Microscopic evaluation of proliferative disorders in the gerbil female prostate: Evidence of aging and the influence of multiple pregnancies

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Aging effects on the mongolian gerbil female prostate (Skene's paraurethral glands): Structural, ultrastructural, quantitative, and hormonal evaluations

Different from the classic view, the prostate is not a gland exclusive to the male, also being an organ of the female genital system presenting morphofunctional similarity between human and rodent. Thus structural, ultrastructural, morphometric-stereological features of the female prostate (Skene's paraurethral gland) and steroid serological levels were evaluated during young, adult, and senile ages in the Mongolian gerbil. The morphofunctional precocity of the female gland in comparison with the male gland occurring in young gland is probably associated with the female circulating steroid levels. The hormonal imbalance in senesce coincides with its susceptibility to histopathological lesions, such as epithelial hypertrophy, metaplasia, and intraepithelial neoplasia. Differently than that of males, the aging degeneration of the female gland involves the accumulation of lipofuscin granules. However, the alterations in senile prostate did not damage its functionality. These analyses reinforce the use of this experimental model for the comprehension of glandular morphofunctional aspects with special attention to senescence. Thus, the appreciation of this organ becomes relevant to avoid future discomfort to women's health.

Microscopic comparative study of the exposure effects of testosterone cypionate and ethinylestradiol during prenatal life on the prostatic tissue of adult gerbils

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Plasmodium vivax circumsporozoite genotypes: a limited variation or new subspecies with major biological consequences?

Background: Plasmodium vivax circumsporozoite variants have been identified in several geographical areas. The real implication of the genetic variation in this region of the P. vivax genome has been questioned for a long time. Although previous studies have observed significant association between VK210 and the Duffy blood group, we present here that evidences of this variation are limited to the CSP central portion.Methods: The phylogenetic analyses were accomplished starting from the amplification of conserved domains of 18 SSU RNAr and Cyt B. The antibodies responses against the CSP peptides, MSP-1, AMA-1 and DBP were detected by ELISA, in plasma samples of individuals infected with two P. vivax CS genotypes: VK210 and P. vivax-like.Results: These analyses of the two markers demonstrate high similarity among the P. vivax CS genotypes and surprisingly showed diversity equal to zero between VK210 and P. vivax-like, positioning these CS genotypes in the same clade. A high frequency IgG antibody against the N- and C-terminal regions of the P. vivax CSP was found as compared to the immune response to the R- and V-repetitive regions (p = 0.0005, Fisher's Exact test). This difference was more pronounced when the P. vivax-like variant was present in the infection (p = 0.003, Fisher's Exact test). A high frequency of antibody response against MSP-1 and AMA-1 peptides was observed for all P. vivax CS genotypes in comparison to the same frequency for DBP.Conclusions: This results target that the differences among the P. vivax CS variants are restrict to the central repeated region of the protein, mostly nucleotide variation with important serological consequences.

Limited movement of Cucumber mosaic virus (CMV) in yellow passion flower in Brazil

Symptoms of Cucumber mosaic virus (CMV) on yellow passion flower (Passiflora edulis f. flavicarpa) are characterized by bright yellow mottling on leaves, starting at random points on the vine and diminishing in intensity towards the tip, which becomes symptomless as it grows. To determine whether symptomless portions of vines are CMV-free or represent latent infection, leaves with and without symptoms were collected from infected vines in the field. Biological, serological (plate-trapped antigen enzyme-linked immunosorbent assay, PTA-ELISA), Western blot and dot-blot hybridization assays showed that portions of the vines without symptoms were CMV-free. Vegetatively propagated vines with symptoms showed remission of symptoms on newly developed leaves. One year later, no CMV was detected in the upper leaves of these plants. Mechanically inoculated passion flower seedlings behaved similarly; symptoms were shown by few leaves after inoculation. Afterwards, plants became symptomless and CMV was not detected in the upper leaves or root system, 40 or 85 days after inoculation. The mechanism responsible for remission of symptoms accompanied by CMV disappearance is not known.

Detecção do Southern bean mosaic virus no Paraná, e separação do Bean rugose mosaic virus em feijoeiro

Em lavouras de feijoeiro (Phaseolus vulgaris) da cultivar Carioca Comum, no município de Londrina, Estado do Paraná, foram encontradas plantas com sintomas de necrose da haste, mosaico clorótico leve e porte reduzido, semelhantes aos sintomas causados por infecção viral. Exames de microscopia eletrônica revelaram a presença de partículas isométricas. em testes de imunodifusão dupla em gel de ágar os extratos foliares de plantas infetadas reagiram positivamente com anti-soro específico para o Southern bean mosaic virus (SBMV). O vírus foi purificado e a massa molecular de sua proteína capsidial foi estimada em 30 kDa, valor esperado para proteínas do capsídeo de vírus do gênero Sobemovirus. A gama de hospedeiras do SBMV isolado no Paraná foi restrita ao feijoeiro e a algumas cultivares de soja (Glycine max). A separação de dois vírus isométricos comuns em infecções mistas no feijoeiro foi possível através da reação de imunidade ao SBMV apresentada por Crotalaria sp, Chenopodium quinoa e Mucuna deeringiana, e da reação de susceptibilidade dessas mesmas hospedeiras ao Bean rugose mosaic virus (BRMV).

