Structural and functional characterization of BnSP-7, a Lys49 myotoxic phospholipase A(2) homologue from Bothrops neuwiedi pauloensis Venom

BnSP-7, a Lys49 myotoxic phospholipase A, homologue from Bothrops neuwiedi pauloensis venom, was structurally and functionally characterized. Several biological activities were assayed and compared with those of the chemically modified toxin involving specific amino acid residues, the cDNA produced from the total RNA by RT-PCR contained approximately 400 bp which codified its 121 amino acid residues with a calculated pi and molecular weight of 8.9 and 13,727, respectively. Its amino acid sequence showed strong similarities with several Lys49 phospholipase A, homologues from other Bothrops sp, venoms. By affinity chromatography and gel diffusion, it was demonstrated that heparin formed a complex with BnSP-7, held at least in part by electrostatic interactions. BnSP-7 displayed bactericidal activity and promoted the blockage of the neuromuscular contraction of the chick, biventer cervicis muscle. In addition to its in vivo myotoxic and edema-inducing activity, it disrupted artificial membranes, Both BnSP-7 and the crude venom released creatine kinase from the mouse gastrocnemius muscle and induced the development of a dose-dependent edema. His, Tyr, and Lys residues of the toxin were chemically modified by 4-bromophhenacyl bromide (BPB), 2-nitrobenzenesulfonyl fluoride (NBSF), and acetic anhydride (AA), respectively. Cleavage of its N-terminal octapeptide was achieved with cyanogen bromide (CNBr), the bactericidal action of BnSP-7 on Escherichia coli was almost completely abolished by acetylation or cleavage of the N-terminal octapeptide, the neuromuscular effect induced by BnSP-7 was completely inhibited by heparin, BPB, acetylation, and CNBr treatment. The creatine kinase releasing and edema-inducing effects were partially inhibited by heparin or modification by BPB and almost completely abolished by acetylation or cleavage of the N-terminal octapeptide, the rupture of liposomes by BnSP-7 and crude venom was dose and temperature dependent. Incubation of BnSP-7 with EDTA did not change this effect, suggesting a Ca2+-independent membrane lytic activity. BnSP-7 cross-reacted with antibodies raised against B. moojeni (MjTX-II), B. jararacussu (BthTX-I), and B. asper (Basp-II) myotoxins as well as against the C-terminal peptide (residues 115-129) from Basp-II. (C) 2000 Academic Press.

Phospholipase A(2) myotoxins from Bothrops snake venoms: Structure-function relationship

Phospholipases A(2) constitute the major components from Bothrops snake venoms and have been extensively investigated not only because they are relatively very abundant in these venoms but mainly because they display a range of many relevant biological effects, including: myotoxic, cytotoxic, edema-inducing, artificial membrane disrupting, anticoagulant, neuromuscular, platelet aggregation inhibiting, hypotensive, bactericidal, anti-HIV, anti-tumoural, anti-malarial and anti-parasitic. The primary structures of several PLA(2)s have been elucidated through direct amino acid sequencing or, inderectly, through the corresponding nucleotide sequencing. Two main subgroups were thus described: (i) Asp49 PLA(2)s, showing low (basic, highly myotoxic) to relatively high (acidic, less or non myotoxic) Ca++-dependent hydrolytic activity upon artificial substrates; (ii) Lys49 PLA(2)s (basic, highly myotoxic) , showing no detectable hydrolytic activity on artificial substrates. Several crystal structures of Lys49 PLAs from genus Bothrops have already been solved, revealing very similar fold patterns. Lack of catalytic activity of myotoxic Lys49-PLA(2)s, first related solely with the fact that Lys49 occupies the position of the calcium ion in the catalyticly active site of Asp49 PLA(2)s, is now also attributed to Lys122 which interacts with the carbonyl of Cys29 hyperpolarising the peptide bond between Cys29 and Gly30 and trapping the fatty acid product in the active site, thus interrupting the catalytic cycle. This hypothesis, supported for three recent structures, is also discussed here. All Asp49 myotoxins showed to be pharmacologically more potent when compared with the Lys49 variants, but phospholipid hydrolysis is not an indispensable condition for the myotoxic, cytotoxic, bactericidal, anti-HIV, anti-parasitic, liposome disrupting or edema-inducing activities. Recent studies on site directed mutagenesis of the recombinant Lys49 myotoxin from Bothrops jararacussu revealed the participation of important amino acid residues in the membrane damaging and myotoxic activities.

