Identificação de fatores celulares que interagem fisicamente com Lia1 por meio do rastreamento de duplo-híbrido

A síntese de hipusina é uma modificação pós-traducional única e essencial que ocorre somente no provável fator de início de tradução de eucariotos 5A (eIF5A). Enquanto que a enzima desoxi-hipusina sintase catalisa a formação de desoxi-hipusina no precursor de eIF5A, posterior hidroxilação deste intermediário pela enzima desoxi-hipusina hidroxilase gera a forma madura hipusinada. Apesar da essencialidade de eIF5A e hipusina no crescimento celular, a função biológica desempenhada por este fator intrigante permaneceu obscura por décadas. Recentemente, novas evidências fortaleceram o envolvimento de eIF5A na tradução, mas o seu mecanismo de ação ainda precisa ser elucidado. Com o objetivo de identificar proteínas que interagem com eIF5A que pudessem contribuir para a elucidação de sua função, foi realizado um rastreamento de duplo-híbrido através do qual um novo parceiro físico foi revelado, a proteína codificada pelo gene YJR070C, denominado LIA1 (Ligante de eIF5A) pelo nosso laboratório. Entretanto, este dado não contribuiu para a determinação do papel de eIF5A dentro da célula, pois a função exercida por Lia1 era naquele momento desconhecida. Em 2006, a clonagem de LIA1 como o gene codificador da enzima desoxi-hipusina hidroxilase culminou na completa identificação das enzimas da via de síntese de hipusina no precursor de eIF5A. No entanto, o mecanismo pelo qual eIF5A contendo desoxi-hipusina é hidroxilado não é completamente conhecido. Como o rastreamento por duplo-híbrido tem-se revelado de grande importância para a compreensão dos processos biológicos que ocorrem em uma célula, pois vem sendo amplamente empregado na elucidação da função de diferentes fatores celulares através da análise de interações proteína-proteína, o presente trabalho visou à busca de ligantes físicos de Lia1 através do emprego desta técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Determinação de adenosina deaminase, fator de necrose tumoral-alfa e interleucina-1 em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Preeclampsia is a specific disorder of pregnancy, characterized by arterial hypertension and proteinuria detected after 20 weeks of gestation. This pathology is associated with hyperuricemia, higher levels of pro-inflammatory cytokines, enhanced leukocyte activation and oxidative stress. Adenosine deaminase (ADA) is an enzyme present in all human tissues and, it is involved with the maturation of the immune system. Although its function is not fully understood, ADA is considered an indicator of cellular inflammation and, its increased serum concentration is observed in inflammatory diseases, such as tuberculosis and rheumatoid arthritis. This study aimed to assess serum ADA levels in preeclamptic patients (PE) compared with normotensive pregnant (NT) and non-pregnant women (NP), and to correlate these values with TNF-α and IL-1β production. Ninety pregnant women were included: 60 were pre-eclamptic and 30 were normotensive matched for gestational age. As control group 20 healthy non-pregnant women matched with pregnant for age were included. Peripheral blood mononuclear cells (PMMC) obtained from the three groups studied were cultured with or without lipopolysaccharide (LPS) for 18h at 37oC, and TNF-α and IL-1β production was assessed in the supernatant of cultures by enzyme immunoassay (ELISA). ADA plasmatic concentration was determined by colorimetric method. The results show that ADA plasma levels were significantly higher in PE group compared with NT and NP groups. A positive correlation between ADA and uric acid levels was detected in preeclamptic women. There was no significant difference in relation to ADA levels when PE patients were classified in early and late-onset PE. The endogenous production of IL-1β and TNF-α by PBMC was significantly higher in PE group than in NT and NP women, showing the activation state of these cells in PE. LPS induced...(Complete abstract click electronic access below)

Estudo do envolvimento da neurotransmissão colinérgica no núcleo leito da estria terminal nas respostas autônomas e neuroendócrinas desencadeadas pelo estresse por restrição agudo em ratos