Microscopia de força atômica aplicada em imunoensaios

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Penetration time of Salmonella Heidelberg through shells of white and brown commercial eggs

This study aimed at determining the minimum time required for the penetration of Salmonella Heidelberg inside the eggs after contact with contaminated material. Recently-collected brown and white eggs from laying hens between 45-50 weeks of age, reared in a commercial poultry house, were artificially contaminated by contact with wood shavings moistened with liquid inoculum of Salmonella Heidelberg in stationary-growth phase (10³-10(4) CFU g-1). According to type (white or brown), eggs were distributed into three different groups, with four replicates each: negative control group (no artificial contamination), positive control group (analyzed externally immediately after contamination and internally after the maximum storage period of the test group) and test group. Eggs were stored at controlled environmental temperature varying from 25ºC to 30ºC. In the test group, eggs contents (yolk and albumen) were pooled and analyzed after 1:00, 1:30, 2:00, 2:30, 3:00, 3:30, and 4:00 hours after contamination for the presence of Salmonella Heidelberg in 25g of this pool. The experimental unit consisted of five eggs in each test. The analysis protocol included pre-enrichment, selective enrichment, plating on selective agar, and biochemical and serological tests. The results obtained were submitted to logistic regression, which indicated that the presence of Salmonella Heidelberg was verified after 2:16 h and 2:44 h of contact with white and brown eggs, respectively.

Detection of Toxoplasma gondii in the reproductive system of male goats

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of IgM antibodies to Babesia bigemina in cattle

A crude antigenic preparation of Babesia bigemina was used to develop an ELISA for the detection of IgM antibodies. Optimal dilutions of the antigen, using positive and negative reference sera, were determined by checkerboard titrations. Negative sera from cattle imported from tick-free areas, serum samples collected from infected B. bigemina cattle were used to validate the test. The specificity was 94% and sensitivity of the Elisa 87.5%. Sera from 385 cattle deriving from areas free from tick-borne diseases, which were submitted to a preimmunization process, were screened by this technique. The Elisa detected seroconversion on the 14th day post-inoculation in animals either infested with Boophilus microplus ticks (infected with B. bigemina), or inoculated with B. bigemina infected blood. Antibody titers decreased after day 33; however, all animals remained positive until the end of the experiment (124 days). The ELISA described may prove to be an appropriate serological test for the detection of IgM antibodies against B. bigemina.

Efeitos na fotossíntese e área foliar de cultivares de alface inoculadas mecanicamente com patótipos do Lettuce mosaic virus e Lettuce mottle virus

Levantamentos realizados no estado de São Paulo indicaram a ocorrência isolada e em infecções mistas do Lettuce mosaic virus (LMV) e do Lettuce mottle virus (LeMoV) em plantas de alface (Lactuca sativa). O presente trabalho teve como objetivo estudar os efeitos da infecção isolada e mista entre o LMV (patótipos II e IV) e o LeMoV, em cultivares de alface suscetível (White Boston) e tolerante (Elisa - gene mol¹) ao LMV patótipo II. As plantas foram inoculadas via extrato vegetal tamponado com isolados de LMV-II, LMV-IV e LeMoV separadamente e em diferentes combinações, com intervalo de 24 h ou simultaneamente com os dois vírus. As plantas infetadas foram analisadas utilizando-se hospedeiras diferenciais para o LMV e o LeMoV, e no caso do LMV pelo teste sorológico de PTA-ELISA. Nas avaliações de peso fresco e seco, área foliar e teor de clorofila, observou-se que a cultivar White Boston foi a mais afetada por ambos os vírus. As infecções mistas e isoladas na cultivar Elisa causaram efeitos semelhantes, provavelmente devido a presença do gene mo1¹ de tolerância ao LMV-II. O isolado LMV-IV foi considerado o mais agressivo nestas cultivares quando comparado ao LMV-II e o LeMoV.

Evaluation of an ELISA for detection of antibodies to Babesia bigemina in cattle and it's application in an epidemiological survey in Brazil

Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) baseado em antígeno bruto foi avaliado na detecção de anticorpos contra Babesia bigemina. A sensibilidade e a especificidade do teste foram de 98,0% e 99,0%, respectivamente. Concordando com a alta especificidade do teste, não foram verificadas reações cruzadas com soros de bezerros inoculados três vezes com 10(7) merozoítos de Babesia bovis. Com relação à comparação do ELISA com a imunofluorescência indireta (IFAT) na detecção de anticorpos contra B. bigemina em bezerros experimentalmente infectados com cinco isolados brasileiros geograficamente distintos deste hemoparasito, o IFAT foi capaz de detectar anticorpos um dia antes do ELISA na maioria dos soros dos animais. Houve uma boa concordância entre os resultados encontrados no ELISA e no IFAT com soros de bovinos de região de estabilidade enzoótica (k=0.61). No entanto, não houve concordância entre os testes sorológicos com soros de animais de área de instabilidade enzoótica (k=0.33). O ELISA foi empregado em um inquérito epidemiológico com 1.367 soros de quatro municípios do Pantanal de Mato Grosso do Sul e caracterizou esta região como uma área de estabilidade enzoótica, uma vez que as prevalências variaram de 87,7 a 98,9%. Dessa forma, este ELISA, que apresentou alta sensibilidade, especificidade e desempenho similar ao IFAT, pode ser utilizado no diagnóstico sorológico de B. bigemina.

