Efeito da idade sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen diluído, resfriado a 14ºC e transportado

Para estudar o efeito da idade sobre características ovulatórias e de fertilidade, 147 ciclos estrais de 99 éguas foram agrupados em classes por idade (1 - 3-6 anos; 2 - 7-10 anos; 3 - 11-14 anos; e 4 - 15-19 anos), de acordo com o ano do nascimento. As éguas foram inseminadas com sêmen diluído, resfriado e transportado de apenas um garanhão, três vezes por semana (segundas, quartas e sextas-feiras).O controle folicular, por meio da palpação retal, e a rufiação foram realizados diariamente, durante todo o período experimental. Utilizou-se, para o transporte, o sêmen diluído no diluidor de leite desnatado-glicose no conteiner Celle modificado, sendo a dose inseminante de 400 x 10(6) espermatozóides móveis, no momento da diluição final, pré-resfriamento. O tempo médio da coleta do sêmen à inseminação artificial foi de 3,5 horas e a temperatura final do sêmen, no momento da inseminação, de 14ºC. Não houve influência da idade sobre a velocidade de crescimento folicular e o tamanho do folículo ovulatório. A fertilidade decaiu após os 15 anos de idade, traduzida pela diminuição da taxa de concepção/ciclo e eficiência de prenhez, entretanto, não foram observadas características indicativas de senescência até os 19 anos de idade.

Efeito do número de inseminações artificiais sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen diluído, resfriado a 14ºC e transportado

Estudou-se o efeito do número de inseminações sobre a fertilidade de éguas inseminadas, três vezes/semana (segundas, quartas e sextas-feiras), com sêmen diluído, resfriado e transportado, de apenas um garanhão. As éguas foram inseminadas a partir da detecção, pela palpação retal, de um folículo de 3,0 a 3,5 cm de diâmetro, em um dos ovários, até a ovulação. Utilizaram-se para o transporte o sêmen diluído no diluidor leite desnatado-glicose e o conteiner Celle modificado, sendo a dose inseminante de 400 x 10(6) espermatozóides móveis, no momento da diluição final, pré-resfriamento. de acordo com o número de inseminações artificiais (IA) utilizadas/ciclo, os resultados de 148 ciclos, de 100 éguas, foram agrupados em: 1 IA, 2IA, 3 IA e 4 ou mais IA. A eficiência de prenhez foi de 4,29; 5,04; 5,67; e 3,43, para 1, 2, 3 e 4 ou mais IA, respectivamente. As características foliculares diferiram em relação à freqüência de inseminações com os maiores valores observados no grupo de éguas inseminadas quatro ou mais vezes. Concluiu-se que menor velocidade de crescimento folicular e maior diâmetro do folículo ovulatório estiveram associados a maior número de inseminações artificiais/ciclo. Na presença de uma concentração espermática adequada, o número de inseminações/ciclo não exerceu influência sobre a fertilidade.

Efeito do intervalo das duas últimas inseminações sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco diluído

Sessenta e duas fêmeas eqüinas foram distribuídas ao acaso em dois grupos experimentais de acordo com o intervalo da penúltima à última inseminação artificial de cada ciclo (48h ou 72h). As éguas foram rufiadas e inseminadas às segundas, quartas e sextas-feiras, a partir do momento em que apresentavam um folículo de 3,0 a 3,5 cm de diâmetro, com sêmen de apenas um garanhão de fertilidade comprovada, diluído para um volume inseminante de 10 mL com diluidor de mínima contaminação. As taxas de concepção referentes ao primeiro ciclo, para os intervalos de 48h e 72h foram de 66,67% (24/36) e 65,22% (15/23), respectivamente, sendo as taxas de concepção/ciclo de 53,45% (31/58) e 56,76% (21/37), na mesma ordem anterior. Com base nos resultados obtidos, recomendam-se inseminações às segundas, quartas e sextas-feiras, sem perda da fertilidade.