Estudos têm demonstrado a ativação de neurônios no núcleo leito da estria terminal (NLET) durante situações aversivas. Além disso, foi demonstrado o envolvimento do NLET no controle das respostas cardiovasculares e neuroendócrinas durante o estresse. Evidências têm apontado que a neurotransmissão colinérgica, através de receptores muscarínicos, é um mecanismo envolvido no controle das respostas fisiológicas durante o estresse emocional em várias estruturas límbicas. No entanto, apesar de estudos indicarem o envolvimento de mecanismos colinérgicos do NLET no controle da função cardiovascular, não existem evidências na literatura acerca da participação da neurotransmissão colinérgica no NLET nas respostas fisiológicas ao estresse. Diante disso, nosso objetivo no presente estudo foi investigar o efeito do pré-tratamento bilateral do NLET com hemicolínio (inibidor do transportador de colina), metilatropina (antagonista de receptores colinérgicos muscarínicos) ou neostigmina (inibidor da enzima acetilcolinesterase) sobre as respostas autonômicas e neuroendócrinas desencadeadas pelo estresse por restrição agudo em ratos. Para tanto, seis dias antes dos experimentos os animais tiveram cânulas guias implantadas bilateralmente no NLET para administração dos fármacos. Vinte quatro horas antes dos experimentos um cateter de polietileno foi implantado na artéria femoral para registro dos parâmetros cardiovasculares. No dia do experimento, os animais foram submetidos a uma sessão aguda de 30 minutos de estresse por restrição 10 minutos após o tratamento farmacológico do NLET. Medidas de pressão arterial média (PAM), frequência cardíaca (FC), temperatura cutânea da cauda e dos níveis plasmáticos de corticosterona foram analisados antes e durante o estresse por restrição em todos os grupos experimentais. O estresse por restrição causou elevação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeitos da injeção intracerebroventricular de peróxido de hidrogênio ou de ATZ sobre a resposta pressora da angiotensina II centralmente

As espécies reativas de oxigênio podem participar de mecanismos envolvidos em respostas fisiológicas, como os efeitos hipertensores e dipsogênicos da angiotensina II (ANG II) central, que seriam pelo menos em parte devidos a produção de radical superóxido (O2 −). Por isso, uma superexpressão da enzima superóxido dismutase que reduz a disponibilidade de O2 − convertendo-o em peróxido de hidrogênio (H2O2) inibiria o efeito pressor da ANG II administrada centralmente. Porém, alguns resultados de nosso laboratório demonstram que H2O2 injetado intracerebroventricularmente (icv) reduz a ingestão de água induzida pela ANG II em ratos normotensos. Portanto, no presente trabalho propomos estudar os efeitos de injeções de H2O2 ou de ATZ (inibidor da catalase) sozinhos ou combinados no ventrículo lateral (VL) e também os efeitos do ATZ injetado intravenosamente (i.v.) sozinho ou combinado com H2O2 no VL sobre a resposta pressora da ANG II também injetada no VL em ratos normotensos, espontaneamente hipertensos (SHRs) ou em ratos com hipertensão renovascular do tipo 2 rins 1 clipe (2R1C). Foram utilizados ratos Holtzman normotensos, SHRs e ratos com hipertensão renovascular 2R1C com cânulas de aço inoxidável previamente implantadas no VL. A pressão arterial e a freqüência cardíaca foram registradas em sistema computadorizado diretamente da aorta em ratos não anestesiados por uma cânula de polietileno introduzida pela artéria femoral e a injeção i.v. foi realizada por meio de uma cânula de polietileno introduzida na veia femoral. A pressão arterial e freqüência cardíaca foram registradas continuamente desde 30 minutos antes da primeira injeção (veículo, salina, H2O2 ou ATZ) até 30 minutos após a injeção de ANG II. Os resultados demonstraram que a injeção icv de H2O2 (5 μmol/1 μL) reduziu fortemente a reposta pressora produzida pela injeção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeito protetor após sessões de exercício excêntrico: comparação entre membros superiores e inferiores

