Intermolecular interactions and characterization of the novel factor Xa exosite involved in macromolecular recognition and inhibition: Crystal structure of human Gla-domainless factor Xa complexed with the anticoagulant protein NAPc2 from the hematophagous nematode Ancylostoma caninum

NAPc2, an anticoagulant protein from the hematophagous nematode Ancylostoma caninum evaluated in phase-II/IIa clinical trials, inhibits the extrinsic blood coagulation pathway by a two step mechanism, initially interacting with the hitherto uncharacterized factor Xa exosite involved in macromolecular recognition and subsequently inhibiting factor VIIa (K-i = 8.4 pM) of the factor VIIa/tissue factor complex. NAPc2 is highly flexible, becoming partially ordered and undergoing significant structural changes in the C terminus upon binding to the factor Xa exosite. In the crystal structure of the ternary factor Xa/NAPc2/selectide complex, the binding interface consists of an intermolecular antiparallel beta-sheet formed by the segment of the polypeptide chain consisting of residues 74-80 of NAPc2 with the residues 86-93 of factor Xa that is additional maintained by contacts between the short helical segment (residues 67-73) and a turn (residues 26-29) of NAPc2 with the short C-terminal helix of factor Xa (residues 233-243). This exosite is physiologically highly relevant for the recognition and inhibition of factor X/Xa by macromolecular substrates and provides a structural motif for the development of a new class of inhibitors for the treatment of deep vein thrombosis and angioplasty. (c) 2006 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of Protac (R), a commercial protein C activator isolated from Agkistrodon contortrix contortrix venom

The protein C pathway plays an important role in the control and regulation of the blood coagulation cascade and prevents the propagation of the clotting process on the endothelium surface. In physiological systems, protein C activation is catalyzed by thrombin, which requires thrombomodulin as a cofactor. The protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix acts directly on the zymogen of protein C converting it into the active form, independently of thrombomodulin. Suitable crystals of the protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix were obtained from a solution containing 2 M ammonium sulfate as the precipitant and these crystals diffracted to 1.95 angstrom resolution at a synchrotron beamline. The crystalline array belongs to the monoclinic space group C2 with unit cell dimensions a=80.4, b = 63.3 and c = 48.2 angstrom, alpha = gamma = 90.0 degrees and beta = 90.8 degrees. (C) 2005 Elsevier B.V. All rights reserved.

Structural basis for metal ion coordination and the catalytic mechanism of sphingomyelinases D

Sphingomyelinases D (SMases D) from Loxosceles spider venom are the principal toxins responsible for the manifestation of dermonecrosis, intravascular hemolysis, and acute renal failure, which can result in death. These enzymes catalyze the hydrolysis of sphingomyelin, resulting in the formation of ceramide 1-phosphate and choline or the hydrolysis of lysophosphatidyl choline, generating the lipid mediator lysophosphatidic acid. This report represents the first crystal structure of a member of the sphingomyelinase D family from Loxosceles laeta (SMase I), which has been determined at 1.75-angstrom resolution using the quick cryo-soaking technique and phases obtained from a single iodine derivative and data collected from a conventional rotating anode x-ray source. SMase I folds as an (alpha/beta)(8) barrel, the interfacial and catalytic sites encompass hydrophobic loops and a negatively charged surface. Substrate binding and/or the transition state are stabilized by a Mg2+ ion, which is coordinated by Glu(32), Asp(34), Asp(91), and solvent molecules. In the proposed acid base catalytic mechanism, His(12) and His(47) play key roles and are supported by a network of hydrogen bonds between Asp(34), Asp(52), Trp(230), Asp(233), and Asn(252).

Structural studies of BmooMP alpha-I, a non-hemorrhagic metalloproteinase from Bothrops moojeni venom

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

The Venomics of Bothrops alternatus is a Pool of Acidic Proteins with Predominant Hemorrhagic and Coagulopathic Activities

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Snake venomics of the Siamese Russell's viper (Daboia russelli siamensis) - Relation to pharmacological activities

The venom proteome of Daboia russelli siamensis, a snake of medical importance in several Asian countries, was analysed by 2-D electrophoresis, subsequent MS/MS and enzymatic assays. The proteome comprises toxins from six protein families: serine proteinases, metalloproteinases, phospholipases A(2), L-amino acid oxidases, vascular endothelial growth factors and C-type lectin-like proteins. The venom toxin composition correlates with the clinical manifestation of the Russell's viper bite and explains pathological effects of the venom such as coagulopathy, oedema, hypotensive, necrotic and tissue damaging effects. The vast majority of toxins are potentially involved in coagulopathy and neurotoxic effects. The predominant venom components are proteinases capable of activating blood coagulation factors and promoting a rapid clotting of the blood, and neurotoxic phospholipase A(2)s. The analysis of the venom protein composition provides a catalogue of secreted toxins. The proteome of D. r. siamensis exhibits a lower level of toxin diversity than the proteomes of other viperid snakes. In comparison to the venoms of Vipera ammodytes ammodytes and Vipera ammodytes meridionalis, the venom from D. r. siamensis showed quantitative differences in the proteolytic, phospholipase A2, L-amino acid oxidase and alkaline phosphatase activities. (c) 2009 Published by Elsevier B.V.

