Haematological alterations of Leporinus macrocephalus (Osteichtyes: Anostomidae) naturally infected by Goezia leporini (Nematoda: Anisakidae) in fish pond

Estudou-se efeito da infecção por Goezia leporini Martins & Yoshitoshi, 2003 (Nematoda: Anisakidae) sobre as características hematológicas de Leporinus macrocephalus (Osteichthyes:Anostomidae) cultivado. Palidez das brânquias, rins, fígado e coração, pontos negros nos rins e acúmulo de líquido na cavidade visceral, estômago e intestinos foram observados. O conteúdo da vesícula biliar tinha aparência pálida e translúcida. Observaram-se alta e moderada correlações positivas entre número de nematóides e peso do peixe estimadas dentro dos grupos de peixe de 0-100g e 100-200g, respectivamente. As extensões sangüíneas revelaram variações no tamanho (anisocitose) e forma (poiquilocitose) dos eritrócitos, bem como eritrócitos em divisão. Não houve alteração (P>0,05) na contagem total de eritrócitos, de leucócitos, na taxa de hemoglobina e nos percentuais de trombócitos e monócitos. A infecção provocou redução (P<0,05) no percentual de hematócrito, no volume corpuscular médio, na concentração de hemoglobina corpuscular média e no percentual de linfócitos, e aumento (P<0,05) no percentual de neutrófilos e eosinófilos no sangue circulante de peixes infectados. Este é o primeiro relato no Brasil que relaciona hematologia e infecção por nematóides em peixes cultivados.

Microalterations in the third eyelid gland of dogs with keratoconjunctivits sicca secondary to distemper

Analisaram-se, à microscopia óptica, 28 glândulas da terceira pálpebra de cães, que morreram com cinomose. O diagnóstico de ceratoconjuntivite seca baseou-se nas alterações da superfície ocular e no teste da lágrima de Schirmer. À histologia, visibilizaram-se atrofia tubuloacina, espessamento do tecido conjuntivo e exudação inflamatória de leve a intensa com presença de plasmócitos, de histiócitos e por hipertrofia compensatória de algumas glândulas. O lume das glândulas encontrava-se hipertrofiado contendo células epiteliais descamadas, polimorfonucleares e hemácias, além de muco.

Metodologia e aplicação da citometria de fluxo na hematologia veterinária

A citometria de fluxo é um método emergente na medicina veterinária que permite a identificação e quantificação de células em suspensão. Apesar do custo elevado e da necessidade de técnicos especializados para realização da avaliação citofluorométrica, esta técnica tem uma ampla aplicação na hematologia veterinária, incluindo a avaliação de células-tronco hematopoiéticas, eritrócitos, leucócitos e plaquetas. O grande potencial de aplicação clínica da citometria de fluxo inclui a quantificação das células CD34+ como indicação da capacidade de reconstituição hematopoiética após o transplante de células-tronco e das subpopulações linfocitárias para avaliação da resposta imune frente aos transplantes e às doenças que acometem os animais. Projetos científicos sobre a avaliação citofluorométrica das células-tronco e subpopulações linfocitárias de cães têm sido desenvolvidos com sucesso por pesquisadores da área de hematologia veterinária na Universidade Estadual Paulista (UNESP), Campus de Jaboticabal. Portanto, no futuro, a citometria de fluxo deve se tornar uma técnica de rotina em laboratórios veterinários no Brasil.

Hematological values and total protein of Brasileiro de Hipismo and Breton mares during pregnancy

Estudaram-se as variáveis eritrométricas, leucométricas e a concentração de proteína total (PT) de éguas gestantes das raças Brasileiro de Hipismo (BH) e Bretão. Utilizaram-se 175 éguas sadias, com 3 a 13 anos de idade. Dentre as éguas utilizadas, 89 foram da raça BH, divididas em 14 não-prenhes e 75 prenhes, e 86 éguas da raça Bretão divididas em 11 não-prenhes e 75 prenhes. As éguas foram subdivididas em quatro grupos por raça: grupo controle (éguas não-prenhes, n=14 para BH e n=11 para Bretão); grupo I (primeiro período de gestação, 25-110 dias, n=25 para BH e Bretão), grupo II (segundo período de gestação, 111-210 dias, n=25 para BH e Bretão); e grupo III (terceiro período de gestação, 211-340 dias, n=25 para BH e Bretão). Os valores médios de cada variável eritrométrica, leucométrica e de proteína total foram obtidos para cada raça e, posteriormente, realizou-se comparação entre as mesmas. O número de hemácias (He), volume globular (VG) e teor de hemoglobina (Hb) aumentaram no segundo período de gestação e diminuíram no último período tanto para a raça BH, como para a raça Bretão. Além disso, essas mesmas variáveis apresentaram diferença estatística significativa tanto nas éguas não-prenhas como nas prenhes durante os três períodos gestacionais. Os valores médios obtidos de leucócitos e neutrófilos segmentados aumentaram a partir do segundo período de gestação para as duas raças estudadas.