The objective of the present study was to compare in which part (lower limb or upper limb) the repeated bout effect has the greatest magnitude. Twelve males individuals with no recent (6 months) experience with resisted training participated in this study. The subjects were randomly divided into two groups (legs and arms) and came to the laboratory 5 times. 1st) adaptation to the dynamometer. 2nd) to perform one bout of eccentric exercise (EE) and provide markers such as isometric peak torque (IPT), delayed onset muscle soreness (DOMS) (both collected before and after the bout) and concentration of the creatine kinase (CK) enzyme in the blood (only before the bout). 3rd) 48 after the first bout the same markers were collected again. After 14 days, the methodologies used in the 2nd and 3rd visits to the laboratory were repeated respectively to determine the repeated bout effect. A significant decrease of IPT and a significant increase of CK and DOMS were found immediately after and 48 hours after the first bout of EE for the arms group. The legs group showed a significant increase in CK (48 hours after the EE) and DOMS (immediately after the EE) resulting from the first bout. In the arms group, the second bout did not cause significant increase in CK or DOMS on any of the situations, however, it provoked a decrease in force production immediately after the EE. The legs group showed a significant increase of DOMS immediately after the second bout of EE, which caused no significant increase in CK. The only marker in which the repeated bout effect happened for both groups was CK. No significant difference was found between the protections for both groups. Taking into account the results, it’s been discussed whether there is a relation between the susceptibility to muscle damage and the repeated bout effect, and also...(Complete abstract click electronic access below)

Desenvolvimento de kit para quantificação enzimática de etanol

A dosagem do etanol durante a produção de medicamentos, bebidas e combustíveis tem se mostrado bastante importante para o aumento de rendimento dos processos e qualidade dos produtos. Embora existam vários métodos para determinar a concentração do etanol, os enzimáticos são os mais interessantes por serem rápidos, precisos, de fácil manuseio e baixo custo. O objetivo geral desse trabalho foi a elaboração de um Kit de quantificação enzimática de etanol, utilizando a enzima álcool desidrogenase I recombinante de S. cerevisiae (Adh1). Para isso, o gene codificador da enzima álcool desidrogenase I (ADH1) de levedura foi clonado no vetor pET28a para expressão em E. coli (BL21). Em seguida, a produção e solubilidade da enzima álcool desidrogenase I foi determinada, sendo definida uma condição ideal de produção e purificação da proteína recombinante por cromatografia de afinidade. A atividade enzimática da álcool desidrogenase I purificada foi determinada através de ensaios já padronizados na literatura (UV), bem como sua estabilidade em diversas condições de tempo e temperatura. Os resultados obtidos aqui demonstraram que a enzima obtida apresentou boa atividade biológica in vitro, com sensibilidade na detecção de no mínimo 2,3 x 10–4 g/L de etanol em 2 minutos. Além disso, a proteína purificada teve sua atividade preservada quando estocada a - 20°C durante 120 dias, características que possibilitarão que a enzima álcool desidrogenase I recombinante, purificada pela metodologia apresentada nesse trabalho, seja utilizada em um kit de quantificação enzimática de etanol rápido, preciso e de baixo custo

Helibacter pylori: preaparação de Lapdesf-IUNI e ensaio de inibição de urease (IC50) de derivados de tiouréia e guanidínicos

