Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

INTRODUÇÃO: Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação. OBJETIVO: Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR). RESULTADOS: Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3% das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7% para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3% das amostras. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular.

Fontes de minerais orgânicos e inorgânicos para leitões desmamados

A presente pesquisa foi realizada com o objetivo de comparar os efeitos de fontes orgânicas e inorgânicas de microminerais sobre o desempenho, os parâmetros sanguíneos e a deposição de minerais em tecidos e órgãos de leitões desmamados. Foram utilizados 54 leitões de genética comercial, desmamados com idade média de 24 dias e peso médio de 7,35±0,88kg, num delineamento experimental de blocos ao acaso, com dois tratamentos, nove repetições e três animais por parcela. Os tratamentos foram representados pelo uso de rações suplementadas com minerais de fontes orgânicas ou inorgânicas (Cu, Zn, Fe, Mn e Se) no período dos 24 aos 57 dias de idade. Foram avaliados o consumo diário de ração, o ganho diário de peso, a conversão alimentar, os parâmetros hematológicos e a deposição de minerais em tecidos e órgãos. As fontes orgânicas de minerais nas rações fornecidas dos 24 aos 57 dias de idade melhoraram o ganho diário de peso (P=0,06) e a conversão alimentar (P=0,05) e aumentaram o número de hemáceas (P=0,10), contudo não influenciaram a deposição de minerais no músculo masseter, fígado, coração, baço e rim. Portanto, o suplemento de minerais de fontes orgânicas foi mais eficiente para o desempenho dos leitões na fase de creche.

CORRELATING THE CURVE DISTANCE BETWEEN THE DISTAL of THE CANINES TO THE COMBINED WIDTH of THE SIX ANTERIOR TEETH WHEN SELECTING DENTURE TEETH FOR DIFFERENT ETHNIC GROUPS

Statement of problem. To select the width of denture teeth, the distance between the marks indicating the location of the canines is usually measured around the curvature of the wax occlusal rim; however, most manufacturers' mold charts provide the measurements of the artificial 6 anterior teeth as if they were on a straight line.Purpose. The purpose of this study was to investigate whether the curve distance between the distal surfaces of the maxillary canines can be related to the combined width (straight measurement) of the 6 anterior teeth in 4 ethnic groups.Material and methods. Maxillary stone casts were obtained for 160 dentate subjects of 4 ethnic groups (40 whites, 40 blacks, 40 multiracial - descendants of white and black parents, and 40 Asians). The width of each maxillary anterior tooth was measured on the casts with sliding calipers. The combined width of the 6 anterior teeth (CW) corresponded to the sum of the width of each anterior tooth. The curve distance between the distal surfaces of the canines (CD) was measured by using dental tape and sliding calipers. The Pearson correlation coefficient and regression analysis were used to evaluate the relationship between CD and CW in each ethnic group (alpha=.05).Results. The mean CD and CW values (in mm) obtained were: whites (CD=52.12; CW=45.65); blacks (CD=56.10; CW=48.13); multiracial (CD=53.58; CW=46.54); and Asians (CD=53.29; CW=46.60). Significant (P<.001) correlations between CD and CW measurements were observed for all ethnic groups studied (whites, r=0.957; blacks, r=0.803; multiracial, r=0.917; and Asians, r=0.881). The following linear regression equations were obtained: whites [CD=1.1(CW)+0.3]; blacks [CD=0.95(CW)+9.3]; multiracial [CD=1.2(CW)-1.1]; and Asians [CD=1.0(CW)+5].Conclusions. The curve distance between the distal surfaces of the maxillary canines can be accurately related to the combined width of the 6 anterior teeth in the selection of denture teeth for the studied ethnic groups. (J Prosthet Dent 2012;107:400-404)

Effect of dentin conditioning time on nanoleakage

Objectives: To study the nanoleakage pattern in the dentin hybrid layer by using different dentin adhesives. The null hypotheses tested in this study were: 1) dentin conditioning time does not affect nanoleakage within the hybrid layer; 2) the type of dentin adhesive used does not affect nanoleakage. Methods: Standardized Class V cavities were prepared in 30 intact human molars on the buccal and lingual surfaces. The specimens were randomly assigned to 2 total-etch dentin adhesives (OptiBond SOLO Plus [OPS, Kerr] and One-Step [ONS, BISCO Inc]) and 2 self-etch dentin adhesives (Clearfil SE Bond [CSE, Kuraray] and Adper Prompt L-Pop [APL, 3M ESPE]). The specimens were etched or conditioned for 15 seconds, 30 seconds or 60 seconds. Upon restoration of the Class V cavities with the proprietary resin composite, the specimens were isolated with nail polish except for a 2.0-mm rim around the restoration, and they were immersed in 50 wt% ammoniacal silver nitrate solution (pH=9.5) for 24 hours followed by 8 hours of immersion in photo-developing solution to reduce the silver ions to metallic silver. The specimens were fixed, dehydrated and processed for FESEM and TEM. Silver penetration was measured along the cervical wall, and data were analyzed with Kruskal-Wallis non-parametric tests at a significance level of 95%. Results: There were no statistically significant differences among the experimental groups for the factor conditioning time (p>0.926). There were significant differences for the variable dentin adhesive (p<0.0001). The least amount of nanoleakage within the hybrid layer occurred with CSE, while ONS resulted in the greatest penetration of silver ions. The adhesives OPS and APL ranked in the intermediary subset. Under TEM, all adhesives resulted in some degree of nanoleakage within the hybrid layer. Both spotted/reticular and water-tree nanoleakage patterns were observed. Significance: Longer conditioning times did not increase nanoleakage within the hybrid layer. Nanoleakage varied with the type of adhesive used.