Experimental lamellar keratoplasty in rabbits using microfibrilar cellulose membrane: clinical, morphological and immunohistochemical findings

Avaliaram-se aspectos clínicos, histopatógicos e imunoistoquímicos da córnes de coelhos da raça Nova Zelândia adultos e machos em ceratoplastias lamelares com membrana de celulose microfibrilar. Trinta animais distribuídos em cinco grupos (n=6) foram estudados por até 60 dias de pós-operatório. A avaliação clínica revelou manifestações moderadas de edema, blefaroespasmo e fotofobia ao segundo dia, evoluindo para formas discretas ou ausentes a partir do sétimo dia, período em que se observou, clinicamente, reparo do defeito corneal. A histopatologia revelou uma fina camada de células escamosas, recobrindo a área lesada já aos sete dias, com discreto infiltrado de células polimorfonucleares. Observaram-se vasos no epitélio a partir do 15o dia, com regressão ao 48o dia. A marcação com o anticorpo Ki67 mostrou aumento de células em proliferação aos 15 dias no epitélio e aos 30 dias no estroma. Nesse período, ocorreram remodelamento e adesão epitealial. Considerando a boa integração do implante, admite-se a membrana de celulose como um bom material a ser utilizado em ceratoplastia lamellar.

Imunoglobulinas e C3 no granuloma paracoccidióidico

Utilizou-se o modelo experimental de paracoccidioidomicose, em camundongos, induzida pela inoculação endovenosa de suspensão de formas cerebriformes do P. brasiliensis (cepa Bt2; 1x10(6) formas viáveis/animal), para avaliar, após 2, 4, 8, 16 e 20 semanas: 1. A presença de imunoglobulinas e C3 nos granulomas pulmonares, por imunofluorescência direta; 2. A resposta imune humoral (imunodifusão) e celular (teste do coxim plantar), e 3. A histopatologia das lesões. Os camundongos apresentaram resposta imunocelular positiva desde a 2a. semana, com depressão transitória na 16a. semana, e anticorpos desde a 4a. semana, com pico na 16a. semana. Os granulomas pulmonares foram epitelióides, com numerosos fungos e microabscesses; a extensão das lesões foi progressiva até a 16a. semana, com regressão discreta na 20a. semana. Desde a 2a. semana, houve deposição de IgG e C3 na parede dos fungos no interior dos granulomas e a presença de células IgG positivas no halo linfomononuclear periférico; estes achados foram máximos entre a 4a. e 16a. semanas. Não se detectou depósito de IgG e C3 no interstício dos granulomas. IgG e C3 parecem exercer papel precoce e importante na defesa do hospedeiro contra o P. brasiliensis, contribuindo possivelmente para a destruição dos fungos e bloqueando a difusão de antígenos para fora dos granulomas.

Experimental paracoccidioidomycosis in hamster: transmission electron microscopy of inoculation site lesion

Estudou-se sequencialmente, à microscopia eletrônica de transmissão, a interação entre Paracoccidioides brasiliensis (Pb) e células inflamatórias em hamsters inoculados por via intratesticular. Seis horas após inoculações havia predominância de neutrófilos, estando presentes algumas células mononucleares e eosinófilos. Os neutrófilos foram progressivamente substituídos por células mononucleares. Fungos viáveis apresentavam-se fagocitados ou circunscritos por células inflamatórias, geralmente com ampla interface hospedeiro-parasita. Fungos mortos ou degenerados eram acompanhados de interfase estreita. A camada externa da parede do Pb era às vezes quebrada quando em contacto com neutrófilos, em vários pontos, sendo os fragmentos dessa parede descamados e fagocitados. Células fúngicas pequenas com um único núcleo se relacionavam com ampla interfase enquanto as células maiores e multinucleadas apresentavam paredes irregulares, por vezes, contendo lomasoma e/ou estrutura semelhante à mielina. Diferentes padrões de interação do Pb com células do hospedeiro podem ser decorrentes do a fluxo de células inflamatórias funcionalmente diferentes ao local de inoculação ou à idade dos fungos ou ambos os fatores.

