Minimal volume regulation after shrinkage of red blood cells from five species of reptiles

Red blood cells (RBCs) from most vertebrates restore volume upon hypertonic shrinkage and the mechanisms underlying this regulatory volume increase (RVI) have been studied extensively in these cells. Despite the phylogenetically interesting position of reptiles, very little is known about their red cell function. The present study demonstrates that oxygenated RBCs in all major groups of reptiles exhibit no or a very reduced RVI upon -25% calculated hyperosmotic shrinkage. Thus, RBCs from the snakes Crotalus durissus and Python regius, the turtle Trachemys scripta and the alligator Alligator mississippiensis showed no statistically significant RVI within 120 min after shrinkage, while the lizard Tupinambis merianae showed 22% volume recovery after 120 min. Amiloride (10(-4) M) and bumetanide (10(-5) M) had no effect on the RVI in T merianae, indicating no involvement of the Na(+)/H(+) exchanger (NHE) or the Na(+)/K(+)/2Cl(-) co-transporter (NKCC) or insentive transporters. Deoxygenation of RBCs from A. mississippiensis and T merianae did not significantly affect RVI upon shrinkage. Deoxygenation per se of red blood cells from T merianae elicited a slow volume increase, but the mechanism was not characterized. It seems, therefore, that the RVI response based on NHE activation was lost among the early sauropsids that gave rise to modern reptiles and birds, while it was retained in mammals. An RVI response has then reappeared in birds, but based on activation of the NKCC. Alternatively, the absence of the RVI response may represent the most ancient condition, and could have evolved several times within vertebrates. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Cryopreservation of semen from functional sex-reversed genotypic females of the rainbow trout, Oncorhynchus mykiss

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Efeito da centrifugação sobre a qualidade do sêmen canino

Avaliou-se o efeito da centrifugação sobre a viabilidade do sêmen canino e compararam-se três meios de diluição pré-centrifugação. Utilizaram-se 10 ejaculados completos de 10 cães que, após a avaliação inicial, foram divididos em quatro porções (grupos). Uma das amostras, não centrifugada, formou o grupo-controle; as outras foram diluídas em três diferentes meios e centrifugadas a 800 x g por 15 minutos, formando os grupos: CPSA - constituído por sêmen centrifugado em plasma seminal autólogo; CLG - sêmen centrifugado em meio à base de leite desnatado e glicose (LG); e CPer- sêmen centrifugado em gradientes de Percoll (45% e 90%). Após a centrifugação e a eliminação do sobrenadante, procedeu-se à ressuspensão de todas as porções do ejaculado em LG e à imediata avaliação quanto à motilidade, vigor, aglutinação espermática e integridade das membranas espermáticas. Todas as suspensões foram, então, incubadas a 37ºC por 30 minutos e reavaliadas. O processo de centrifugação não causou danos aos espermatozoides e a centrifugação em meio LG melhorou a viabilidade espermática.

Efeito da utilização de diferentes diluidores para a produção in vitro de embriões bovinos

Objetivou-se avaliar as características morfológica e funcional do sêmen bovino congelado comparando-se a eficácia de dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). No experimento I, cinco palhetas dos diluidores A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termor-resistência lento. Foram feitas, ainda, avaliação da integridade de membranas, por meio da associação das sondas iodeto de propídio, isotiocionato de fluoresceína - Pisum sativum e carbocianina catiônica lipofílica, e avaliação funcional da membrana plasmática com teste hiposmótico. A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina. No experimento II, o sêmen com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro, sendo observadas taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. em relação aos resultados obtidos, apenas a porcentagem de espermatozoides no sêmen congelado foi discretamente maior com o diluidor A, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina de soja pode substituir o composto por Tris e gema de ovo, respeitando-se as variações individuais de cada touro utilizado no presente experimento.

Efeito da idade sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen diluído, resfriado a 14ºC e transportado

Para estudar o efeito da idade sobre características ovulatórias e de fertilidade, 147 ciclos estrais de 99 éguas foram agrupados em classes por idade (1 - 3-6 anos; 2 - 7-10 anos; 3 - 11-14 anos; e 4 - 15-19 anos), de acordo com o ano do nascimento. As éguas foram inseminadas com sêmen diluído, resfriado e transportado de apenas um garanhão, três vezes por semana (segundas, quartas e sextas-feiras).O controle folicular, por meio da palpação retal, e a rufiação foram realizados diariamente, durante todo o período experimental. Utilizou-se, para o transporte, o sêmen diluído no diluidor de leite desnatado-glicose no conteiner Celle modificado, sendo a dose inseminante de 400 x 10(6) espermatozóides móveis, no momento da diluição final, pré-resfriamento. O tempo médio da coleta do sêmen à inseminação artificial foi de 3,5 horas e a temperatura final do sêmen, no momento da inseminação, de 14ºC. Não houve influência da idade sobre a velocidade de crescimento folicular e o tamanho do folículo ovulatório. A fertilidade decaiu após os 15 anos de idade, traduzida pela diminuição da taxa de concepção/ciclo e eficiência de prenhez, entretanto, não foram observadas características indicativas de senescência até os 19 anos de idade.