Efeitos da pentoxifilina sobre a viabilidade in vitro dos espermatozóides de eqüinos, após o resfriamento a 5ºC

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito da adição de 1 mg pentoxifilina por mL de amostras seminais diluídas em meio Kenney, e resfriadas a 5º C, de garanhões normospérmicos, sobre os seguintes parâmetros: taxas de motilidade total e motilidade progressiva, velocidade espermática ao longo da trajetória real, índice retilíneo, taxa de linearidade, velocidade progressiva, taxa de viabilidade e taxa de integridade da membrana plasmática. Foram avaliados 20 ejaculados de quatro garanhões, com o auxílio do Hamilton Thorn Research (Animal Version 12.0 L, EUA), em câmara de Makler. A taxa de viabilidade foi realizada por coloração de eosina e microscopia de contraste e a taxa de integridade de membrana, por coloração com fluorocromos, iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceina e microscopia de fluorescência. As análises foram realizadas aos 30, 60, e 120 minutos de incubação a 37º C, após 12, 24 e 48 horas de resfriamento a 5ºC. A pentoxifilina incrementou significativamente, em relação ao grupo controle, os parâmetros espermáticos relacionados à motilidade dos espermatozóides e de integridade da membrana plasmática, durante todo o período de incubação, da seguinte forma: taxa de motilidade total em 8,2%; motilidade progressiva em 4,7%; velocidade real em 23,1 mm/s; taxa de espermatozóides com velocidade rápida em 7,4%; taxa de viabilidade em 4,7%; e integridade da membrana plasmática em 3,5 % do tratado. Quanto aos parâmetros índice de retilinidade e linearidade, não foi observada diferença significativa entre os grupos. Os resultados obtidos nas condições deste experimento indicam que a adição de pentoxifilina ao ejaculado resfriado de garanhões, até 48 horas após o resfriamento, pode ser benéfica à qualidade dos espermatozóides para uso na inseminação artificial.

Fertilidade do sêmen eqüino diluído, resfriado e transportado

Objetivou-se neste experimento estudar o efeito do transporte de sêmen equino, entre haras, sobre a fertilidade de éguas inseminadas. Setenta e seis fêmeas da raça Mangalarga Marchador foram distribuídas, ao acaso, com número desigual de repetições, para se estudarem os efeitos do sêmen in natura, transportado ou não, e do sêmen diluído, resfriado e transportado, sobre a fertilidade de éguas e diferentes características reprodutivas. O sêmen foi diluído no diluidor lactose-gema de ovo sem glicerina. As fêmeas foram inseminadas, em dias alternados, com sêmen de apenas um garanhão, com volumes/dose inseminante variáveis dependendo do número de fêmeas a serem inseminadas por dia com determinado ejaculado. Utilizou-se para o transporte do sêmen um contêiner especialmente projetado para este fim (MSP-1). As taxas de concepção ao primeiro ciclo e totais, a eficiência de prenhez, o número de ciclos/égua, ciclos/égua gestante, ciclo/prenhez e prenhez/ciclo, o número de IA/égua, o número de IA/égua gestante e o número de IA/égua vazia não foram influenciados pelos tratamentos. O diluidor de lactose gema, modificado pela retirada do glicerol de sua formulação, constitui uma opção para a diluição do sêmen a ser resfriado e transportado. O suceso do transporte do sêmen, diluído e resfriado, a pequenas distâncias, por período de tempo curto, depende mais de um bom diluídor que de um sofisticado contêiner de transporte.

RELATIONSHIP BETWEEN PLASMA 17-BETA ESTRADIOL ON THE DAY OF ESTRUS AND NUMBER OF VIABLE EMBRYOS IN BOS-INDICUS (NELLORE) COWS SUPEROVULATED WITH FSH

Thirteen cows, Bos indicus, of the Nellore breed were superovulated with 22 mg of follicle stimulating hormone (FSH) administered by intramuscular route during four consecutive days (D10, D11, D12 and D13), starting on the 10th day of the estrous cycle (day 0 = estrus). Prostaglandin (PGF2alpha, 1.0 mg, im) was administered on D12, 48 h after the first FSH injection, for the induction of estrus on D14, when artificial insemination was performed. Seven days later (D21 of the cycle), embryos were collected, and evaluated, and the ovarian response was estimated on the basis of number of corpora lutea determined by rectal palpation. Blood samples were obtained for the determination of plasma 17-beta estradiol on D10, D11, D12, D13, D14 and D21 and plasma progesterone on D14 by RIA. The donors were divided into two groups according to progesterone levels on D14, the day of the induced estrus (GI: P4 less-than-or-equal-to 1.00 ng/ml, N = 5 and GII: P4 > 1.00 ng/ml, N = 8). A linear positive correlation was observed between plasma 17-beta estradiol concentration on the day of estrus and viable embryo number. We conclude that plasma 17-beta estradiol and progesterone concentrations on the day of estrus can be used to predict the viability of embryos recovered from Nellore cows superovulated with FSH.

