Caracterização de rizóbios (Bradyrhizobium japonicum) e produtividade da soja

Fez-se um estudo de campo sobre a competição e a dinâmica de ocupação de sítios de nodulação de estirpes de Bradyrhizobium japonicum naturalizadas ou inoculadas em sementes. O ensaio foi instalado em Latossolo Vermelho Escuro utilizando blocos ao acaso, com 8 repetições dos seguintes tratamentos: A) controle sem inoculante; B) controle sem inoculante, com adubação nitrogenada; C) inoculante com cerca de 107 rizóbios/g (8g/kg de semente); D) inoculação com cerca de 1010 rizóbios/g (8g/kg de semente). Os inoculantes foram preparados com as estirpes recomendadas na ocasião, SMS - 314 (= SEMIA 587) e SMS - 463 (= SEMIA 5019 = 29W). A identificação das estirpes formadoras dos nódulos foi realizada em amostras coletadas aos 10, 42 e 70 dias após a germinação. Realizou-se também a colheita dos grãos para avaliação da produção e de N-total. A tipificação sorológica foi feita com antissoro preparado a partir de antígenos constituídos pelas seguintes estirpes de Bradyrhizobium japonicum: SEMIA 587, SEMIA 5019 e SEMIA 5052 (= USDA 6), utilizando-se da técnica immunodot. A caracterização das estirpes dos nódulos revelou um pequeno aumento (6,2 a 8,7%), na ocorrência de nódulos formados pelas estirpes recomendadas, nas três épocas de amostragem. Houve expressiva participação da estirpe 5052 (= sorogrupo USDA 6) na formação dos nódulos. Verificou-se que as estirpes naturalizadas podem contribuir de forma diferente na formação dos nódulos durante o ciclo, dependendo da amostragem.

Análise comparativa das seqüências de genes da ilha simbiótica entre Bradyrhizobium elkanii e Bradyrhizobium japonicum

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Doses de Bradyrhizobium japonicum e Azospirillum brasilense no desenvolvimento das plantas, na produção e na qualidade fisiológica de sementes de soja

Pós-graduação em Agronomia - FEIS

Use of lipopolysaccharides to characterize Bradyrhizobium spp.

Three methods of extraction of lipopolysaccharide (LPS) were compared-the conventional hot phenol-water method with 40% phenol, a modified form of this method using 10% phenol, and the hot saline method. Good recovery of LPS was achieved by each of the three methods, with the LPS found in the aqueous phase with the two phenol-based procedures. The application of SDS-PAGE to the LPS extracts, followed by silver staining, showed similar banding with all three methods of extraction. When the hot saline extraction LPS fraction from eight strains of Bradyrhizobium spp. and eight strains of Bradyrhizobium japonicum was compared with SDS-PAGE, characteristic profiles were achieved. Serological analysis of eight strains of Bradyrhizobium spp., using antisera prepared against whole cells in agglutination reactions, showed extensive sharing of antigens. When antisera was prepared using outer membrane LPS, extracted by the hot saline method, the amount of cross-reaction was reduced greatly. The results indicated that LPS provide an efficient means of obtaining monospecific antisera to be used for serological identification of strains of Bradyrhizobium spp. and that the hot saline extraction method is recommended for a fast, simple and efficient way to obtain LPS and characterize this bacterium.

Short communication: Resazurin reducing time as an indicator of Bradyrhizobium viable cell count

A method based on the use of resazurin (RSZ) is described to determine the number of viable Bradyrhizobium japonicum cells in culture medium. The observation of RSZ reduction can be done spectrophotometrically or visually. B. japonicum strains behaved differently when the reducing time was considered. This methodology can be used to determine the number of viable cells during the liquid culture stage of inoculant production.

Perfil transcricional de Bradyrhizobium elkanii SEMIA 587 in vitro e em simbiose com soja (Glycine max L. Merrill) através de microarranjo de DNA

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação de populações de possíveis rizobactérias em solos sob espécies florestais