The Tomato (Solanum Lycopersicum cv. Micro-Tom) Natural Genetic Variation Rg1 and the DELLA Mutant Procera Control the Competence Necessary to Form Adventitious Roots and Shoots

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influence of tetracycline in the hepatic and renal development of rat's offspring

O objetivo deste estudo foi avaliar os possíveis efeitos da tetraciclina administrada a ratas, no décimo dia de gestação, no desenvolvimento hepático e renal de seus filhotes. O fígado mostrou vacuolização, necrose, inflamação e dilatação sinusoidal mais evidente em recém-nascidos. Mitoses, aumento precoce da população de células de Kupffer e hipertrofia de hepatócitos com maior síntese de glicogênio estavam presentes no décimo e vigésimo dias de vida. O rim mostrou vacuolização tubular e necrose discretas, mais evidentes nos recém-nascidos, assim como sinais de regeneração tubular no décimo e vigésimo dias. Esses resultados sugeriram que os órgãos estudados sofreram alterações morfológicas transitórias durante o desenvolvimento, mas apresentaram sinais de regeneração ao longo dos primeiros dias de vida.

Size distributions of fine silicate and other particles in Masaya's volcanic plume

Direct-sampling and remote-sensing measurements were made at the crater rim of Masaya volcano (Nicaragua) to sample the aerosol plume emanating from the active vent. We report the first measurements of the size distribution of fine silicate particles (d <10 mu m) in Masaya's plume, by automated scanning electron microscopy (QEMSCAN) analysis of a particle filter. The particle size distribution was approximately lognormal with modal d similar to 1.15 mu m. The majority of these particles were found to be spherical. These particles are interpreted to be droplets of quenched magma produced by a spattering process. Compositional analyses confirm earlier reports that the fine silicate particles show a range of compositions between that of the degassing magma and nearly pure silica and that the extent of compositional variability decreases with increasing particle size. These results indicate that fine silicate particles are altered owing to reactions with acidic droplets in the plume. The emission flux of fine silicate particles was estimated as similar to 10(11) s(-1), equivalent to similar to 55 kg d(-1). Sun photometry, aerosol spectrometry, and thermal precipitation were used to determine the overall particle size distribution of the plume (0.01 < d(mu m) < 10). Sun photometry and aerosol spectrometry measurements indicate the presence of a large number of particles (assumed to be aqueous) with d similar to 1 mu m. Aerosol spectrometry measurements further show an increase in particle size as the nighttime approached. The emission flux of particles from Masaya was estimated as similar to 10(17) s(-1), equivalent to similar to 5.5 Mg d(-1) where d < 4 mu m.

Avaliação ultra-sonográfica do sistema urinário, figado e útero do macaco-prego, Cebus apella

O macaco-prego, Cebus apella, é muito difundido no norte e sul da Amazônia Legal Brasileira e no Cerrado. Estes animais encontram-se rotineiramente submetidos à caça predatória, aumentando assim a necessidade de preservação desta espécie silvestre. Realizou-se um estudo ultra-sonográfico de 10 macacos-prego como forma de descrever a anatomia ultra-sonográfica normal de sua cavidade abdominal. A vesícula urinária apresentou parede com espessura média 0,2cm e em posição anatômica cuja topografia permitiu contato com as paredes do corpo do útero e cólon descendente. À varredura abdominal caudal foi visualizada a aorta, veia cava caudal e veia ilíaca direita. O fígado foi visto em varredura sagital e transversal, possibilitando a observação da vesícula biliar e vasos hepáticos. A varredura renal demonstrou com precisão a pelve, seio renal e relação cortico-medular. O comprimento médio de ambos os rins foi de 6,24±0,31cm, não existindo diferença estatística entre o rim direito e esquerdo (Teste t de Student e ANOVA). O volume renal foi 2,37±0,18cm³. Os coeficientes de Correlação de Pearson entre os comprimentos renais direito e esquerdo e entre volumes renais direito e esquerdo foram dispostos como r = 0,74 e 0,51. As espessuras médias para a região cortical e medular foram 0,75±0,11cm e 0,39±0,06cm, respectivamente. O coeficiente de correlação para a relação cortico-medular entre os rins direito e esquerdo foi de r = 0,19. O exame ultrasonográfico mostrou-se como uma técnica eficiente, nãoinvasiva, rápida e reprodutível, que provê dados importantes aos profissionais da área de clínica e cirurgia de animais silvestres.

