Expression and processing of recombinant sarafotoxins precursor in Pichia pastoris

Sarafotoxins are peptides isolated from the Atractaspisw snake venom. with strong constrictor effect on cardiac and smooth muscle. They are structurally and functionally related to endothelins. The sarafotoxins precursor cDNA predicts an unusual structure 'rosary-type', with 12 successive similar stretches of sarafotoxin (SRTX) and spacer, in the present work, the recombinant precursor of SRTXs was sub-cloned and expressed in the yeast Pichia pastoris. and secreted to the culture medium, Characterization by SDS-PAGE, immunoblot, mass spectrometry and biological activity, suggests that intact precursor was expressed but processing into mature toxins also occurred. Furthermore, our results indicate that the correct proportion of sarafotoxin types as contained in the precursor, is obtained in the yeast culture medium. Contractile effects of the expressed toxins, on rat and Bothrops jararaca isolated aorta, were equivalent to 5 X 10(-10) M and 5 x 10(-11) M of sarafotoxin b, respectively. The enzymes responsible for the complete maturation of sarafotoxins precursor are still unknown. Our results strongly suggest that the yeast Pichia pastoris is able to perform such a maturation process. Thus, the yeast Pichia pastoris may offer an alternative to snake venom gland to tentatively identify the molecular process responsible for SRTXs release. (C) 2001 Elsevier B.V. Ltd. All rights reserved.

Expression and purification of human respiratory syncytial virus recombinant fusion protein

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Correlation of temperature induced conformation change with optimum catalytic activity in the recombinant G/11 xylanase A from Bacillus subtilis strain 168 (1A1)

The 1.7 angstrom resolution crystal structure of recombinant family G/11 beta-1,4-xylanase (rXynA) from Bacillus subtilis 1A1 shows a jellyroll fold in which two curved P-sheets form the active-site and substrate-binding cleft. The onset of thermal denaturation of rXynA occurs at 328 K, in excellent agreement with the optimum catalytic temperature. Molecular dynamics simulations at temperatures of 298-328 K demonstrate that below the optimum temperature the thumb loop and palm domain adopt a closed conformation. However, at 328 K these two domains separate facilitating substrate access to the active-site pocket, thereby accounting for the optimum catalytic temperature of the rXynA. (c) 2005 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.

SMase II, a new sphingomyelinase D from Loxosceles laeta venom gland: Molecular cloning, expression, function and structural analysis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Comparação entre folhas sombreadas de sete clones adultos de seringueira

Nas seringueiras, o substrato para a síntese do látex provém, em curto prazo, do processo fotossintético, realizado em sua maioria por folhas dos estratos sujeitos à radiação sub-saturante. Neste estudo, foram avaliados e comparados (1) os teores de pigmentos fotossintéticos (clorofilas a, b e carotenóides totais); (2) a espessura foliolar total e dos parênquimas clorofilianos; e (3) a área e peso da matéria seca foliar de folhas sombreadas, para seis clones de seringueira selecionados pelo Instituto Agronômico de Campinas (IAC), comparativamente ao tradicional clone RRIM 600. em média, os teores de clorofila total (a+b) e de carotenóides totais foram, respectivamente, de 3,14 e 1,04 mg g-1 de peso fresco, sempre superiores ou iguais ao da testemunha. A espessura foliolar média foi de 119,62 µm e mostrou grande variação entre os clones IAC, e destes quanto à testemunha. A área foliar média, de 219,17 cm², foi quase equivalente para todos os clones. A área foliar específica foi, em média, de 198,08 cm² g-1, e neste caso, o maior valor foi observado para o IAC 56, sendo os demais, inferiores ou equivalentes ao da testemunha. Os clones IAC 302 e IAC 303 mostraram-se estatisticamente similares ao RRIM 600 para todos os caracteres analisados, e uma relação com a produtividade foi sugerida para o clone IAC 303.

Seasonal suitability of three rubber tree clones to Calacarus heveae (Acari, Eriophyidae)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Biological cycle of Tenuipalpus heveae Baker (Acari, Tenuipalpidae) on leaflets of three rubber tree clones

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Desempenho de cinco clones jovens de seringueira na região do Planalto Ocidental Paulista

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Dinâmica populacional de ácaros fitófagos (Acari, Eriophyidae, Tenuipalpidae) em seis clones de seringueira no sul do Estado de Mato Grosso

Foi estudada a dinâmica populacional de Calacarus heveae Feres, 1992, Phyllocoptruta seringueirae Feres, 1998 (Eriophyidae) e Tenuipalpus heveae Baker, 1945 (Tenuipalpidae) em seis clones de seringueira (Hevea brasiliensis Muell. Arg.), com o intuito de conhecer a sazonalidade e as possíveis diferenças nos níveis de infestação dessas espécies sobre os diferentes clones, em seringal localizado no sul do Estado de Mato Grosso. Para isso, no período de março de 2004 a março de 2005, foram realizadas coletas num intervalo médio de catorze dias em seis parcelas clonais. em cada amostragem, foram analisados 100 folíolos de cada parcela, registrando-se o número total de ácaros encontrados em ambas as faces. Os níveis de infestação das espécies variaram entre os diferentes clones. O clone RRIM 600 apresentou maior abundância de T. heveae, enquanto que PB 235 e PB 260 de P. seringueira e C. heveae, respectivamente. Por outro lado, esse último clone apresentou menor número de indivíduos de T. heveae e P. seringueirae, e PB 235 de C. heveae. O primeiro semestre foi o período crítico de infestação, porém a duração da ocorrência e o pico de abundância dos fitófagos variaram nos diferentes clones.

