelos de análise incluíram os efeitos fixos de mês de nascimento, grupo contemporâneo e idade da vaca. Cinco modelos diferindo quanto aos efeitos aleatórios foram testados. Para todas as características da fase pré-desmama, o teste de razão de verossimilhança (LRT) indicou o modelo com efeito genético aditivo direto e efeitos maternos (genético e de ambiente permanente) como o de melhor ajuste. As estimativas de herdabilidade direta para peso ao nascer (PN), peso aos quatro meses corrigido para 120 dias (P120), peso à desmama corrigido para 210 dias (P210) e ganho diário na fase pré-desmama (GPRE) foram, respectivamente, 0,31± 0,07; 0,14 ± 0,06; 0,23 ± 0,07 e 0,22 ± 0,07. Para as características da fase pós-desmama, o modelo que forneceu o melhor ajuste aos dados incluiu apenas o efeito genético aditivo direto. As estimativas de herdabilidade direta para peso de machos ao final da prova de ganho de peso (P378), peso de fêmeas corrigido para 550 dias (P550), ganho diário na prova de ganho de peso (G112), altura aos 378 dias em machos (AM) e altura aos 550 dias, em fêmeas (AF) foram, respectivamente: 0,45 ± 0,11; 0,29 ± 0,11; 0,37 ± 0,11; 0,79 ± 0,13 e 0,36 ± 0,0. Os efeitos maternos, tanto o genético quanto o de ambiente permanente, foram fontes de variação importantes para as características da fase pré-desmama, não sendo verificada influência desses efeitos sobre as características da fase pós-desmama.

Estimativas de parâmetros genéticos de características de crescimento em um rebanho Caracu selecionado para peso ao sobreano

Foram analisados registros de 1.698 animais de um rebanho Caracu selecionado para peso pós-desmame entre os anos 1979 e 2002 com o objetivo de verificar a existência de variabilidade genética aditiva nas características de crescimento e suas interpretações. As características analisadas foram: peso ao nascer (PN), peso padronizado aos 120 dias (P120), peso ao desmame padronizado aos 210 dias (P210), peso de machos ao final da prova de ganho de peso (P378) e ganhos diários do nascimento ao desmame (GND), dos machos na prova de ganho de peso (G112), do desmame ao sobreano em machos (GDSm), peso de fêmeas padronizado aos 550 dias (P550) e ganhos das fêmeas em pastagem do desmame ao sobreano (GDSf), além da altura da garupa a um ano em machos (ALTm) e ao sobreano em fêmeas (ALTf). Os componentes de (co) variâncias, as herdabilidades e as correlações genéticas foram estimados por máxima verossimilhança restrita não-derivativa utilizando-se o software MTDFREML. As estimativas de herdabilidade e os erros-padrão foram iguais a 0,34±0,06; 0,11±0,05; 0,13±0,05; 0,11±0,05; 0,35±0,09; 0,42±0,09; 0,31±0,09; 0,13±0,06; 0,21±0,08; 0,55±0,11; 0,51±0,09 para PN, P120, P210, GND, P378, P550, GDSm, GDSf, G112, ALTm e ALTf, respectivamente. As correlações genéticas entre as características foram de moderadas a altas e positivas, com exceção de algumas correlações com a característica GDSf e o PN. A seleção com base no desempenho do próprio indivíduo, como tem sido realizada, proporciona progresso genético nas características de seleção direta, assim como em algumas características com alta correlação genética.

Efeito da seleção para peso pós-desmama sobre indicadores da eficiência produtiva de vacas da raça Nelore

O objetivo deste estudo foi avaliar indicadores da eficiência produtiva de vacas Nelore selecionadas para peso pós-desmama, enfocados nas relações peso bezerro e peso da vaca, nos rebanhos controle (NeC), não-selecionados para peso pós-desmama, seleção (NeS) e tradicional (NeT). As análises envolveram 3929 e 3906 pesos dos bezerros aos 120 (P120) e 210 (P210) dias de idade, respectivamente. Os pesos das vacas àquelas idades também foram considerados, obtendo-se 3824 (PV120) e 3777 (PV210) registros, respectivamente, para 120 e 210 dias. A análise incluiu 183, 375 e 554 vacas dos rebanhos NeC, NeS e NeT, respectivamente. Para as análises utilizou-se o procedimento GLM/SAS, em modelos que incluíram os efeitos fixos de rebanho, ano e mês de nascimento, sexo do bezerro, idade da vaca ao parto e as interações rebanho x ano de nascimento e ano x mês de nascimento. Todos os efeitos foram significativos. Os resultados mostraram respostas correlacionadas positivas na seleção para peso pós-desmama nos pesos dos bezerros e, em menor magnitude, no peso das vacas. As relações peso bezerro e peso da vaca apresentaram valores médios ajustados de 249,0±2,1; 253,7±1,6; e 255,8±1,2 g/kg para R120 e 362,9±2,8; 368,5±2,1; e 374,6±1,7 para NeC, NeS e NeT em R210, respectivamente, indicando que, nas duas idades, os rebanhos NeS e NeT produziram mais quilogramas de bezerro por quilogramas de vaca, quando comparados ao NeC.