The chelation of metal ions by the acylpolyamine toxins from the web-spider Nephilengys cruentata: effects in the intoxication/detoxification of preys

Orb-web-spiders present a series of different strategies for prey capture, involving the use of different types of silk for web building, the use of adhesive traps in the webs, the secretion of toxic compounds to the spider's preys in the adhesive coating of the capture web and the biosynthesis of a wide range of structurally related acylpolyamine toxins in their venoms. The polyamine toxins usually block neuromuscular junctions and/or the central nervous system (CNS) of Arthropods, targeting specially the ionotropic glutamate receptors; this way these toxins are used are as chemical weapons to kill / paralyze the spider's prey. Polyamine toxins contain many azamethylene groups involved with the chelation of metal ions, which in turn can interact with the glutamate receptors, affecting the toxicity of these toxins. It was demonstrated that the chelation of Ni+2, Fe+2, Pb+2, Ca+2 and Mg+2 ions by the desalted crude venom of Nephilengys cruentata and by the synthetic toxin JSTX-3, did not cause any significant change in the toxicity of the acylpolyamine toxins to the model-prey insect (honeybees). However, it was also reported that the chelation of Zn+2 ions by the acylpolyamines potentiated the lethal / paralytic action of these toxins to the honeybees, while the chelation of Cu+2 ions caused the inverse effect. Atomic absorption spectrometry and Plasma-ICP analysis both of N.cruentata venom and honeybee's hemolymph revealed that the spider's venom concentrates Zn+2 ions, while the honeybee's hemolymph concentrates Cu+2 ions. These results are suggesting that the natural accumulation of Zn+2 ions in N. cruentata venom favors the prey catching and/or its maintenance in the web, while the natural accumulation of Cu+2 ions in prey's hemolymph minimizes the efficiency of the acylpolyamine toxins as killing/paralyzing tool.

Utilização do esforço percebido na determinação da velocidade crítica em corrida aquática

A relação linear entre intensidade do exercício e taxa de aumento da atividade neuromuscular avaliada pela eletromiografia permite a estimativa do limiar de fadiga, que seria a intensidade que poderia ser mantida indefinidamente sem aumento dos sinais eletromiográficos ao longo do tempo. Levantou-se a hipótese de que a percepção subjetiva de esforço teria comportamento semelhante ao da ativação neuromuscular e que um limiar de esforço percebido (LEP), identificado de forma semelhante ao limiar de fadiga eletromiográfica, poderia coincidir com a velocidade crítica (VCrit). Treze indivíduos de ambos os sexos (23,0 ± 2,5 anos), em uma piscina de 15m de extensão e 2,5m de profundidade, realizaram três testes exaustivos de corrida aquática para determinação dos parâmetros do modelo de velocidade crítica, reportando o esforço percebido (escala de Borg de 6-20 pontos), a cada 15m. Para identificação do LEP, os coeficientes de inclinação das retas do aumento do esforço percebido no tempo (ordenada) e velocidades utilizadas (abscissa) foram ajustados a uma função linear que fornecia um ponto no eixo da velocidade onde, teoricamente, o esforço percebido seria estável indefinidamente. A VCrit foi estimada pelas equações usadas no modelo de velocidade crítica. Para comparação das estimativas de VCrit e do LEP, e de suas associações, foi feita ANOVA para medidas repetidas (p < 0,05) e calculada a correlação de Pearson. Os dados obtidos para a determinação da VCrit atenderam aos critérios adotados para a validade do modelo; a VCrit e o LEP não apresentaram diferença estatística (0,23 ± 0,02m/s x 0,24 ± 0,03m/s) e foram significativamente correlacionados (r = 0,85). Esses resultados sugerem que o LEP parece representar a intensidade máxima de exercício em que variáveis fisiológicas e psicofísicas encontrariam estabilidade, e que esse índice pode ser utilizado na determinação da VCrit.

