Detection of Leishmania (L.) chagasi in canine skin

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Apoptose em linfócitosT esplênicos e do sangue periférico em cães naturalmente infectados por Leishmania (L.) chagasi

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Níveis de IgG anti-Leishmania e perfil de citocinas em cães machos e fêmeas assintomáticos naturalmente infectados por Leishmania (L.) Chagasi

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Detecção de co-infecções por Leishmania (l.) chagasi, Trypanosoma evansi, Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães

Co-infections by Leishmania (L.) chagasi, Trypanosoma evansi, Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs were investigated. Amastigotes forms of Leishmania spp. were detected by cytopathological analysis of lymph nodes in 46,42% (39/84) of dogs. In a male dog, adult, without defined breed, from rural area and positive for Leishmania, were observed flagellated forms of T. evansi in blood smear. By immunofluorescence antibody test, 5,95% (5/84) of dogs were considered reactive to T. gondii, with titer equal to or higher than 1:64, while 3,57% (3/84) were reactive to N. caninum, with titer ≥1:50. Among the animals with visceral leishmaniasis, one showed positive serological response to T. gondii and two for N. caninum. All dogs reactive to N. caninum were from rural area and the predominance of infection by T. gondii was in dogs from urban area. A young male dog from the rural area and seropositive for T. gondii showed Ehrlichia spp. morulae in the cytology and positive reaction for canine distemper virus. Thus, further studies are needed to assess the epidemiology of these infections in canine population, especially with respect to the reservoirs of Trypanosoma spp. in rural areas.

Atividade anti-leishmania e imunomodulatória in vitro da melitina natural na infecção experimental por Leishmania (L.) infantum chagasi

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

Atividade in vitro da fosfolipases A2 e da fração peptídica extraídas do veneno de Crotalus durissus terrificus sobre formas amastogotas e promastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi

Pós-graduação em Doenças Tropicais - FMB

A novel A2 allele found in Leishmania (Leishmania) infantum chagasi

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Exames parasitológicos, imunoistoquímicos e histopatológicos para detecção de Leishmania chagasi em tecidos esplênicos de cães com leishmaniose visceral

O propósito do presente trabalho foi o estudo da Leishmaniose Visceral Canina - LVC por meio de métodos parasitológicos e imunoistoquímicos para a detecção de formas amastigotas de Leishmania (L.) chagasi em baço, além de descrever a histopatologia das lesões esplênicas em 34 cães, com diferentes manifestações clínicas da LVC, eutanasiados pelo Centro de Controle de Zoonoses de Ilha Solteira, SP. Esses animais foram examinados clinicamente antes da eutánásia e de acordo com os sinais clínicos da LVC, foram classificados em três grupos: assintomáticos (8 cães), oligossintomáticos (17 cães) e sintomáticos (9 cães). Após a realização desses exames, dos 34 cães, 22 (64,7%) estavam positivos e 12 (35,3%) negativos. Desses cães positivos, 1/22 (4,5%) era assintomático, 12/22 (54,5%) eram oligossintomáticos e 9/22 (40,1%) sintomáticos. Pela histopatologia, os cães, especialmente os sintomáticos apresentavam o baço com inflamação crônica e espessamento na região capsular e trabecular, além de extensa alteração morfológica na polpa vermelha e branca pela presença de grande quantidade de macrófagos repletos de amastigotas, pela reação granulomatosa inflamatória e pelas áreas hemorrágicas. Os exames histopatológicos e a detecção microscópica direta da L. (L.) chagasi revelaram que o baço é um órgão útil para auxiliar no diagnóstico da LVC. A coloração imunoistoquímica foi a que detectou o maior número de tecidos esplênicos positivos com amastigotas, além de elucidar os casos suspeitos pelos exames parasitológicos, principalmente, nos animais assintomáticos ou oligossintomáticos.

DNA damage and nitric oxide production in mice following infection with L. chagasi

Leishmania chagasi, which causes visceral leishmaniasis in South America, is an obligate intracellular protozoan. Production of nitric oxide by macrophages during the inflammatory response is one of the main microbicidal mechanisms against this parasite. The goal of this study was to evaluate whether L. chagasi infection causes DNA damage in peripheral blood and spleen cells of Balb/c mice and whether such damage may be related to NO production. Balb/c mice were either infected with L chagasi or maintained as controls. The single-cell gel electrophoresis (comet) assay was used to measure DNA damage in peripheral blood and spleen cells, and the Griess reaction was used to measure NO production in the spleen. L chagasi infection induced DNA damage in peripheral blood and spleen cells of infected mice. Macrophages from the control group, challenged with L. chagasi, showed significantly (p < 0.05) greater NO production, compared to non-challenged cells. Treatment of spleen cells with N(G)-monomethyl-L-arginine (LNMMA) caused a significant reduction of NO production and DNA damage (p < 0.05). Our results indicate that L. chagasi induces DNA damage in the peripheral blood and spleen cells and that NO not only causes killing of the parasite but also induces DNA damage in adjacent cells. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Occurrence of Leishmania (Leishmania) chagasi in a domestic cat (Felis catus) in Andradina, São Paulo, Brazil: case report