Histopathology of tick-bite lesions in naturally infested capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) in Brazil

In the present work features of tick-bite lesions were evaluated in capybaras naturally infested with Amblyomma cajennense and Amblyomma dubitatum ticks. Gross appearance of tick bite site was characterized by a mild swelling and erythema. Microscopic examination revealed the cement cone, a tube-like homogenous eosinophilic mass penetrating deep into the dermis. This structure was surrounded in the dermis by a cellular infiltrate and free eosinophilic granules and was associated to edema of variable intensity. Necrosis was a common feature deep in the dermis particularly at the far end of the eosinophilic tube. Hyperplasia, cellular edema and occasionally necrosis of keratinocytes could be seen at both sides of the ruptured epidermis. Cellular infiltrate was constituted overwhelmingly by polymorphonuclear leukocytes with eosinophilic granules. In capybaras cells with such features can be either eosinophils or heterophils (pseudoeosinophils), the latter being the equivalent of neutrophils of other mammals. Ultrastructural analysis of the cellular infiltrate revealed the predominance of heterophils over eosinophils. Mononuclear cells and mast cells and, in lesser numbers, basophils were also seen at skin attachment sites. The presence of heterophils in the reaction of capybaras against Amblyomma ticks is an outstanding feature but its role in the reaction to the tick is not known. It is however speculated that capybara heterophils might be associated with a more permissive environment for tick feeding and pathogen transmission as already shown for the equivalent cell type, the neutrophil, in the reaction of the dog against the Rhipicephalus sanguineus tick.

Inflammation-induced modulation of cellular galectin-1 and-3 expression in a model of rat peritonitis

Objective and design: To investigate the effect of galectin-1 (Gal-1) and -3 (Gal-3) on leukocyte migration and analyze the expression of both galectins in inflammatory cells using a model of rat peritonitis.Material or Subjects: Sprague-Dawley rats (n = 4 per group).Treatment: Peritonitis was induced in animals through intraperitoneal injection of carrageenin (1.5 mg/kg) and rat mesenteries were analyzed at different time points (0, 4, 24 and 48h). For pharmacological treatment, rats received intravenous injection of Gal-1 or -3 (3 mu g/kg) followed by carrageenin.Methods: Western blotting and immunoelectron microscopy analysis. Statistical analysis was performed using ANOVA followed by Bonferroni test.Results: Pharmacological treatment with Gal-1, but not Gal-3, inhibited (similar to 50%) leukocyte recruitment into the peritoneal cavity at 4h time-point. In this early phase, immunogold staining of mesenteries showed a diminished Gal-3 expression in degranulated mast cells and Gal-1 in transmigrated neutrophils (similar to 20% reduction compared to intravascular cells). In the later phases (24 and 48 h), leukocyte turnover was associated with augmented Gal-1 expression in neutrophils and macrophages and Gal-3 in mast cells and macrophages.Conclusions: These results point to a balanced expression of cell-associated-Gal-1/Gal-3 and might impact on the development of new therapeutic strategies for inflammatory diseases.

Study of pulmonary experimental paracoccidioidomycosis by analysis of bronchoalveolar lavage cells: Resistant vs. susceptible mice

Adult Swiss (susceptible) and BALB/c (non-susceptible) mice were inoculated by the intravenous route with 1 x 10(6) yeast cells of Paracoccidioides brasiliensis, strain 18. Immunologic parameters, histopathology and features of the bronchoalveolar lavage (BAL) were evaluated at week 2, 4, 8 and 16 post-infection. The pulmonary infection was progressive in Swiss mice and regressive in BALB/c mice. The numbers of total cells, lymphocytes and polymorphonuclear neutrophils increased in BAL, as well as the percentages of giant cells, and CD4 and CD8 positive cells. The ultrastructural study of BAL cells revealed a predominance of macrophages and a frequency of 13.2% of type II pneumocytes. As the infection progressed, the number of fungal cells and spreading macrophages, as well as the stimulated release of H2O2 by macrophages, increased. The animals exhibited an exacerbation of the humoral immune response and a depression of cellular immunity during the infection. There was a good correlation between the intensity and the pattern of the pulmonary histopathology and the cellular findings in the BAL. The present model reproduces some anatomoclinical patterns of the human disease and shows that BAL may be a useful tool in monitoring the pulmonary infection caused by P. brasiliensis.