Manipulation of Rest Period Length Induces Different Causes of Fatigue in Vertical Jumping

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

POSITIONING DURING RESISTANCE ELBOW FLEXOR EXERCISE AFFECTS ELECTROMYOGRAPHIC ACTIVITY, HEART RATE, and PERCEIVED EXERTION

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

O uso da vibração como método auxiliar no treinamento de capacidades físicas: uma revisão da literatura

The effects of vibration on the human body have been documented for many years. Recently, the use of vibration is an auxiliary method of physical training in the young, elderly and athletes. Recent studies indicate an increase in gain of strength, flexibility, endurance and power of individuals trained with vibrating equipments. Despite the fairly widespread use, the physiological effects of vibration are still poorly understood, and there is great variability in the training protocols used in the literature. Future studies should be conducted as a way to better understand the physiological effects of vibration and also the affects of different protocols on physical training as strength, flexibility, endurance and power.

Effect of Strength Training on Rate of Force Development in Older Women

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Antiulcerogenic activity of Indigofera truxillensis Kunth

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeito analgésico de longa duração da dipirona sobre a hiperalgesia persistente induzida pela constrição do nervo ciático em ratos: participação do óxido nítrico

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação dos efeitos do treinamento no período preparatório em atletas profissionais de futebol

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do treinamento no período preparatório em atletas profissionais de futebol. Participam 17 atletas, com idade acima de 18 anos que disputaram a terceira divisão do campeonato paulista, em 2009. O programa de treinamento predominante foi o tipo neuromuscular e por meio dos testes de sentar e alcançar, salto sêxtuplo, salto vertical e velocidade de deslocamento em 30m os atletas foram avaliados antes do início do programa de treinamento (M1) e após sete semanas (M2). Os dados coletados foram armazenados em banco computacional, produzindo-se informações no plano descritivo (medidas de centralidade e dispersão) e, no inferencial, Teste t de Student e Anova One-way. Os principais resultados apontam para melhora da flexibilidade, força explosiva e rápida, e sensível diminuição na velocidade de deslocamento em 30 metros.

Experiência clínica com o uso de sedativos em terapia intensiva: estudo retrospectivo

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: Dentre as indicações mais freqüentes de sedação em pacientes internados em Unidades de Terapia Intensiva (UTI) estão a instituição e a manutenção de ventilação artificial, a ansiedade e procedimentos desconfortáveis ou dolorosos. O objetivo deste estudo retrospectivo foi verificar as indicações e as técnicas mais comuns de sedação em pacientes graves internados na Unidade de Terapia Intensiva Cirúrgica da Escola Paulista de Medicina (EPM/UNIFESP) durante um período de 11 meses. MÉTODO: Após terem sido excluídos os pacientes que permaneceram na UTI menos de 24 horas ou estavam sem exames indispensáveis para o cálculo do índice de gravidade (APACHE II), a amostra ficou reduzida a 307 pacientes. Foram analisadas as técnicas mais utilizadas, as indicações de sedação e a associação de bloqueadores neuromusculares. RESULTADOS: A sedação foi administrada em 37,4% dos pacientes. Entre as indicações de sedação estão os distúrbios de natureza psiquiátrica, como delírio, agitação, medo e ansiedade. Estas corresponderam a 25,77% de todas as indicações. A maioria dos pacientes ventilados artificialmente também necessita de sedativos. Instalação e manutenção de ventilação mecânica corresponderam à maioria das indicações, em torno de 57,73% dentre os pacientes sedados. Procedimentos como intubação traqueal e broncoscopia tiveram 11,34% das indicações e controle do metabolismo (coma barbitúrico e tétano), 5,15%. As técnicas mais comumente utilizadas incluíram opióides isolados ou associados a benzodiazepínicos. Neste estudo, o fentanil foi utilizado em 58% das técnicas, isoladamente, e em 21,64% associado ao midazolam. Haloperidol, diazepam, propofol e tiopental somaram 19,5%. Bloqueadores neuromusculares foram utilizados em 22,7% dos casos em pacientes ventilados artificialmente. CONCLUSÕES: A sedação é recurso terapêutico freqüente em Terapia Intensiva, comumente utilizada para facilitar a ventilação artificial e tratar os problemas de natureza psiquiátrica. Fentanil, isoladamente ou em associação com midazolam, foi o agente mais utilizado.