Ultrasound efficiency in relation to sodium hypochlorite and filtration adsorption in microbial elimination in a water treatment plant

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Avaliação do desempenho dos reagentes do tempo de tromboplastina parcial ativada utilizados para detectar o anticoagulante lúpico

INTRODUÇÃO: O anticoagulante lúpico é uma imunoglobulina pertencente à família dos anticorpos antifosfolípides. A sua ação in vitro é interferir nos testes de coagulação dependentes de fosfolípides. O tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) é um teste utilizado como screening na pesquisa do anticoagulante lúpico. Os reagentes utilizados neste teste apresentam grandes variações quanto à sensibilidade. OBJETIVO: Avaliar o desempenho dos reagentes do TTPA e detectar a presença do anticoagulante lúpico através de diferentes testes da coagulação. MATERIAL E MÉTODO: A pesquisa do anticoagulante lúpico foi realizada em 50 amostras plasmáticas de pacientes do sexo feminino através dos testes do TTPA, do tempo de coagulação do caulim (TCC), do tempo de tromboplastina parcial ativada diluída (TTPAd) e do tempo do veneno da víbora de Russel diluído (TVVRd). Três cefalinas comerciais foram avaliadas pelos testes do TTPA e do TTPAd. Na comparação entre os reagentes estudados foi aplicado o cálculo do intervalo de confiança (95%). RESULTADOS: Os três reagentes avaliados apresentaram boa concordância e os métodos utilizados responderam bem à pesquisa do anticoagulante lúpico. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: As três cefalinas comerciais avaliadas podem ser utilizadas na rotina laboratorial para a pesquisa do anticoagulante lúpico.

Avaliação do pool de plasma caseiro como controle normal para o tempo de tromboplastina parcial ativada (TTP)

INTRODUÇÃO: A utilização correta de um plasma-controle para a comparação com o plasma do paciente nos testes de coagulação é fundamental para a garantia de um resultado seguro dessas provas laboratoriais. OBJETIVO: O presente estudo analisou a viabilidade do uso de um pool de plasma caseiro, realizado com cinco (P5) e 20 (P20) amostras a partir de pacientes normais, para ser utilizado como controle normal do tempo de tromboplastina parcial (TTP). MATERIAL E MÉTODO: Os dois pools de plasma caseiro foram analisados em relação a um controle normal comercial (AP). Foram 10 dias de experimento e a cada dia os dois pools caseiro eram feitos. Para cada dia foi feito o TTP de P5, P20 e AP. Todos os pacientes com solicitação de TTP, em cada dia do experimento, tiveram a relação de tempos (R) determinada frente a P5, P20 e AP. As ferramentas estatísticas utilizadas foram média (X), análise de variância e teste de Tukey. RESULTADOS: A análise estatística demonstrou que os valores de TTP são significativamente diferentes entre AP e P5 e entre AP e P20, mas não há diferença significativa entre P5 e P20. Quando a relação de tempos foi analisada, não houve diferença significativa entre AP, P5 e P20. CONCLUSÃO: O estudo demonstrou que pode ser utilizado como controle normal um pool de plasma caseiro, feito a partir de cinco ou 20 amostras.

Myxosporidiosis in intensively-reared Piaractus mesopotamicus: Histopathological diagnosis by means of Ziehl-Neelsen staining

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Angioarquitetura venosa do órgão genital da fêmea bovina

Investigou-se a angioarquitetura venosa da genitália de fêmeas bovinas não prenhes, para avaliar a presença de possíveis anastomoses dos vasos provenientes da região da vulva e da vagina com a veia útero-ovariana, usando-se cinco peças obtidas em abatedouros. No laboratório, um ramo da veia vaginal caudal, infundido com contraste radiográfico intravascular, foi submetido à radiografia. Observou-se que a veia vaginal forma intensa rede de anastomoses na superfície ventral do útero, entre os antímeros direito e esquerdo. As genitálias apresentaram anastomoses dos vasos vulvares e vaginais com vasos da cérvice, corpo e cornos uterinos, sugerindo que parte de um agente luteolítico administrado via intravulvosubmucosa pode ser transportado diretamente aos ovários por uma rota local, sem atingir a circulação sistêmica.

Imageamento Elétrico 3D em área contaminada por hidrocarbonetono polo industrial de Cubatão - SP

Este trabalho mostra os resultados obtidos com ensaios geofísicos realizados em uma área contaminada por hidrocarboneto no Polo Industrial de Cubatão - São Paulo, com objetivo de caracterizar as anomalias geoelétricas associadas à presença dos hidrocarbonetos, bem como delimitar e cubar tais anomalias. Para tanto, utilizou-se o método da eletrorresistividade, por meio das técnicas de Sondagem Elétrica Vertical (SEV) e Imageamento Elétrico 3D. Os resultados obtidos permitem indicar que a presença de hidrocarboneto está associada a anomalias condutivas devido aos produtos da biodegradação. As anomalias condutivas ocorrem de forma disseminada na área, totalizando um volume de 1365,3 m³; entretanto, este volume corresponde somente à presença de contaminante em fase residual.

