Crystallization and preliminary X-ray analysis of bucain, a novel toxin from the Malayan krait Bungarus candidus

Bucain is a three-finger toxin, structurally homologous to snake-venom muscarinic toxins, from the venom of the Malayan krait Bungarus candidus. These proteins have molecular masses of approximately 6000-8000 da and encompass the potent curaremimetic neurotoxins which confer lethality to Elapidae and Hydrophidae venoms. Bucain was crystallized in two crystal forms by the hanging-drop vapour-diffusion technique in 0.1 M sodium citrate pH 5.6, 15% PEG 4000 and 0.15 M ammonium acetate. Form I crystals belong to the monoclinic system space group C2, with unit-cell parameters a = 93.73, b = 49.02, c = 74.09 Angstrom, beta = 111.32degrees, and diffract to a nominal resolution of 1.61 Angstrom. Form II crystals also belong to the space group C2, with unit-cell parameters a = 165.04, b = 49.44, c = 127.60 Angstrom, beta = 125.55degrees, and diffract to a nominal resolution of 2.78 Angstrom. The self-rotation function indicates the presence of four and eight molecules in the crystallographic asymmetric unit of the form I and form II crystals, respectively. Attempts to solve these structures by molecular-replacement methods have not been successful and a heavy-atom derivative search has been initiated.

Crystal Structure of Bucain, a Three-Fingered Toxin from the Venom of the Malayan Krait (Bungarus candidus)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

cDNA sequence and molecular modeling of a nerve growth factor from Bothrops jararacussu venomous gland

The complete nucleotide sequence of a nerve growth factor precursor from Bothrops jararacussu snake (Bj-NGF) was determined by DNA sequencing of a clone from cDNA library prepared from the poly(A) + RNA of the venom gland of B.jararacussu. cDNA encoding Bj-NGF precursor contained 723 bp in length, which encoded a prepro-NGF molecule with 241 amino acid residues. The mature Bj-NGF molecule was composed of I 18 amino acid residues with theoretical pI and molecular weight of 8.31 and 13,537, respectively. Its amino acid sequence showed 97%, 96%, 93%, 86%, 78%, 74%, 76%, 76% and 55% sequential similarities with NGFs from Crotalus durissus terrificus, Agkistrodon halys pallas, Daboia (Vipera) russelli russelli, Bungarus multicinctus, Naja sp., mouse, human, bovine and cat, respectively. Phylogenetic analyses based on the amino acid sequences of 15 NGFs separate the Elapidae family (Naja and Bungarus) from those Crotalidae snakes (Bothrops, Crotalus and Agkistrodon). The three-dimensional structure of mature Bj-NGF was modeled based on the crystal structure of the human NGF. The model reveals that the core of NGF, formed by a pair of P-sheets, is highly conserved and the major mutations are both at the three beta-hairpin loops and at the reverse turn. (C) 2002 Societe francaise de biochimie et biologic moleculaire/Editions scientifiques et medicales Elsevier SAS. All rights reserved.

Análise da susceptibilidade de leveduras isoladas de insetos sociais aos antifúngicos

A frequência de micoses invasivas causadas por fungos oportunistas, incluindo leveduriformes, vem aumentando significativamente nas últimas décadas e atinge principalmente indivíduos imunocomprometidos. A tribo Attini possui cerca de 230 espécies de formigas e todas possuem o hábito de cultivar e se alimentar de fungos. Algumas espécies cultivam o fungo mutualista em nódulos poligonais sólidos com 0,25 a 0,50mm de diâmetro, aproximadamente. No interior desses nódulos, encontram-se células na forma de leveduras, que quando semeadas em meio de cultura se desenvolvem como fungo filamentoso. Este tipo de fungicultura está restrito a algumas espécies do gênero Cyphomyrmex. Neste trabalho, isolamos 30 leveduras dos nódulos de oito ninhos de Cyphomyrmex transversus da região de Ilhéus (BA), e analisamos a susceptibilidade aos seguintes antifúngicos: Anfotericina B (AMB), Fluconazol (FCZ), Voriconazol (VCZ) e Itraconazol (ITZ). A caracterização das estirpes foi feita através de métodos morfológicos e moleculares, incluindo-se o sequenciamento dos domínios D1/D2 do rDNA. A avaliação da atividade antifúngica foi realizada através do método de microdiluição, de acordo com a norma M27-A2 (CLSI, 2002). Candida parapsilosis ATCC 22019 e Candida krusei ATCC 6258 foram utilizadas como controle. Os resultados foram interpretados segundo os pontos de corte (breakpoints) aplicados ao gênero Candida. As estirpes foram identificadas como Trichosporon asahii (18), T. coremiiforme (4), Candida carpophila (syn. C. guilliermondii) (4), Galactomyces candidum (syn. Geotrichum candidum) (3) e Cryptococcus laurentii (1). Todas as espécies são conhecidas por possuírem representantes que já foram relatados como patógenos oportunistas. Elas foram sensíveis aos azóis FCZ, VCZ e ITZ, com exceção de G. candidus, cujas estirpes apresentaram sensibilidade dose-dependente a FCZ e ITZ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)