Estimativas de parâmetros genéticos para altura do posterior, peso e circunferência escrotal em bovinos da raça Nelore

Visando estimar parâmetros genéticos em bovinos, foram utilizados registros de pesos padronizados aos 120, 210, 365, 450 e 550 dias de idade (P120, P210, P365, P450 e P550), altura do posterior mensurada próxima ao sobreano (ALT) e circunferências escrotais (CE) padronizadas aos 365, 450 e 550 dias de idade (CE365, CE450 e CE550). Os dados foram provenientes de animais machos e fêmeas, nascidos entre 1998 e 2003 em dez fazendas de seis estados brasileiros. Os componentes de (co)variância foram estimados pela metodologia REML em análises uni, bi e trivariadas, utilizando-se modelos animal. As estimativas de herdabilidade do efeito direto com os respectivos erros-padrão foram: ALT 0,63 (0,09), P120 0,25 (0,03), P210 0,34 (0,03), P365 0,45 (0,04), P450 0,48 (0,04), P550 0,49 (0,04), CE365 0,48 (0,04), CE450 0,53 (0,04) e CE550 0,42 (0,09). As correlações genéticas entre a ALT e as variáveis P120, P210, P365, P450 e P550 foram de 0,68; 0,64; 0,53; 0,58 e 0,59, respectivamente. As associações genéticas do P120 com as CE ajustadas para peso e idade foram próximas de zero, entretanto, essas correlações foram positivas e moderadas, quando as CE foram ajustadas somente pela idade. As correlações genéticas da ALT com as CE, quando ajustadas para peso e idade, foram: -0,19 (CE365), -0,24 (CE450) e 0,00 (CE550). Utilizando um modelo que não incluiu o peso do animal como covariável, as correlações genéticas das CE com a ALT foram: 0,21 (CE365), 0,12 (CE450) e 0,39 (CE550). Essas estimativas indicam que as características de crescimento e CE apresentam variabilidade genética na raça Nelore, podendo ser incluídas em programas de melhoramento genético, e a seleção para peso em qualquer idade deve acarretar aumento na estatura dos animais. Desta forma, para obtenção de animais com tamanho e peso adequados ao sistema de produção, faz-se necessária a utilização de um índice de seleção aliando estas características.

Implication of RNA-Binding Protein La in Proliferation, Migration and Invasion of Lymph Node-Metastasized Hypopharyngeal SCC Cells

The 5-year survival rate for oral cavity cancer is poorer than for breast, colon or prostate cancer, and has improved only slightly in the last three decades. Hence, new therapeutic strategies are urgently needed. Here we demonstrate by tissue micro array analysis for the first time that RNA-binding protein La is significantly overexpressed in oral squamous cell carcinoma (SCC). Within this study we therefore addressed the question whether siRNA-mediated depletion of the La protein may interfere with known tumor-promoting characteristics of head and neck SCC cells. Our studies demonstrate that the La protein promotes cell proliferation, migration and invasion of lymph node-metastasized hypopharyngeal SCC cells. We also reveal that La is required for the expression of beta-catenin as well as matrix metalloproteinase type 2 (MMP-2) within these cells. Taken together these data suggest a so far unknown function of the RNA-binding protein La in promoting tumor progression of head and neck SCC.

Comparação entre alguns critérios de seleção para crescimento na raça Nelore

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Expression of betacatenin in carcinoma in pleomorphic adenoma, pleomorphic adenoma and normal salivary gland: an immunohistochemical study