Toxoplasma gondii in experimentally infected Bos taurus and Bos indicus semen and tissues

Dezoito bovinos foram inoculados com Toxoplasma gondii e distribuídos aleatoriamente em três grupos de seis bovinos cada: GI (2,5x10(5) oocistos da cepa P), GII (5,0x10(6) taquizoítos da cepa RH) e GIII (controle). Exames clínicos, sorológicos e parasitêmicos foram realizados. Pesquisas do parasito, por meio da bioprova e pela técnica de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), foram realizadas no sêmen e em fragmentos de musculatura esquelética, linfonodos, cérebro, retina, baço, fígado, pulmão, testículo, epidídimo e vesícula seminal. Amostras de sangue e sêmen foram colhidas nos dias -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 e, semanalmente, até o 84º dia pós-infecção (DPI). Os bovinos inoculados (GI e GII) apresentaram hipertermia do 3º ao 16º DPI. Anticorpos contra T. gondii foram detectados (IFI) no 5º DPI (1:16), em ambos grupos inoculados (oocistos e taquizoítos), atingindo picos de 1:4096 no 7º DPI. Surtos parasitêmicos ocorreram em todos os bovinos infectados, principalmente do 7º ao 28º DPI, independente da cepa e inóculo utilizados. O bioensaio revelou a presença do parasito em amostras seminais dos bovinos infectados com oocistos (GI) e taquizoítos (GII), em diversas datas experimentais, entre o 7º e 84º DPI. Parasitismo tissular por T. gondii foi diagnosticado por meio da bioprova e pela técnica da PCR, em vários fragmentos de tecidos e/ou órgãos. Os achados sugerem a possibilidade da ocorrência da transmissão sexual do T. gondii na espécie bovina.

Anticorpos em bovinos (Bos indicus e Bos taurus) e bubalinos (Bubalus bubalis) inoculados com oocistos de Toxoplasma gondii. Estudo comparativo

Três animais de cada espécie (Bos indicus, Bos taurus e Bubalus bubalis) foram inoculados, via oral, com 2×10(5) oocistos de Toxoplasma gondii. Seis outros animais, dois de cada espécie, foram mantidos como testemunhas. A resposta de anticorpos avaliada por meio da reação de imunofluorescência indireta iniciou-se a partir do quinto dia pós-inoculação (DPI) nos zebuínos e bubalinos, e no sétimo DPI nos taurinos. Os títulos sorológicos nos taurinos permaneceram elevados até o final do experimento (70º DPI), alcançando níveis máximos (1:16.384) entre o 42º e 49º DPI. Nos zebuínos e bubalinos o maior título de anticorpos anti-Toxoplasma foi de 1:256. A resposta de anticorpos mais ou menos acentuada não está necessariamente relacionada à sensibilidade ao T. gondii.

Caracterização eletroforética e análise de subgrupo de rotavírus em rebanhos bovinos leiteiros do Estado de São Paulo

Foi realizado um estudo para determinar a ocorrência de infecção por rotavírus em rebanhos bovinos leiteiros. Foram analisadas 375 amostras de fezes de bezerros, na faixa etária 1 a 45 dias, provenientes de animais pertencentes a nove propriedades rurais, situadas em seis municípios da região nordeste do Estado de São Paulo. Destas, 193 pertenciam a animais com diarréia e 182 foram obtidas de animais clinicamente sadios. As técnicas utilizadas para a detecção de rotavírus foram o ensaio imunoenzimático (EIE) e a eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Por meio do EIE foram detectadas 11,2% (42/375) de amostras positivas, 15% delas (29/193) obtidas de animais com diarréia e 7,1% (13/182) colhidas de animais sem diarréia. A análise do perfil do genoma indicou a presença de seis eletroferótipos distintos, característicos de rotavírus do grupo A. Um único eletroferótipo foi detectado em três rebanhos, o qual permaneceu constante durante o período de amostragem. em dois rebanhos diferentes eletroferótipos foram detectados, embora com maior prevalência de um dado perfil. A caracterização das amostras positivas em subgrupos foi realizada por meio do EIE com duplo sanduíche, utilizando-se anticorpos monoclonais (MAb) específicos para antígenos de subgrupo (I e II). Foram caracterizadas como subgrupo I 52,4% (22/42) das amostras testadas, nenhuma reagiu com MAb de subgrupo II, enquanto as demais, 47,6% (20/42), não reagiram com nenhum dos dois subgrupos.