Relevância de exames de rotina em pacientes de baixo risco submetidos a cirurgias de pequeno e médio porte

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A avaliação pré-operatória tem como objetivos diminuir a morbimortalidade do paciente cirúrgico, o custo do atendimento perioperatório e a ansiedade pré-operatória. A partir da avaliação clínica deve-se definir a necessidade de exames complementares e estratégias para reduzir o risco anestésico-cirúrgico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o benefício de exames de rotina pré-operatório de pacientes de baixo risco em cirurgias de pequeno e médio porte. MÉTODOS: Trata-se de um estudo descritivo, transversal, com 800 pacientes atendidos no consultório de avaliação pré-anestésica do Hospital Santo Antonio, Salvador, BA. Foram incluídos pacientes de 1 a 45 anos, estado físico ASA I, que seriam submetidos a cirurgias eletivas de pequeno e médio porte. Avaliaram-se alterações no hemograma, coagulograma, eletrocardiograma, RX de tórax, glicemia, função renal e dosagem de sódio e potássio e as eventuais mudanças de conduta que ocorreram decorrentes dessas alterações. RESULTADOS: Dos 800 pacientes avaliados, 97,5% fizeram hemograma, 89% coagulograma, 74,1% eletrocardiograma, 62% RX de tórax, 68% glicemia de jejum, 55,7% dosagens séricas de ureia e creatinina e 10,1% dosagens de sódio e potássio séricos. Desses 700 pacientes, 68 (9,71%) apresentaram alteração nos exames pré-operatórios de rotina e apenas 10 (14,7%) dos considerados alterados tiveram conduta pré-operatória modificada, ou seja, solicitação de novos exames, interconsulta ou adiamento do procedimento. Nenhuma das cirurgias foi suspensa. CONCLUSÃO: Observou-se que excessivos exames complementares são solicitados no pré-operatório, mesmo em pacientes jovens, de baixo risco cirúrgico, com pouca ou nenhuma interferência na conduta perioperatória. Exames aboratoriais padronizados não são bons instrumentos de screening de doenças, além de gerar gastos elevados e desnecessários.

Febre catarral maligna em bovinos do Mato Grosso do Sul e de São Paulo

São descritos a epidemiologia, os sinais clínicos, os achados de necropsia e a histopatologia de seis casos de febre catarral maligna (FCM) em bovinos de 5 fazendas localizadas nos estados de Mato Grosso do Sul e São Paulo. A doença ocorreu em bovinos de ambos os sexos e com idades variando de 4 meses a 11 anos. Os índices de morbidade variaram de 0,25% a 6.6% e a letalidade foi de 100%. A evolução clínica foi aguda (2-3 dias) em seis casos e crônica em um (3 meses). O diagnóstico presuntivo de FCM nos casos descritos neste relato foi baseado nos sinais clínicos, achados de necropsia e confirmados pela histopatologia. Os principais sinais clínicos nos casos agudos foram febre, corrimento mucopurulento pelas fossas nasais, opacidade da córnea, sialorréia, úlceras em várias superfícies mucosas e distúrbios nervosos. O bovino do caso crônico mostrou opacidade da córnea e distúrbios neurológicos. Os principais achados de necropsia incluíam hiperemia e lesões diftéricas em várias superfícies epiteliais e a histopatologia consistiu de vasculite, focos de infiltrado mononuclear multifocal em vários órgãos e necrose de superfícies epiteliais.

Conteúdos lúdicos, expressivos e artísticos na educação formal

A prática de atividades lúdicas ou o incentivo ao fluir expressivo e artístico são propostas que permeiam a Educação, desde a Antiguidade Clássica. Atualmente, a necessidade premente de atentar para a inclusão contextualizada dessas práticas, vem sendo convalidada pelas diretrizes propostas pelos Parâmetros Curriculares tanto das disciplinas de Educação Física, como da Educação Artística. Entretanto esse espaço, ainda sutil, merece enfoque mais incisivo, por meio de estudos mais aprofundados acompanhados de práticas direcionadas que convalidem sua relevância. Assim, este estudo, de natureza qualitativa, objetivou investigar se essas variáveis estão disponíveis dentro dos conteúdos disseminados pelos professores e se possuem um espaço destinado ou não dentro da Educação formal. Para tanto, foi realizado um estudo exploratório com trinta professores voluntários, de ambos os sexos, pesquisados in loco, com consentimento livre e esclarecido, das disciplinas de Educação Física e Artística, utilizando como instrumento, para a coleta de dados, um questionário com perguntas mistas. Os dados foram analisados descritivamente, indicando que é possível notar a presença do lúdico e da arte, em ambas as disciplinas; mediando os processos de aprendizagem. Além disso, que os professores utilizam amplamente desses recursos, no entanto, nem sempre, de forma consciente e contextualizada, e que, apesar da implantação dos parâmetros curriculares desde 1998, esse espaço ainda não está consolidado.