Efeito da palpação retal e da frequencia de inseminações na fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco diluído

Forty-two mares were randomly assigned in a 3 x 2 factorial experiment which included three intervals between rectal palpation (6/6h, 12/12h and once a day palpation) and two frequencies of inseminations (daily or every other day). The mares were inseminated with semen from only one stallion, diluted in minimal contamination extender. There were no differences in the conception rate at first cycle, conception/cycle, conception total, efficiency of pregnancy in either system of rectal palpation, independently of the frequency of insemination utilized. Also there were no differences among intervals of rectal palpation concerning the following reproductive characteristics: number of cycles/mare, cycles/pregnant mare, cycles/ pregnancy, pregnancy/cycle, number of inseminations/mare, inseminations/ pregnant mare and insemination/open mare. There were no differences in pregnancy rate at first cycle, pregnancy rate/cycle, pregnancy rate total and efficiency of pregnancy between the two frequency of insemination. However, the frequency of insemination influenced the number of inseminations/mare, number of inseminations/ pregnant mare and inseminations/open mare. The highest values were observed with the mares inseminated daily. Therefore, insemination every other day can be recommended. If necessary the mare may be palpated rectally at intervals of six hours without reducing the pregnancy rate.

Efeitos da rufiação e da manipulação do sistema genital sobre a fertilidade de éguas inseminadas

Estudaram-se os efeitos da rufiação e da manipulação do sistema genital (estocadas) sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco (exp. 1) e resfriado/transportado a 14ºC/3,6 horas (exp. 2). No experimento 1 utilizaram-se 42 ciclos de 29 éguas, e no experimento 2, 148 ciclos de 100 éguas, distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais definidos por um esquema fatorial 2 x 2, com número desigual de repetições, de acordo com o tipo de rufiação utilizado (éguas rufiadas e não rufiadas) e o tipo de manipulação do sistema genital da fêmea no momento da inseminação (estocadas e não estocadas). Em ambos os experimentos não se observou efeito da estimulação sexual da égua sobre a fertilidade. No experimento 2 não se observou efeito da estimulação sexual sobre a dinâmica de crescimento folicular e ovulação.

Detection and differentiation of Leptospira spp. serovars in bovine semen by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism

In view of the importance of venereal transmission of bovine leptospirosis, the objective of the present study was to apply the polymerase chain reaction (PCR) to 26 serovars of Leptospira interrogans, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. noguchii and L. biflexa, to determine the detection threshold in semen samples and to evaluate the possibility of differentiation among serovars using 19 restriction endonucleases. The results showed that all serovars were amplified and the detection threshold in semen samples of a bull was 100 bacteria/ml. Using endonucleases we could classify the 26 serovars into eight groups. The present results show that PCR is a method of great potential for the detection of Leptospira spp, at bovine artificial insemination centers. (C) 2000 Elsevier B.V. B.V. All rights reserved.

Avaliação de uma Técnica de Diluição e Transporte de Sêmen Eqüino, para as Condições Brasileiras

Ninety-seven Mangalarga Marchador mares were allocated in a randomized experimental design, with different number of replicates per treatments. The objective of this experiment was to study the effect of raw (T3) or diluted, cooled semen transported to the breeding farms 1 (T1) and 3 (T2), on mare fertility and different aspects of reproductive efficiency. The mares were inseminated, with semen of only one stallion (Farm 2), on alternate days using different inseminating volumes, according to number of inseminated mares per day using only one ejaculate. For transportation, semen diluted in a lactose-egg yolk modified extender and the MSP-2 container were used. There was no difference among treatments in relation to conception rates of mares inseminated with raw or diluted, cooled and transported semen. Regardless of the farm, the total fertility obtained with cooled semen was 80% (52/65). The following variables were not affected by the treatments: cycles/mare, cycles/pregnant mare, cycles/pregnancy, pregnancy/cycle, number of inseminations/mare, number of inseminations/pregnant mare, number of inseminations/open mare and efficiency of pregnancy. However, the breeding farm had an effect on water and semen temperature in the container, time between collection and insemination, according to time and distance covered. Based on the results, cooling and transporting equine semen, using an extender, lactose-egg yolk without glycerine and the MSP-2 container should be recommended for short distances. The use of raw semen immediately after collection is also recommended.