Embora estudos recentes relatem a utilização de RCPC (Rizobactérias Promotoras de Crescimento de Plantas) no Brasil, raríssimos trabalhos avaliam a presença natural dessas espécies bacterianas no solo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de RPCP em duas amostras de solo sob diferentes tipos de manejo, através da construção e do seqüenciamento de bibliotecas de DNA metagenômico. Utilizaram-se oligonucleotídeos específicos para amplificação da região hipervariável do espaço intergênico dos genes ribossomais 16S-23S de DNA extraído de diferentes solos, sob Eucalyptus sp. e sob mata. Os fragmentos obtidos foram inseridos em vetor e clonados. As bibliotecas geraram 495 clones, que foram seqüenciados e identificados através de comparações realizadas pelo software Blast. O solo sob Eucalyptus sp. apresentou maior número de RPCP do que sob mata. Os filos Actinobacteria e Proteobacteria eram maiores no solo sob Eucalyptus sp., estando o filo Firmicutes ausente no solo sob mata. Somente oito espécies diferentes de RPCP foram detectadas: Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Bradyrhizobium japonicum, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium sp., Frankia sp., Pseudomonas fluorescens e Pseudomonas gladioli. O trabalho forneceu valiosos dados sobre a presença de RPCP em solos com espécies florestais e sua possível utilização em reflorestamentos, assim como para o melhor conhecimento desses microrganismos nos solos do Brasil.

TRATAMENTO DE SEMENTES DE ARROZ, TRIGO, FEIJÃO E SOJA COM UM PRODUTO FORMULADO À BASE DE CÉLULAS E DE METABÓLITOS DE Bacillus subtilis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Doses de inoculante e nitrogênio na semeadura da soja em área de primeiro cultivo

The inoculation of soybean crop with Bradyrhizobium bacteria is a widespread practice, due to excellent results achieved in productivity, however, some doubt still arise in relation the need of application of mineral nitrogen at sowing. In that mean, this work aimed to evaluate the response of the doses at inoculant and mineral nitrogen in the sowing of crop soybean in area of first cultivation. The experiments were carried in the experimental field of the University of the Estate of Mato Grosso, Campus of Alta Floresta - MT, Brazil, in the growing seasons of 2006/2007 and 2007/2008. The experimental design was randomized blocks, in a factorial escheme 2 x 4, with four replications. The factors consisted in the inoculation of seeds with Bradyrhizobium japonicum *(3 e 6 mL kg(-1) of seeds), and nitrogen fertilizer at sowing *(0, 10, 20 e 40 kg ha(-1)). The following variables were evaluated: plant height, insertion height of first pod, number of pod per plant, number of grain per pod, mass of 100 grain and grain productivity. In the two growing seasons there was no significant difference for doses of inoculants applied in first year of cultivation with soybean. To nitrogen application at sowing of soybean crop there was quadratic effect to plant height and of insertion height of first pod and growing linear to number of pod per plant in the second year of cultivation, however, without significant increase the productivity.

Electrophoretic patterns of lipopolysaccharides and antigenic analysis of soybean bradyrhizobia

Several serological methods have been used for the characterization and identification of soybean bradyrhizobia. However, some problem were non-reactivity of certain strains and cross-reactivity among others. Since lipopolysaccharide (LPS) can often be used in strain identification, the objective was to investigate the antigenic properties and polyacrylamide gel electrophoretic pattern of 12 Brazilian strains of Bradyrhizobium japonicum that nodulate soybean and to compare them to standard strains. The close correlation between the LPS patterns obtained by SDS-PAGE and the serological analysis permitted us to assign the strains to nine groups different or the same as the standard strains.

Caracterização molecular de isolados bacterianos de nódulos e rizosfera de soja em diferentes manejos de cultivo

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Enumeração celular pela quantificação absoluta por PCR em tempo real de culturas de bradirrizóbios

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Metabolismo respiratório de bradirrizóbios em processos “in vitro” e simbióticos analisado por PCR quantitativo em tempo real

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Comparação filogenética de genomas de rizóbios por hibridização através de microarray

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Multidimensional cluster stability analysis from a Brazilian Bradyrhizobium sp RFLP/PCR data set

The taxonomy of the N(2)-fixing bacteria belonging to the genus Bradyrhizobium is still poorly refined, mainly due to conflicting results obtained by the analysis of the phenotypic and genotypic properties. This paper presents an application of a method aiming at the identification of possible new clusters within a Brazilian collection of 119 Bradryrhizobium strains showing phenotypic characteristics of B. japonicum and B. elkanii. The stability was studied as a function of the number of restriction enzymes used in the RFLP-PCR analysis of three ribosomal regions with three restriction enzymes per region. The method proposed here uses Clustering algorithms with distances calculated by average-linkage clustering. Introducing perturbations using sub-sampling techniques makes the stability analysis. The method showed efficacy in the grouping of the species B. japonicum and B. elkanii. Furthermore, two new clusters were clearly defined, indicating possible new species, and sub-clusters within each detected cluster. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.