Renal and antibacterial effects induced by myotoxin I and II isolated from Bothrops jararacussu venom

Bothrops jararacussu myotoxin I (BthTx-I; Lys 49) and II (BthTX-II; Asp 49) were purified by ion-exchange chromatography and reverse phase HPLC. In this work we used the isolated perfused rat kidney method to evaluate the renal effects of B. jararacussu myotoxins I (Lys49 PLA(2)) and II (Asp49 PLA(2)) and their possible blockage by indomethacin. BthTX-1 (5 mu g/ml) and BthTX-II (5 mu g/ml) increased perfusion pressure (PP; ct(120) = 110.28+/-3.70 mmHg; BthTX I = 171.28+/-6.30* mmHg; BthTX II = 175.50+/-7.20* mmHg), renal vascular resistance (RVR; ct(120) = 5.49+/-0.54 mmHg/ml.g(-1) min(-1); BthTX I = 8.62+/-0.37* mmHg/ml g(-1) min(-1); BthTX II=8.9+/-0.36* mmHg/ml g(-1) min(-1)), urinary flow (UF; ct(120)= 0.14+/-0.01 ml g(-1) min(-1); BthTX I=0.32+/-0.05* ml g(-1) min(-1); BthTX II=0.37+/-0.01* ml g(-1) min(-1)) and glomerular filtration rate (GFR; ct(120)=0.72+/-0.10 ml g(-1) min(-1); BthTX I=0.85+/-0.13* ml g(-1) min(-1); BthTX II=1.22+/-0.28* ml g(-1) min(-1)). In contrast decreased the percent of sodium tubular transport (%TNa+; ct(120)=79,76+/-0.56; BthTX I=62.23+/-4.12*; BthTX II=70.96+/-2.93*) and percent of potassium tubular transport (%TK+;ct(120)=66.80+/-3.69; BthTX I=55.76+/-5.57*; BthTX II=50.86+/-6.16*). Indomethacin antagonized the vascular, glomerular and tubular effects promoted by BthTX I and it's partially blocked the effects of BthTX II. In this work also evaluated the antibacterial effects of BthTx-I and BthTx-II against Xanthomonas axonopodis. pv. passiflorae (Gram-negative bacteria) and we observed that both PLA2 showed antibacterial activity. Also we observed that proteins Also we observed that proteins chemically modified with 4-bromophenacyl bromide (rho-BPB) decrease significantly the antibacterial effect of both PLA(2). In conclusion, BthTx I and BthTX II caused renal alteration and presented activity antimicrobial. The indomethacin was able to antagonize totally the renal effects induced by BthTx I and partially the effects promoted by BthTx II, suggesting involvement of inflammatory mediators in the renal effects caused by myotoxins. In the other hand, other effects could be independently of the enzymatic activity of the BthTX II and the C-terminal domain could be involved in both effects promoted for PLA(2). (C) 2005 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Biological and structural characterization of a new PLA(2) from the Crotalus durissus collilineatus venom

In the present article we report on the biological characterization and amino acid sequence of a new basic Phospholipases A(2) (PLA(2)) isolated from the Crotalus durissus collilineatus venom (Cdcolli F6), which showed the presence of 122 amino acid residues with a pI value of 8.3, molecular mass of 14 kDa and revealed an amino acid sequence identity of 80% with crotalic PLA(2)s such as Mojave B, Cdt F15, and CROATOX. This homology, however, dropped to 50% if compared to other sources of PLA(2)s such as from the Bothrops snake venom. Also, this PLA(2) induced myonecrosis, although this effect was lower than that of BthTx-I or whole crotoxin and it was able to induce a strong blockage effect on the chick biventer neuromuscular preparation, independently of the presence of the acid subunid (crotapotin). The neurotoxic effect was strongly reduced by pre-incubation with heparin or with anhydrous acetic acid and rho-BPB showed a similar reduction. The rho-BPB did not reduce significantly the myotoxic activity induced by the PLA(2), but the anhydrous acetic acid treatment and the pre-incu-bation of PLA(2) with heparin reduced significantly its effects. This protein showed a strong antimicrobial activity against Xanthomonas axonopodis passiflorae (Gram-negative), which was drastically reduced by incubation of this PLA(2) with rho-BPB, but this effect was marginally reduced after treatment with anhydrous acetic acid. Our findings here allow to speculate that basic amino acid residues on the C-terminal and molecular regions near catalytic site regions such as Calcium binding loop or rho-wing region may be involved in the binding of this PLA(2) to the molecular receptor to induce the neurotoxic effect. The bactericidal effect, however, was completely dependent on the enzymatic activity of this protein.