Evaluation of developmental changes in bovine in vitro produced embryos following exposure to bovine Herpesvirus type 5

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos de baixas doses de cloprostenol via intramuscular ou submucosavulvar na indução do estro e taxas de prenhez em vacas Nelore

The present study aims to compare the effects of lower doses of cloprostenol intramuscular (IM) or into vulvar submucosa (IVS) on estrus induction and pregnancy rate in Nelore cows. A total of 100 cycling Nelore cows with body condition score (BCS 3.5) 1 to 5 scale (Radostitis; Blood, 1986) and 170 +/- 11 days postpartum. Females were randomly divided in 5 groups (N=20) G1 to G5 and treated with cloprostenol (Ciosin (R)) on day 0 (D0) and on day 11 (D11) if not detected in estrus. Cows were injected with 500 mu g IM (G1), 250 mu g IM (G2), 125 mu g IM (G3), 250 mu g IVS (G4) and 125 mu g IVS (G5). Estrus was observed twice a day and the females artificially inseminated 12 hours after heat detection. There was no statistical difference (P>0.80) between groups in the estrus induction (first injection to estrus interval): 16/20-96.00 hours (G1), 13/20-90.42 hours (G2), 10/20-84.45 hours (G3), 15/20-87.86 hours (G4), 12/20-81.25 hours (G5) and second injection (P>0.10): 4/20-67.50 hours (G1), 7/20-85.50 hours (G2), 10/20-57.00 hours (G3), 5/20-70.60 hours (G4), 8/20-60.00 hours (G5). There was no statistical difference (0.65(ns)) between groups in the pregnancy rates: 40% (G1), 45% (G2), 50% (G3), 40% (G4), 40% (G5). The results demonstrate that the treatments with lower doses of cloprostenol intramuscular or into vulvar submucosa may be used to induce heat with similar pregnancy rates in cycling Nelore cows with good body condition.

Effects of flunixin meglumine, recombinant bovine somatotropin and/or human chorionic gonadotropin on pregnancy rates in Nelore cows

The objective was to compare pharmacological strategies aiming to inhibit prostaglandin F2 alpha (PGF(2 alpha)) synthesis (flunixin meglumine; FM), stimulate growth of the conceptus (recombinant bovine somatotropin; bST) and progesterone (P(4)) synthesis (human chorionic gonadotropin; hCG), as well as their combinations, regarding their ability to improve pregnancy rates in beef cattle. Lactating Nelore cows (N = 975), 35 to 70 days postpartum, were synchronized and inseminated by timed artificial insemination (TAT) on Day 0. on Day 7, cattle were allocated into eight groups and received one of the following treatments: saline (S) on Days 7 and 16 (Group Control); S on Day 7 and FM on Day 16 (Group FM); bST on Day 7 and S on Day 16 (Group bST); bST on Day 7 and FM on Day 16 (Group bST + FM); hCG on Day 7 and S on Day 16 (Group hCG); hCG on Day 7 and FM on Day 16 (Group hCG + FM); bST and hCG on Day 7 and S on Day 16 (Group bST + hCG), or bST and hCG on Day 7 and FM on Day 16 (Group bST + hCG + FM). The aforementioned treatments were administered at the following doses: 2.2 mg/kg FM (Banamine (R); Intervet Schering-Plough, Cotia, SP, Brazil), 500 mg bST (Boostin (R); Intervet Schering-Plough), and 2500 IU hCG (Chorulon (R); Intervet Schering-Plough). Pregnancy diagnosis was performed 40 days after TAI by transrectal ultrasonography. Pregnancy rates were not significantly different among treatments. However, there was a main effect of hCG treatment to increase pregnancy rates (63.0 vs. 55.4%; P = 0.001). Concentrations of P(4) did not differ significantly among groups on Day 7 or on Day 16. However, consistent with the higher pregnancy rates, hCG increased P(4) concentrations on Day 16 (10.6 vs. 9.6 ng/mL, respectively; P = 0.05). We concluded that hCG treatment 7 days after TAI improved pregnancy rates of lactating Nelore cows, possibly via a mechanism leading to induction of higher P(4) concentrations, or by reducing the luteolytic stimulus during maternal recognition of pregnancy. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

Detection of leptospires in bovine semen by polymerase chain reaction

Objective: In view of the considerable importance of venereal transmission of bovine leptospirosis, the objective of the present study was to compare the polymerase chain reaction (PCR), culture/isolation and serology to detect leptospire infection in bovine semen. Design: Blood for serologic examination and semen for bacterial culture and PCR were collected from 20 bulls at artificial insemination centres in Brazil. Each animal was sampled twice for serology. Result: Forty-five percent (9/20) of the serum samples collected showed agglutinin titers to serovar hardjo in the first sample and 25% (5/20) had agglutinin titers to serovar hardjo in the second sample. Eighty percent (16/20) of semen samples were positive by PCR. Leptospires could not be isolated from any of the semen samples examined. Conclusion: Polymerase chain reaction can be a method of great potential for the detection of leptospires at artificial insemination centres.