O presente trabalho de conclusão de curso visou à otimização e preparação da síntese de Lapdesf-IUNI e avaliação do potencial de inibição de urease de três compostos previamente sintetizados, direcionados especificamente para o tratamento de infecções por Helicobacter pylori, bactéria mundialmente reconhecida como uma das principais causadoras de infecções no mundo, responsável pelos casos de infecções gástricas, como gastrites crônicas, úlceras (gástricas e duodenais) e carcinomas. Lapdesf-IUNI é um composto derivado de metronidazol, com atividade potencialmente inibidora de urease, enzima presente neste microrganismo e essencial a sua sobrevivência no ambiente gástrico. O produto foi obtido, porém com baixo rendimento, por isso sua metodologia ainda necessita ser aperfeiçoada, para que, em seguida este composto possa ser testado. Outros três compostos, um derivado de tiouréia e dois derivados guanidínicos, com potencial atividade inibidora de urease, T-6, R-17 e R-21, sintetizados pela equipe do Prof. Eduardo Perez, foram avaliados com relação a sua atividade inibidora frente à enzima urease e IC50, apresentando bons resultados, que permitem a continuidade dos estudos, comparando inclusive com fármacos utilizados nos protocolos de tratamento padrões para o tratamento das infecções causadas por H. pylori

Dextrana: revisão sobre uso e possíveis aplicações industriais

O emprego significativo de polímeros na sociedade moderna causou um grande desenvolvimento tecnológico em torno de sua produção a partir do petróleo. Contudo a limitação crescente de disponibilidade e as altas sucessivas do preço do petróleo têm estimulado, cada vez mais, novas pesquisas no desenvolvimento de biopolímeros provenientes de recursos renováveis. O biopolímero dextrana tem origem da conversão do substrato promovida pela enzima dextranasacarase que é secretada por micro-organismos principalmente pertencentes à família Lactobacillaceae. O objetivo desta pesquisa tem por meio do levantamento bibliográfico reunir conteúdos relacionados ao biopolímero dextrana, a enzima dextranasacarase, os micro-organismos produtores e suas aplicações industriais. Devido a algumas características da dextrana (Hidrofobicidade, estabilidade, pureza e habilidade de formar soluções claras e estáveis, entre outras), a mesma apresenta um grande leque de aplicações na indústria farmacêutica, alimentícia, petroquímica e química. As pesquisas que vinculam a dextrana às aplicações industriais estão em plena expansão e sabendo que a produção de dextrana é proveniente de recursos naturais renováveis e de origem microbiana, o momento atual é favorável para um aumento de sua produção, causando a valorização deste biopolímero no mercado nacional e internacional

Análise de metilação do gene FOXE1 em carcinoma de células escamosas em cães: padronização metodológica

It is believed that epigenetic mechanisms such as DNA methylation are important for the tumorigenesis and maintenance of the altered state of tumor cells. DNA methylation occurs by the addition of a methyl group to carbon 5 of cytosine, catalyzed by the enzyme DNA methyl-transferase, which can change the expression of a gene, including the tumor suppressor genes. In human squamous cell carcinoma, several features have shown the etiological role of genes in tumor development. Among them, FOXE1 gene (forkhead box E1 - thyroid transcription factor) is presented with an important role in susceptibility to disease. Similarly the FOXE1 methylation pattern could alter the expression of this gene in dogs and predisposed to tumor on. Therefore, this study aims to investigate in dogs, the validity of the strategy employed in humans to analyze the FOXE1 methylation status. DNA extraction from fresh frozen tumoral samples was performed by Wizard Genomic® DNA Purification Kit. The methylation status was determined by MSP-PCR (methylation-specific polymerase chain reaction), using 2.0 ng of DNA treated with sodium bisulphate. One hundred micrograms of bisulphite-modified DNA was amplified using primers specific for either methylated or unmethylated DNA (primers sequences are available at http://pathology2.jhu.edu/pancreas/primer.pdf). The analysis of fragments was loaded on to 7% polyacrylamide gels and silver nitrate staining. In this stage of technical approach, 60% were FOXE1 hypermethylated. In conclusion, it was observed that the standard technique for assessing the methylation pattern of gene FOXE1 in humans can be used for the same evaluation in dogs. The correlation of these molecular data with clinical and histopathological parameters may have diagnostic and prognostic value and still be used as a tumor marker for therapeutic decision and surgical approach

Caracterização dos receptores opióides do núcleo parabraquial lateral envolvidos no controle da ingestão de água e sódio