Purification and biological effects of a C-type lectin isolated from Bothrops moojeni

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Tamanho da amostra para quantificação do diâmetro de lesões de cancro cítrico

A estimativa do diâmetro de lesões de cancro cítrico é uma das principais técnicas usadas na avaliação da interação entre isolados x genótipos, na avaliação da resistência varietal e no estudo de aspectos epidemiológicos. No entanto, inexistem informações a respeito do tamanho da amostra para uma adequada quantificação da doença, considerando o diâmetro de lesões. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo a determinação do número de amostras para mensurar o diâmetro médio de lesões de cancro cítrico. Foram considerados como fontes de variação três genótipos do hospedeiro, dois métodos de inoculação de Xanthomonas citri subsp. citri e dois avaliadores. As avaliações dos diâmetros foram realizadas considerando ou não o halo amarelo ao redor do tecido necrosado, quando presente. Estimativas do diâmetro de lesões com erros na média inferiores a 3% são impraticáveis em razão do tamanho excessivo da amostra (mais que quarenta lesões/planta). Menores erros na média ocorreram nas estimativas considerando somente o tecido necrosado. Estimativas precisas do diâmetro de lesões, com erros na média inferiores a 10%, podem ser obtidas com tamanhos de amostras entre cinco e quinze lesões/planta, independentemente do genótipo e da idade das lesões.

Mapas de zonas de risco de epidemias e zoneamento agroclimático para o Cancro Cítrico no Estado de São Paulo

O cancro cítrico, causado pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri Valterin et alii 1995, é uma doença conhecida mundialmente e sempre constituiu séria ameaça para a citricultura brasileira. O objetivo do presente trabalho foi analisar as condições climáticas do Estado de São Paulo e desenvolver mapas de zonas de maior risco de epidemias de cancro cítrico. Foram utilizados dados meteorológicos referentes aos anos de 2002 a 2005, os quais foram baseados no modelo de previsão desenvolvido por Campbell & Madden (4) e Hau & Kranz (10). A freqüência dos dados foi horária e quando alguma estação apresentava falha, esses eram extrapolados da estação mais próxima. Foram contabilizados os índices de favorabilidade e posteriormente calculadas as porcentagens de dias favoráveis à ocorrência da doença no período de um ano. A partir destas informações, foram gerados os mapas temáticos do Estado de São Paulo, com a distribuição espacial da porcentagem de dias favoráveis à ocorrência de cancro cítrico. A região Noroeste do Estado foi a que apresentou a maior porcentagem de dias favoráveis à ocorrência de cancro cítrico.

Prováveis consequências do abrandamento da metodologia de erradicação do cancro cítrico no Estado de São Paulo

Recentemente a Secretaria de Agricultura e Abastecimento do estado de São Paulo abrandou os critérios relacionados à erradicação do cancro cítrico. em abril de 2009 mais de 99,8% dos talhões comerciais de laranjeiras doces estavam livres da doença em São Paulo. Abrandar a metodologia de erradicação significa comprometer esse elevado nível de sanidade dos pomares e a competitividade da citricultura, com reflexos negativos financeiros e ambientais. Diante desses fatos sugere-se: a) que a erradicação da doença volte a ser feita como anteriormente utilizada; ou b) a adoção de uma nova metodologia de erradicação, mais efetiva na supressão da doença, quando em novos levantamentos amostrais de cancro cítrico em São Paulo forem encontradas incidências de talhões comerciais com a doença superiores a 0,36%. Essa incidência foi calculada comparando-se pelo teste de Duncan (P<0,05) os levantamentos amostrais de cancro cítrico realizados de 1999 a 2009. A diferença mínima significativa encontrada foi de 0,28. A menor incidência do cancro cítrico em São Paulo foi de 0,08%, observada em 2001. Dessa forma, como alternativa, propõe-se a adoção de uma metodologia mais drástica de erradicação do cancro cítrico quando em um novo levantamento amostral for detectado mais que 0,36% de talhões comerciais com cancro cítrico.

Ação de tinturas e óleos essenciais de plantas medicinais sobre o crestamento bacteriano comum do feijoeiro e na produção de proteínas de indução de resistência

A exploração da atividade biológica de compostos secundários presentes nas tinturas ou em óleos essenciais de plantas podem representar, ao lado da indução de resistência, mais uma forma potencial de controle de doenças em plantas cultivadas. O presente trabalho objetivou avaliar o potencial de tinturas de Lippia alba, Lippia sidoides, Mikania glomerata, Equisetum sp. e Hedera helix e óleos essenciais de Rosmarinus officinalis e Cinnamomum zeylanicum nas atividades in vitro, in vivo e na produção de proteínas na indução de resistência, em plantas de feijão vagem cultivar Bragança. Os resultados obtidos demonstraram que as tinturas de L. alba e L. sidoides e os óleos essenciais (R. officinalis e C. zeylanicum) apresentaram atividade in vitro aos isolados de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Todas as tinturas ensaiadas apresentaram menores valores do progresso da doença (AACPD), em relação à testemunha, merecendo destaque a tintura de L. alba, que estavam correlacionadas com os maiores teores de polifenoloxidase, peroxidase e proteínas solúveis totais, evidenciando uma possível indução de resistência. Os óleos essenciais não apresentaram diferença na AACPD e nem na indução de proteínas.