Myxosporidiosis in intensively-reared Piaractus mesopotamicus: Histopathological diagnosis by means of Ziehl-Neelsen staining

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos cardiovasculares e renais da injeção intra-arterial de contraste radiológico iônico em cães com restrição hídrica

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: O objetivo desta pesquisa foi estudar os efeitos agudos do contraste radiológico em situações de restrição de volume, avaliando-se os efeitos renais e cardiovasculares após a injeção intra-arterial de contraste radiológico de alta osmolaridade. MÉTODO: Participaram do estudo 16 cães anestesiados com tiopental sódico (15 mg.kg-1) e fentanil (15 µg.kg-1) em bolus, seguido de infusão contínua nas doses de 40 µg.kg-1.min-1 (tiopental sódico) e 0,1 µg.kg-1.min-1 (fentanil). Foi feita hidratação com solução de glicose a 5% (0,03 mL.kg-1.min-1) e a ventilação pulmonar foi controlada mecanicamente com ar comprimido. Foram verificados os seguintes atributos: freqüência cardíaca (FC); pressão arterial média (PAM); pressão da veia cava inferior (PVI); débito cardíaco (DC); hematócrito (Ht); fluxo plasmático efetivo renal (FPER); fluxo sangüíneo renal (FSR); ritmo de filtração glomerular (RFG); fração de filtração; resistência vascular renal (RVR); volume urinário (VU); osmolaridade plasmática e urinária; depuração osmolar, depuração de água livre e depuração de sódio e de potássio; sódio e potássio plasmáticos; excreção urinária e fracionária de sódio e potássio e temperatura retal. Estes atributos foram avaliados em quatro momentos: 30 (M1), 60 (M2), 90 (M3) e 120 (M4) minutos após o início da infusão de para-aminohipurato de sódio e creatinina (início da experiência). No momento 2, no grupo G1 foi feita injeção intra-arterial de solução fisiológica a 0,9% (1,24 mL.kg-1), e no grupo G2 foi injetado contraste radiológico (1,24 mL.kg-1) pela mesma via. RESULTADOS: O grupo G1 apresentou aumento da FC, do FPER, do FSR, da osmolaridade plasmática, da depuração de sódio e da excreção urinária de sódio; apresentou ainda diminuição da osmolaridade urinária, do potássio plasmático, da depuração de potássio e da temperatura retal. No grupo G2 ocorreu aumento da FC, da RVR, do VU, da depuração osmolar, da depuração de sódio e da excreção urinária e fracionária de sódio; ocorreu também redução do (a): hematócrito, ritmo de filtração glomerular, fração de filtração, osmolaridade urinária, depuração de água livre, sódio e potássio urinários, potássio plasmático e temperatura retal. CONCLUSÕES: Neste estudo, conclui-se que a injeção intra-arterial do contraste radiológico causou efeito bifásico na função renal. Inicialmente, provocou aumento da diurese e da excreção de sódio, mas, posteriormente, houve piora das condições hemodinâmicas e, conseqüentemente, da função renal, com aumento da resistência vascular renal e diminuição do ritmo de filtração glomerular.

Renal function and histology after acute hemorrhage in rats under dexmedetomidine action

OBJETIVO: Cerca de 50% de indicações de diálise em insuficiência renal aguda vêm de problemas do perioperatório. Alterações na hemodinâmica intra-operatória levam a vasoconstrição renal e hipoperfusão. Estudos prévios não definiram o papel renal da dexmedetomidina em hemorragia. Foram estudados os efeitos da dexmedetomidina na função e histologia renais, em ratos, após hemorragia aguda. MÉTODOS: Estudo encoberto com 20 ratos Wistar, anestesiados com pentobarbital sódico intraperitoneal, 50 mg. kg-1, divididos aleatoriamente em 2 grupos sob sangramento de 30% da volemia: GD - dexmedetomidina iv, 3 µg. kg-1 (10 min), e infusão contínua, 3 µg. kg-1. h-1; GC - pentobarbital. Para estimar depuração renal, administraram-se para-aminohipurato e iotalamato de sódio. Atributos estudados: freqüência cardíaca, pressão arterial média, temperatura retal, hematócrito, depuração de para-aminohipurato e iotalamato, fração de filtração, fluxo sangüíneo renal, resistência vascular renal, análise histológica dos rins. RESULTADOS: em GD, houve valores menores de freqüência cardíaca, pressão arterial média e resistência vascular, mas valores maiores de depuração de iotalamato e fração de filtração. A depuração de para-aminohipurato e o fluxo sangüíneo foram similares nos grupos. As alterações histológicas foram compatíveis com isquemia e houve maior dilatação tubular em GD. CONCLUSÃO: em ratos, após hemorragia aguda, a dexmedetomidina determinou melhor função renal, porém maior dilatação tubular.