Nosso organismo constantemente perde água e eletrólitos para o meio ambiente, principalmente pela excreção urinária.Porém, a osmolaridade e o volume de líquidos do organismo devem permanecer dentro de uma pequena faixa de variação para que nossas células funcionem perfeitamente e haja manutenção da pressão arterial. A regulação da osmolaridade e do volume dos líquidos corporais exige que a entrada de água e eletrólitos seja igual à perda pelo corpo e, para tanto, a regulação envolve a ação integrada dos rins e do comportamento de ingestão de água e sódio que é o principal íon extracelular. A ingestão de água e sódio é regulada por mecanismos centrais excitatórios e inibitórios. Os mecanismos excitatórios que desencadeiam a ingestão de água e sódio são ativados principalmente pelo peptídeo angiotensina II (ANG II), cuja produção apresenta-se aumentada em situações de hipovolemia e hipotensão. Por outro lado, destacam-se importantes mecanismos inibitórios da ingestão de água e sódio descobertos recentemente no núcleo parabraquial lateral (NPBL). O NPBL é uma estrutura pontina que recebe projeções aferentes da área postrema (AP) e da porção medial do núcleo do trato solitário (NTSm) e que faz conexões com áreas prosencefálicas envolvidas no controle do balanço hidroeletrolítico. Estudos prévios mostraram que injeções bilaterais do agonista opióide inespecífico β-endorfina no NPBL induziram ingestão de água e sódio em ratos saciados e aumentaram a ingestão de água e sódio induzida pelo tratamento com o diurético furosemida (FURO) combinado com baixas doses do bloqueador da enzima conversora de angiotensina captopril (CAP) injetados subcutaneamente (sc)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Interação entre a Angiotensina II, Angiotensina-(1-7) e ECA2 em mulheres

A hipertensão arterial sistêmica é uma doença crônica degenerativa de etiologia multifatorial e poligênica, caracterizada pela presença de níveis tensionais elevados, sendo considerada um dos mais importantes fatores de risco para o desenvolvimento das doenças cardiovasculares. Estudos demonstram que cerca de um bilhão de indivíduos apresentam HAS em todo mundo, sendo esta patologia responsável por 7,1 milhões de morte a cada ano. Diversos fatores estão associados ao aumento da incidência da hipertensão arterial, como obesidade, dislipidemias, dieta rica em sal, alterações nos níveis hormonais e sedentarismo. Após o período da menopausa, observa-se significativa elevação nos valores de pressão arterial dessa população, sendo estes similares ou até maiores aos dos homens para esse mesmo período. O sistema renina-angiotensina (SRAA) desempenha importante papel no controle dos sistemas cardiovascular e renal e a angiotensina II é um potente vasoconstritor desse sistema, formado a partir da ação da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA). Por outro lado, a recente descoberta da Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA2), um homólogo da ECA, mudou todo o conceito do SRAA. A ECA 2 é responsável pela formação do peptídeo angiotensina- (1-7) a partir da clivagem do último aminoácido (fenilalanina) da angiotensina II. Recentes evidências têm demonstrado efeitos benéficos da angiotensina-(1-7) para as doenças cardiovasculares através da vasodilatação, efeito anti-arritmogênico, melhora na função contrátil pós-isquemia e inibição da proliferação celular do músculo liso vascular, sendo esses efeitos antagônicos àqueles observados pela angiotensina II. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi analisar a atividade da ECA2, concentrações plasmáticas...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Retroviroses em felinos domésticos