OBJECTIVES: Pleomorphic adenomas are the most frequent type of epithelial salivary gland neoplasms, and their malignant counterpart, the carcinoma in pleomorphic adenomas, is much less common. Beta-catenin is a cell adhesion molecule associated with the invasion and metastasis of carcinomas of the head and neck, esophagus. The objective of this study was to detect the expression of beta-catenin in pleomorphic adenomas, carcinomas in pleomorphic adenomas and normal salivary glands to discuss its role in the development of these two lesions. STUDY DESIGN: The expression of beta-catenin (BD Transduction Laboratories) was analyzed by immunohistochemistry in formalin-fixed, paraffin embedded specimens by the avidin-biotin-peroxidase complex method in 16 pleomorphic adenomas (12 from minor salivary glands), 3 carcinomas in pleomorphic adenomas (all from palate) and 10 normal salivary glands as control group (5 from major and 5 from minor salivary glands). RESULTS: All cases of glands, adenomas and carcinomas in pleomorphic adenomas have membranous and cytoplasmic immunostaining. Nuclear beta-catenin immunostaining was not observed. The antibody presented a fine granular arrangement in the cytoplasm and cellular membrane of duct and acinic cells. Higher beta-catenin index rates were seen mainly in salivary gland ducts and in ductal structures in the adenomas and carcinomas in pleomorphic adenomas. There was protein loss in pleomorphic adenomas and cytoplasmic accumulation in carcinoma in pleomorphic adenomas. CONCLUSIONS: The present study showed participation of the loss of beta-catenin adhesion molecule in the development of pleomorphic adenoma, and that the cytoplasmic accumulation of the molecule takes part in the malignant transformation of the pleomorphic adenoma into carcinoma in pleomorphic adenoma.

Relações materno-filiais e sua influência no peso pré-desmama de animais Nelore da Bahia

The aim of this study was to investigate the maternal-offspring relationships in the bovine breeds Nellore PO (Pure Breed) and Nellore CL (Cara Limpa) in Bahia State. The genetic composition of breeds did not affect LP (latency time to stand); this variable showed mean values of 71 min and 52 min, respectively, for Nellore PO and Nellore CL. The variable LPTM (latency time to begin suckling after standing) was significantly higher for Nellore PO (mean values of 39 min) tham for Nellore CL (18 min). The variable TCC (time in contact with the calf) was classified as class 4 (60 to 80% of the time was spent with the calves). The P120 (weight at 120 days) had mean values of 122.3 kg and 122.7 kg respectively, for Nellore PO and Nellore CL. In conclusion, the maternal-offspring behaviour had little influence of the genetic composition of the breeds. These results suggest that more studies are necessary to define technological parameters for cattle raising in Bahia State.

Role of adhesion molecules and proliferation hyperplasic, pre neoplastic and neoplastic lesions in canine prostate

E-cadherin and beta-catenin are component of adherens junctions in epithelial cells. Loss of these proteins have been associated with progression of prostatic diseases. We performed immunohistochemistry for E-cadherin, beta-catenin and Ki-67 on canine prostatic lesions. We analyzed the expression of these antibodies in benign prostatic hyperplasia (BPH, n = 22), in pre neoplastic lesions Prostatic Intra-epithelial Neoplasia (PIN), n = 3 and Prostatic Inflammatory Atrophy (PIA), n = 7 and prostate carcinoma (PC, n = 10). In this study, a membranous expression of E-cadherin and beta-catenin and nuclear expression of Ki-67 antigen were demonstrated. The proliferative index was statistically different between carcinomas and BPH and carcinomas and pre-neoplastic lesions. Like in men, the reduction of E-cadherin and increase of Ki-67 expression in neoplastic lesions in dog prostate may be related to the carcinogenic process in this gland. © 2013 Asian Network for Scientific Information.

Efeitos da polpa do fruto de annona crassiflora mart., nos parâmetros bioquímicos e na carcinogênese de colon de ratos

A. crassiflora Mart. a Brazilian savannah fruit, is a source of phytochemical compounds that possess a wide array of biological activities, including free radical scavenging. This native fruit proved to potentialize the mutagenic process in previous in vivo investigations. The aim of the present study was to investigate the effects of A. crassiflora Mart. pulp intake on colonic cell proliferation and on the development of Aberrant Crypt Foci (ACF) in male Wistar rats. The animals were fed with either a commercial diet or a diet supplemented with A. crassiflora Mart. pulp mixed in 1%, 10% or 20% (w/w) for 4 weeks or 20 weeks. The carcinogen 1,2-dimethylhydrazine dihydrochloride (4 doses, 40 mg kg-1 each) was used to induce colonic ACF. After euthanasia, the blood, liver and colon samples were collected for biochemical determinations, oxidative stress or ACF development analysis, respectively. Immunohistochemical analyses of the colonic mucosa were performed using antibodies against proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in normal-appearing colonic crypt and β-catenin in ACF. There was no ACF development in the colon from groups treated with A. crassiflora Mart. pulp. Also, the biochemical and oxidative stress analysis, PCNA labeling and ACF development (number, multiplicity or cellular localization of β-catenin) were unchanged as a result of marolo pulp intake. Thus, the present results suggest that A. crassiflora Mart. pulp intake did not exert any protective effect in the colon carcinogenesis induced by DMH in rats.