Comparative susceptibility and pathogeny of Nelore and Holstein-Friesian calves to the experimental infection of Haemonchus placei (Place, 1893)

Two groups of Holstein-Friesian and Nelore calves, five animals each, about nine months old, received, by oral route, 1,000 infective larvae (L-3) per kg of body weight of Haemonchus placei. Blood samples were collected by venipuncture, at weekly intervals, from one week before, to eight weeks after infection. Hematological studies comprised the hematocrit, differential leukocyte counts, hemoglobin, fibrinogen and plasma protein determinations. Parasitological examinations covered weekly fecal egg counts (EPG) and worm burden counts at necropsy. Samples of the abomasal mucosa were submitted to gross examination and histopathological studies. Both groups had increasing EPG after the fifth week, with Holstein calves showing higher counts than the Nelore. Holstein calves had anemia and hipoproteinemia from the third week post-infection to the end of the experiment, whereas Nelore calves showed no significant differences in those, parameters. Holstein calves had significantly larger worm counts than the Nelore. The gross and histopathological lesions in the abomasum at necropsy were very similar, although macroscopically they look more apparent in the Holstein group. These results showed that Holstein calves are more susceptible to the infection and pathogenic effects of H. placei than Nelore calves.

First-void versus midstream urine culture for detection of Ureaplasma urealyticum in the urinary tract

Quantitative Ureaplasma urealyticum culture was performed on clean first-void and midstream urine to evaluate the presence of these mollicutes in the urinary tract. The results, expressed as color changing units (CCU), showed that 14 (63%) of the 22 Ureaplasma urealyticum positive patients yielded counts equal to or higher that 10(7) CCU/mL for both the initial and the middle urine specimens. No abnormal chemical or microscopic findings (protein content, leukocyte numbers) were observed. The occurrence of U. urealyticum in midstream urine samples, even when numbers are considered, may be no more than a guide to the presence of ureaplasmas in the urinary tract.

The first report of Hepatozoon spp. (Apicomplexa, Hepatozoidae) in domestic cats from São Paulo state, Brazil

Hepatozoon sp. was diagnosed in three naturally infected cats from São Paulo state, Brazil. The first animal was admitted to the veterinary clinic with renal failure. During the hematological examination, gamonts of Hepatozoon sp. were observed within polymorphonuclear cells. Another two cats, which lived in the same house as the first cat, were also positive for this hemoparasite. This is the first report of a Hepatozoon sp. infection in domestic cats from Brazil.

Tissue stages of Hepatozoon canis in naturally infected dogs from São Paulo State, Brazil

A total of 222 dogs were examined by blood smear examination and Hepatozoon canis infection was detected in 13 dogs (5.9%). Five H. canis-infected dogs were necropsied to observe tissue stages in the organs. Fragments of spleen, liver, lungs, heart, kidneys, lymph nodes, bone marrow and skeletal muscles were used to made touch-impression smears. No macroscopic lesions were found in the organs. Two dogs had gamonts within polymorphonuclear cells and schizonts in various stages of development within the spleen and the bone marrow. Nevertheless, no mature meronts were found.

Hematology of free-living marsh deer (Blastocerus dichotomus) from Southeast Brazil

This work reports basic hematologic values of a sample of a population of free-living marsh deer (Blastocerus dichotomus) living by the Parana River in Southeast Brazil. Hematologic values are presented separately for male, female, and young animals as well as for anesthetized and nonanesthetized cervids. Nonanesthetized deer restrained by physical means had significantly higher erythrocyte indices and total leukocyte counts. Comparisons of blood parameters of anesthetized animals of different ages and gender differed slightly, with only two significant differences observed: young animals had significantly higher red blood cell counts than adult males and a lower blood total protein content when compared to adult females. Results indicate that two main reference ranges for blood values should be considered for marsh deer, for blood obtained from anesthetized or physically restrained individuals.