Aerial stem and leaf morphoanatomy of some species of Smilax

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Strain variability in the DNA immigration control region (ICR) of Xylella fastidiosa

The genome of the bacterium Xylella fastidiosa contains four ORFs (XF2721, XF2725, XF2739 and XF0295) related to the restriction modification type I system, ordinarily named R-M. This system belongs to the DNA immigration control region (ICR). Each CIRF is related to different operon structures, which are homologues among themselves and with subunit Hsd R from the endonuclease coding genes. In addition, these ORFs are highly homologous to genes in Pseudomonas aeruginosa, Methylococcus capsulatus str. Bath, Legionella pneumophila, Helicobacter pylori, Xanthomonas oryzae pv. Oryzae and Silicibacter pomeroyi, as well as to genes from X. fastidiosa strains that infect grapevine, almond and oleander plants. This study was carried out on R-M ORFs from forty-three X. fastidiosa strains isolated from citrus, coffee, grapevine, periwinkle, almond and plum trees, in order to assess the genetic diversity of these loci through PCR-RFLP. PCR-RFLP analysis of the four ORFs related to the R-M system from these strains enabled the detection of haplotypes for these loci. When the haplotypes were defined, wide genetic diversity and a large range of similar strains originating from different hosts were observed. This analysis also provided information indicating differences in population genetic structures, which led to detection of different levels of gene transfer among the groups of strains. (c) 2005 Elsevier SAS. All rights reserved.

Comparative genomics analyses of citrus-associated bacteria

Xylella fastidiosa 9a5c (XF-9a5c) and Xanthomonas axonopodis pv. citri (XAC) are bacteria that infect citrus plants. Sequencing of the genomes of these strains is complete and comparative analyses are now under way with the genomes of other bacteria of the same genera. In this review, we present an overview of this comparative genomic work. We also present a detailed genomic comparison between XF-9a5a and XAC. Based on this analysis, genes and operons were identified that might be relevant for adaptation to citrus. XAC has two copies of a type II secretion system, a large number of cell wall-degrading enzymes and sugar transporters, a complete energy metabolism, a whole set of avirulence genes associated with a type III secretion system, and a complete flagellar and chemotatic system. By contrast, XF-9a5c possesses more genes involved with type IV pili biosynthesis than does XAC, contains genes encoding for production of colicins, and has 4 copies of Type I restriction/modification system while XAC has only one.

Pericarp structure in Banisteriopsis CBRob. and Diplopterys A.Juss. (Malpighiaceae): new data supporting generic segregation

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Nutritional composition, phenolic compounds, nitrate content in eatable vegetables obtained by conventional and certified organic grown culture subject to thermal treatment

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Evaluation of pyraclostrobin and acibenzolar-S-methyl on common bacterial blight of snap bean

Assays were done under greenhouse conditions in order to evaluate the effect of pyraclostrobin (0.0375, 0.0750 and 0.150 mL.L-1) and acibenzolar-S-methyl (ASM) (0.025 g.L-1) in common bacterial blight on leaves of snap beans cultivar Braganca. These chemicals were sprayed at three different times: five days before; five days before + five days after; and five days after leaf inoculation with an isolate of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. They were determinate the levels of polyphenoloxidase, peroxidase and total soluble proteins on inoculated and non-inoculated leaves of snap beans sprayed with pyraclostrobin (0.075 g.L-1) and ASM (0.025 g.L-1). All concentration of pyraclostrobin and ASM reduced the area under the disease progress curve (AUDPC) on leaves of snap beans, and the least AUDPC value was observed when this products were sprayed five days before + five days after inoculation. Higher levels of polyphenoloxidase, peroxidase and the total soluble proteins were observed on leaves sprayed with pyraclostrobin or ASM.

Crab spiders (Araneae: Thomisidae) in flowering plants in a Brazilian Cerrado ecosystem

Ainda que aranhas Thomisidae sejam comumente encontradas em flores, as associações desses aracnídeos a espécies de plantas e às suas características florais foram pouco registradas na região neotropical. Observações do hábito das plantas, visitantes florais, e também das características florais, tais como antese, odor, forma, cor e recursos da flor, foram assinaladas para espécies floridas de uma área de cerrado presentes em uma trilha de 2 km de extensão. Misumenops argenteus e Misumenops pallens representaram 62,86% das aranhas habitantes de 22 espécies de plantas floridas. As plantas Senna rugosa (Fabaceae), Styrax ferrugineus (Styracaceae) e Banisteriopsis campestris (Malpighiaceae) abrigaram, individualmente, cerca de 10 a 17% do total das aranhas e, nestas plantas, a antese diurna; flores de coloração atrativa a abelhas, como amarela (S. rugosa), branca (S. ferrugineus) e rosa (B. campestris) e as anteras poricidas, bem como a visita das flores por abelhas reforçou a evidência de síndrome de polinização para melitofilia. Este é o primeiro levantamento de espécies de aranhas Thomisidae associadas a plantas do cerrado brasileiro.

Morfoanatomia e ontogênese das sementes de espécies de Banisteriopsis C.B. Robinson e Diplopterys A. Juss. (Malpighiaceae)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)