The retrovirus are recognized as pathogenic group of virus for domestic animals. The particularitities of these viruses are the necessity of the enzyme transcriptase reversa, for the conversion of the viral RNA in viral DNA (provirus) and the incorporation in the DNA of the cell, what it confers to the infection the lifetime character, due to all the infected cells present the provirus our DNA. Among the retroviruses in domestic felines, the leukaemia and immunossupressive virus represent the more important diseases. The main form of transmission of the virus of the FeLV is occur by close contact and the saliva presents high viral concentration. For the FIV, the main form of transmission is represented by wounds of bite. The retrovírus, replicate mainly in high metabolization cells. The infection for FeLV cause mieloproliferativas and degenerative illnesses, while the FIV are related imunossupressora illness. The treatment for these retroviroses is symptomatic associated to imunomodulatory drugs, none of these drugs are capable to eliminate the virus. For the prevention of these retrovirus are used vaccines. However only the vaccine against FeLV have showed efficiency. Thus , the more important measures in control of these diseases is prevent the contact between infected and health felines. The ain of present study was reviewed the more important aspects of retroviruses in domestic felines, with emphasis to virulence properties, epidemiology, fisiopathogeny, clinical manifestations, methods of diagnosis, therapy, and control measures

Susceptibilidade ao estresse e qualidade de carne de suínos suplementados com diferentes níveis de Ractopamina

The ractopamine is a β-adrenergic agonist used as a divider of energy in diets for finishing pigs. However, research shows that this additive may effect on welfare and meat quality. In this context, the aim was to evaluate the influence in three levels of inclusion of ractopamine (0, 5 and 10ppm) in commercial pigs diet (castrated, males and females, n = 340) for 28 days pre-slaughter on the welfare and meat quality. The wellbeing was assessed by the behavior of animals, number of skin damages, carcass damages and physiological stress (lactate, cortisol and creatinine phosphokinase). The evaluation of meat quality was performed by analyzing pH, color, drip and cooking loss, shear force and marbling of the longissimus dorsi muscle of 90 selected pigs. There was no influence of treatments on the behavior, the total number of skin damages and carcass damages or concentration of cortisol and lactate. However, levels of the enzyme creatine phosphokinase (CPK) increased in pigs supplemented with ractopamine. This shows that, somehow, this additive led to physiological changes in animals that consumed it. PH and drip loss did not change by the addition of ractopamine in the diet. In contrast, the Longissimus dorsi of pigs that received ractopamine presented less intense red color and no difference was found in L* and b*. The inclusion of ractopamine in the diet reduced the degree of marbling, cooking loss and tenderness of the muscle. Supplementation did not lead to behavioral change, increased incidence of injury, plasma cortisol and lactate and minimal impact on meat quality. However, there was evidence that the animals fed the additive suffered physiological changes

Dextrana: produção e aplicação industrial

Atualmente há considerável interesse em polissacarídeos obtidos pela ação de microrganismos. Estes polissacarídeos, conhecidos como biopolímeros, são obtidos por processos fermentativos. Possuem capacidade de formar soluções viscosas e géis em meio aquoso, mesmo quando aplicados em baixas concentrações (MOREIRA, et al., 2003). A dextrana se caracteriza por ser um dos biopolímeros mais comercializados em escala industrial, representando uma fatia significativa desse mercado de polissacarídeos microbianos. A reação de síntese desse biopolímero é catalisada pela enzima dextranasacarase, a qual converte a sacarose em frutose e dextrana. Essa enzima, por sua vez, é produzida extracelularmente por diversas espécies do gênero Leuconostoc, Lactobacillus e Streptococcus. (MONCHOIS, WILLEMOT et. al, 1999). 47 Os biopolímeros microbianos podem ser produzidos pelo processo convencional cultivando o microrganismo em meio líquido com substrato, em condições ideais de temperatura, rotação e pH. Outro tipo de produção em meio líquido é por via enzimática, ou seja, utilizando enzimas purificadas . As enzimas são primeiramente produzidas e purificadas e depois utilizadas para síntese do polímero em meio contendo substrato. O processo via enzimática é o utilizado na produção de dextrana, uma vez que este apresenta um rendimento ótimo e um potencial econômico enorme.(MOREIRA, et al. 2003). ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Estudo da produção e caracterização de queratinase produzida por Bacillus sp. LM-21 isolado de águas residuárias de abatedouro de frangos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)