Dexmedetomidine and S(+)-ketamine in ischemia and reperfusion injury in the rat kidney

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Cirurgia das fraturas do seio frontal: estudo epidemiológico e análise de técnicas

O trauma do seio frontal não é raro, correspondendo a 8% das fraturas faciais. Pode afetar a lâmina anterior e/ou posterior, com ou sem envolvimento do ducto nasofrontal. Tem alto potencial para complicações e seu manejo ainda é controvertido em algumas situações. OBJETIVO: Apresentar a epidemiologia, o diagnóstico e tratamento clínico e cirúrgico de 24 pacientes com fratura do seio frontal. MATERIAL E MÉTODOS: Estudo retrospectivo, não randomizado, de 24 pacientes com fratura de seio frontal operados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, São Paulo, Brasil. RESULTADOS: Dos 24 pacientes, 16 tinham fraturas da lâmina externa e 8, da lâmina interna e externa. em 2 casos havia lesão do ducto nasofrontal. Vinte (83,4%) pacientes tiveram fraturas faciais associadas e em 13 (54,2%) foram observadas complicações intracranianas. A incisão em asa de borboleta, abaixo da sobrancelha, foi empregada na maioria dos casos cirúrgicos com bom resultado estético. Fixação dos fragmentos ósseos com diferentes materiais (fio de aço, mononylon, miniplacas de titânio) e, se necessário, reconstrução da tábua anterior com material aloplástico ou osso parietal. CONCLUSÃO: A causa principal das fraturas do seio frontal é acidente com veículos. O tratamento depende de sua complexidade, pois comumente há lesões cranioencefálicas associadas. As técnicas cirúrgicas utilizadas são as incisões, retalho bicoronal ou na sobrancelha, infra-orbital (em asa de borboleta), associadas à cirurgia endoscópica em casos de infecção fístula liquórica e complicações orbitárias.

Morfologia de ovos de Triatoma circummaculata e Triatoma rubrovaria (Hemiptera, Reduviidae)

OBJETIVO: Estudar morfologicamente ovos de T. circummaculata e T. rubrovaria. MÉTODOS: Quarenta ovos das duas espécies foram mensurados por meio de projetor de perfil Nikon modelo 6C, e utilizado o teste Student, para execução da análise estatística. As observações morfológicas foram feitas em microscópio eletrônico de varredura JEOL, modelo JSM-T330A. RESULTADOS/CONCLUSÕES: A análise estatística revelou que os ovos e as cascas de ovos de T. rubrovaria são significativamente maiores que os de T. circummaculata. Observações microscópicas mostraram que a borda corial, assim como a goteira espermática, são bem mais evidentes nos ovos de T. rubrovaria que nos de T. circummaculata. O exocório das duas espécies é formado por áreas poligonais, que são hexagonais em sua maioria. Foram observados também o momento da eclosão do embrião e os detalhes das exúvias embrionárias.

Amastigotes forms of Trypanosoma cruzi detected in a renal allograft

Detecção de formas amastigotas do Trypanosoma cruziem enxerto renalA doença de Chagas é zoonose transmitida pelo Trypanosoma cruzi, o qual apresenta duas formas distintas no hospedeiro vertebrado, a tripomastigota circulante e a amastigota tecidual. Esta última parasita freqüentemente os tecidos musculares cardíaco, liso e estriado, e o tecido nervoso. Até o presente momento nunca foram detectados formas amastigotas em parênquima renal. O presente relato descreve, pela primeira vez, a detecção de formas amastigotas do T. cruzi em parênquima renal em receptor de enxerto de rim, com testes sorológicos negativos para a doença de Chagas e ausência de transfusões prévias, observado 1 mês após o transplante renal com doador cadáver proveniente de região endêmica. O paciente desenvolveu doença de Chagas aguda com detecção de formas tripomastigotas circulantes. Como a única forma de transmissão desta zoonose pelo enxerto é através de órgão parasitado com formas amastigotas, sugere-se fortemente que o rim transplantado foi o responsável pela transmissão da doença de Chagas, no presente caso. Esta é a via de infecção que deve ser levada em consideração em transplantes nas áreas endêmicas