Indução anestésica com a técnica de seqüência rápida

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A indução da anestesia por meio da técnica de seqüência rápida é utilizada, principalmente, para proteger as vias aéreas, quando há risco de aspiração do conteúdo gástrico. O objetivo deste artigo é revisar a técnica e os diferentes protocolos que buscam o uso racional dos fármacos disponíveis, visando condições ideais de intubação traqueal, sem aumentar o risco de aspiração do conteúdo gástrico ou de outras complicações. CONTEÚDO: Apresenta uma revisão da técnica da indução com seqüência rápida, enfatizando o uso racional dos hipnóticos, opióides e bloqueadores neuromusculares (BNM), para reduzir o período entre a perda da consciência e o correto posicionamento do tubo traqueal, ou seja, diminuir o período de maior risco para aspiração e ainda manter excelentes condições de intubação traqueal. CONCLUSÕES: A intubação traqueal após indução anestésica por meio da técnica de seqüência rápida está indicada naqueles pacientes, com risco de aspiração gástrica, em que não há suspeita de intubação traqueal difícil. A indicação correta da técnica, sua aplicação criteriosa e a utilização racional das drogas disponíveis podem promover condições excelentes de intubação, com curto período de latência, rápido retorno da consciência e da respiração espontânea, caso haja falha na intubação traqueal.

Avaliação eletroneuromiográfica em gatos normais e submetidos ao hiperparatireoidismo secundário nutricional

O trabalho teve por objetivos estudar a condução nervosa motora e a transmissão neuromuscular e eletromiografia de repouso em gatos normais (grupo I), submetidos a hiperparatireoidismo secundário nutricional (grupo II). Para estudo normativo (grupo I), foram utilizados 10 gatos, aparentemente saudáveis, sem raça definida, sendo seis machos e quatro fêmeas, com idades entre 4 e 5 meses e peso médio de 1,67kg. No grupo II, empregaram-se 10 gatos, sem raça definida, sendo cinco machos e cinco fêmeas, com idade aproximada inicial entre 2 e 3 meses e peso inicial médio de 820 gramas. Após um período de adaptação de 10 dias, foram alimentados por 60 dias com coração bovino moído e cru, visando a indução de hiperparatireoidismo secundário nutricional. Foi possível concluir que latência, amplitude e velocidade de condução nervosa motora e os achados eletromiográficos das atividades insercional e espontânea de gatos com hiperparatireoisdismo secundário nutricional, apresentaram um padrão similar aos de gatos normais da mesma idade. Para estimulações repetitivas a 3Hz, observou-se tendência global a decremento dos potenciais de ação musculares compostos e a 10 Hz houve tendência de incremento ou decremento; entretanto, tais variações apresentaram-se dentro dos limites de normalidade.

Structure and biological activities of eumenine mastoparan-AF (EMP-AF), a new mast cell degranulating peptide in the venom of the solitary wasp (Anterhynchium flavomarginatum micado)

A new mast cell degranulating peptide, eumenine mastoparan-AF (EMP-AF), was isolated from the venom of the solitary wasp Anterhynchium flavomarginatum micado, the most common eumenine wasp found in Japan. The structure was analyzed by FAB-MS/MS together with Edman degradation, which was corroborated by solid-phase synthesis. The sequence of EMP-AF, Ile-Asn-Leu-Leu-Lys-Ile-Ala-Lys-Gly-Ile-lle-Lys-Ser-Leu-NH(2), was similar to that of mastoparan, a mast cell degranulating peptide from a hornet venom; tetradecapeptide with C-terminus amidated and rich in hydrophobic and basic amino acids. In fact, EMP-AF exhibited similar activity to mastoparan in stimulating degranulation from rat peritoneal mast cells and RBL-2H3 cells. It also showed significant hemolytic activity in human erythrocytes. Therefore, this is the first example that a mast cell degranulating peptide is found in the solitary wasp venom. Besides the degranulation and hemolytic activity, EMP-AF also affects on neuromuscular transmission in the lobster walking leg preparation. Three analogs EMP-AF-1 similar to 3 were snythesized and biologically tested together with EMP-AF, resulting in the importance of the C-terminal amide structure for biological activities. (C) 2000 Elsevier B.V. Ltd. All rights reserved.