Neste trabalho, é relatada a infecção natural por Leishmania em um gato doméstico no qual, formas amastigotas do parasito foram observadas em imprint de linfonodo poplíteo. Reações sorológicas positivas e negativas foram observadas pelo teste de imunoadsorção enzimática (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), respectivamente. A reação em cadeia da polimerase (PCR) revelou que a sequência de nucleotídeos foi idêntica à Leishmania (L.) chagasi. Este é o primeiro relato da doença em felino da cidade de Andradina, Estado de São Paulo, Brasil, área considerada endêmica para leishmaniose visceral canina e humana.

Clinical and parasitological evaluation of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi submitted to treatment with meglumine antimoniate

Aiming to evaluate the efficacy of the treatment of canine visceral leishmaniasis, to verify the occurrence of a possible disease relapse, and to search for the presence of the parasites after the end of the treatment, seven dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi were used. The dogs were subjected to a treatment with 75 mg/kg meglumine antimoniate subcutaneously every 12 h for 21 days, and followed-up for a period of 6 months. During the whole experimental period the animals wore deltamethrin collars and were kept in a screened kennel to avoid reinfection. Lymph node and bone marrow aspiration biopsy was carried out to search for the parasite at seven moments: before the treatment, 30, 60, 90, 120 150 and 180 days after the start of the treatment. After the end of the experiment all dogs were humanely euthanized. Then, spleen and liver imprints and ill vitro cultures were carried out to search for amastigote forms of the parasite. During the treatment all animals presented remission of symptoms. However, two dogs were observed to present new symptoms in the course of the experiment. At the end of the experiment, the presence of amastigote forms of the parasite was evidenced in five of the seven dogs. This enabled us to conclude that the treatment promoted clinical cure but did not eliminate the parasites completely. (c) 2006 Elsevier B.V. All rights reserved.

Evaluation of TNF-alpha, IL-4, and IL-10 and parasite density in spleen and liver of L. (L.) chagasi naturally infected dogs

Dogs are the main domestic reservoirs of L. (L.) chagasi. Once in the vertebrate host, the parasite can cause visceral leishmaniasis, which can also be transmitted to humans. Cytokines are key elements of the host immune response against Leishmania spp. To investigate whether tumor necrosis factor (TNF)-alpha, interleukin (IL)-4 and IL-10 are associated with pattern infection in dogs, these cytokines were quantified in the spleen and liver of dogs naturally infected with L. (L.) chagasi, with or without clinical manifestations, and their levels were correlated with the parasite load verified in these organs. A total of 40 adult dogs naturally infected with L. (L.) chagasi were assessed, together with 12 uninfected control dogs. Samples from spleen and liver were used to determine the cytokine levels by capture ELISA and for quantifying parasite load by real-time PCR. Statistical analysis was performed using the minimum Chi square method and group means were compared using the Tukey test. TNF-alpha, IL-4 and IL-10 levels in infected dogs were higher than in control groups; the liver was the main cytokine-producing organ during infection. The level of splenic TNF-alpha showed correlation with parasite load and may represent an important marker for infection process evolution, with the participation of IL-10. These results may contribute to a clearer understanding of the immune response in dogs infected with L. (L.) chagasi, which may lead to the development of prophylactic or preventive measures for these animals.

Apoptosis in T lymphocytes from spleen tissue and peripheral blood of L. (L.) chagasi naturally infected dogs

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Polymerase chain reaction and real-time PCR for diagnosing of Leishmania infantum chagasi in dogs

A importância do cão como reservatório de L. infantum chagasi no meio urbano tem estimulado a realização de inúmeros trabalhos de avaliação de técnicas de diagnóstico, uma vez que este procedimento, quando realizado corretamente, torna-se um importante passo na prevenção da doença em humanos. Dentre os métodos de diagnóstico, as técnicas moleculares têm adquirido destaque. Objetivou-se neste trabalho verificar o desempenho da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e da PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) utilizando diferentes amostras biológicas. Para tanto foram utilizados 35 cães provenientes de uma área endêmica para LVC, onde foram utilizados para o diagnóstico molecular, aspirado de medula óssea, fragmentos de linfonodo e baço. Neste estudo a qPCR foi capaz de detectar um maior número de animais positivos quando comparada com a PCR. Já entre as diferentes amostras biológicas utilizadas não foi observada diferença significativa na detecção de DNA de L. infantumchagasi por meio da PCR e qPCR. Mesmo assim, considerando a facilidade de obtenção, o linfonodo pode ser considerada como a melhor amostra para diagnóstico molecular da infecção por L. infantum chagasi.