Desempenho de clones de seringueira da série IAC 300 selecionados para a região noroeste do Estado de São Paulo

É apresentado o desempenho de 19 novos clones de seringueira [Hevea brasiliensis (Willd. exAdr. de Juss.) Muell. Arg.], resultantes de hibridações conduzidas no Instituto Agronômico e avaliados em experimento de pequena escala, tendo o clone RRIM 600 como testemunha. O experimento em campo obedeceu ao delineamento em blocos ao acaso, com três repetições. Com relação à produção de borracha seca, o clone IAC 40 apresentou a maior média (62,22 g/árvore/sangria) nos três anos de avaliação, seguido pelo IAC 301 (57,67 g/árvore/sangria) e pelo IAC 300 (50,61 g/árvore/sangria), com produções 154%, 138% e 123% superiores em relação ao RRIM 600 (41,04 g/árvore/sangria). Todos os clones selecionados foram vigorosos, com perímetro do caule na abertura do painel variando de 37,81 cm (IAC 317) a 50,90 cm (IAC 315). A porcentagem de plantas aptas a sangria variou de 20,0% (IAC 317) a 100% (IAC 315). Todos os clones apresentaram baixas incidências de quebra pelo vento e de secamento do painel. Não foi detectada nenhuma doença foliar em caráter epidêmico. Dos clones estudados, 15 apresentaram alta resistência à antracnose do painel, e foram superiores ao RRIM 600; os outros cinco apresentaram resistência moderada semelhante ao RRIM 600.

Desempenho de clones de seringueira de origem amazônica no planalto do Estado de São Paulo

O objetivo deste trabalho foi avaliar a adaptabilidade e expressão fenotípica de caracteres superiores de dez clones amazônicos de seringueira (Hevea spp.) no planalto do Estado de São Paulo em um período de 10 anos, obedecendo ao delineamento de blocos ao acaso com três repetições e parcelas lineares de seis plantas. O clone IAN 3156 foi o mais produtivo, com média de 65,57 g de borracha seca/árvore/sangria, no período de quatro anos, seguido pelo clone RO 45 com 52,29 g de borracha seca/árvore/sangria, enquanto o clone-testemunha, RRIM 600, produziu 41,04 g/árvore/sangria. Todos os clones apresentaram crescimento vigoroso. O perímetro do caule na abertura do painel variou de 37,01 cm (IAN 3193) a 49,41 cm (IAN 4493). A porcentagem de plantas aptas à sangria variou de 30,0% (IAN 3703) a 93,75% (IAN 6323). Exceto os clones IAN 3156 e IAN 4493 com 7,00 mm e 6,32 mm, respectivamente, todos os outros clones apresentaram espessura de casca virgem inferior ao clone RRIM 600, que apresentou 6,18 mm. O clone IAN 3193 apresentou maior incidência de quebra do ponteiro pelo vento. Todos os clones estudados apresentaram baixa incidência de secamento de painel. O bom desempenho dos clones IAN 3156, RO 45, Fx 3899 e IAN 4493 permite que possam ser experimentados em larga escala, envolvendo diferentes ambientes no Estado de São Paulo.

Desempenho de clones de seringueira da série IAC 300 na região do planalto de São Paulo

O objetivo deste trabalho foi selecionar clones de seringueira (Hevea spp.) promissores para a região do planalto do Estado de São Paulo. de uma população de 70 clones, de polinização controlada, integrantes do experimento de avaliação em pequena escala, foram avaliados 16 da série IAC 300. O experimento foi instalado na Estação Experimental de Pindorama, no espaçamento de 7 x 3 m, em delineamento de blocos casualizados, com três repetições, tendo os clones RRIM 600 e GT 1 como testemunhas. Quanto à produção de borracha seca, destacaram-se oito e dez clones superiores ao RRIM 600 e GT 1, respectivamente. Todos os clones avaliados apresentaram-se vigorosos em relação ao perímetro do caule na abertura do painel. Sete deles mostraram alta resistência; sete, resistência moderada, e dois, suscetíveis à antracnose do painel. Sugere-se sua avaliação em experimentos de grande escala, para avaliar, além da produção, os demais caracteres secundários, em diferentes ambientes, para futuras recomendações em larga escala para o Estado de São Paulo.

Vigor de clones de umezeiro e pessegueiro 'Okinawa' propagados por estacas herbáceas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Seleção de clones de ameixeira para o sul do estado de Minas Gerais

Um dos sérios problemas enfrentados pelos fruticultores é o reduzido número de cultivares disponíveis regionalmente. Nesse aspecto, a produção de novos materiais genéticos é uma alternativa viável e necessária para minimizar este entrave. O objetivo deste trabalho foi selecionar diferentes clones de ameixeira visando à obtenção de plantas com alta produtividade e frutos de boa qualidade, com maturação escalonada e adaptados às condições climáticas do sul de Minas Gerais. Foram selecionadas plantas de um antigo pomar comercial, localizado no Município de Wenceslau Braz - MG. Estas plantas estavam vegetando e produzindo em condições totalmente adversas, sem quaisquer tratos culturais. Após identificação, foram coletados dados fenológicos de coloração da flor, épocas de brotação e floração. Nos frutos, foram avaliados: época de maturação (início e fim), tamanho, forma, descrição da película, descrição da polpa, ocorrência de pragas e doenças. Após um período de avaliação de dois ciclos produtivos (1996-1997 e 1997-1998), foram selecionados clones com características favoráveis, principalmente com relação às épocas de floração e maturação dos frutos e adaptação ambiental. A maturação mais precoce ocorreu na seleção VI, enquanto a colheita se prolongou mais nas seleções I, VII, VIII e XI.