Efeito do número de inseminações artificiais sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen diluído, resfriado a 14ºC e transportado

Estudou-se o efeito do número de inseminações sobre a fertilidade de éguas inseminadas, três vezes/semana (segundas, quartas e sextas-feiras), com sêmen diluído, resfriado e transportado, de apenas um garanhão. As éguas foram inseminadas a partir da detecção, pela palpação retal, de um folículo de 3,0 a 3,5 cm de diâmetro, em um dos ovários, até a ovulação. Utilizaram-se para o transporte o sêmen diluído no diluidor leite desnatado-glicose e o conteiner Celle modificado, sendo a dose inseminante de 400 x 10(6) espermatozóides móveis, no momento da diluição final, pré-resfriamento. de acordo com o número de inseminações artificiais (IA) utilizadas/ciclo, os resultados de 148 ciclos, de 100 éguas, foram agrupados em: 1 IA, 2IA, 3 IA e 4 ou mais IA. A eficiência de prenhez foi de 4,29; 5,04; 5,67; e 3,43, para 1, 2, 3 e 4 ou mais IA, respectivamente. As características foliculares diferiram em relação à freqüência de inseminações com os maiores valores observados no grupo de éguas inseminadas quatro ou mais vezes. Concluiu-se que menor velocidade de crescimento folicular e maior diâmetro do folículo ovulatório estiveram associados a maior número de inseminações artificiais/ciclo. Na presença de uma concentração espermática adequada, o número de inseminações/ciclo não exerceu influência sobre a fertilidade.

Efeito do intervalo das duas últimas inseminações sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco diluído

Sessenta e duas fêmeas eqüinas foram distribuídas ao acaso em dois grupos experimentais de acordo com o intervalo da penúltima à última inseminação artificial de cada ciclo (48h ou 72h). As éguas foram rufiadas e inseminadas às segundas, quartas e sextas-feiras, a partir do momento em que apresentavam um folículo de 3,0 a 3,5 cm de diâmetro, com sêmen de apenas um garanhão de fertilidade comprovada, diluído para um volume inseminante de 10 mL com diluidor de mínima contaminação. As taxas de concepção referentes ao primeiro ciclo, para os intervalos de 48h e 72h foram de 66,67% (24/36) e 65,22% (15/23), respectivamente, sendo as taxas de concepção/ciclo de 53,45% (31/58) e 56,76% (21/37), na mesma ordem anterior. Com base nos resultados obtidos, recomendam-se inseminações às segundas, quartas e sextas-feiras, sem perda da fertilidade.

Efeitos da pentoxifilina sobre a viabilidade in vitro dos espermatozóides de eqüinos, após o resfriamento a 5ºC

O objetivo deste trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito da adição de 1 mg pentoxifilina por mL de amostras seminais diluídas em meio Kenney, e resfriadas a 5º C, de garanhões normospérmicos, sobre os seguintes parâmetros: taxas de motilidade total e motilidade progressiva, velocidade espermática ao longo da trajetória real, índice retilíneo, taxa de linearidade, velocidade progressiva, taxa de viabilidade e taxa de integridade da membrana plasmática. Foram avaliados 20 ejaculados de quatro garanhões, com o auxílio do Hamilton Thorn Research (Animal Version 12.0 L, EUA), em câmara de Makler. A taxa de viabilidade foi realizada por coloração de eosina e microscopia de contraste e a taxa de integridade de membrana, por coloração com fluorocromos, iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceina e microscopia de fluorescência. As análises foram realizadas aos 30, 60, e 120 minutos de incubação a 37º C, após 12, 24 e 48 horas de resfriamento a 5ºC. A pentoxifilina incrementou significativamente, em relação ao grupo controle, os parâmetros espermáticos relacionados à motilidade dos espermatozóides e de integridade da membrana plasmática, durante todo o período de incubação, da seguinte forma: taxa de motilidade total em 8,2%; motilidade progressiva em 4,7%; velocidade real em 23,1 mm/s; taxa de espermatozóides com velocidade rápida em 7,4%; taxa de viabilidade em 4,7%; e integridade da membrana plasmática em 3,5 % do tratado. Quanto aos parâmetros índice de retilinidade e linearidade, não foi observada diferença significativa entre os grupos. Os resultados obtidos nas condições deste experimento indicam que a adição de pentoxifilina ao ejaculado resfriado de garanhões, até 48 horas após o resfriamento, pode ser benéfica à qualidade dos espermatozóides para uso na inseminação artificial.

Fertilidade do sêmen eqüino diluído, resfriado e transportado

Objetivou-se neste experimento estudar o efeito do transporte de sêmen equino, entre haras, sobre a fertilidade de éguas inseminadas. Setenta e seis fêmeas da raça Mangalarga Marchador foram distribuídas, ao acaso, com número desigual de repetições, para se estudarem os efeitos do sêmen in natura, transportado ou não, e do sêmen diluído, resfriado e transportado, sobre a fertilidade de éguas e diferentes características reprodutivas. O sêmen foi diluído no diluidor lactose-gema de ovo sem glicerina. As fêmeas foram inseminadas, em dias alternados, com sêmen de apenas um garanhão, com volumes/dose inseminante variáveis dependendo do número de fêmeas a serem inseminadas por dia com determinado ejaculado. Utilizou-se para o transporte do sêmen um contêiner especialmente projetado para este fim (MSP-1). As taxas de concepção ao primeiro ciclo e totais, a eficiência de prenhez, o número de ciclos/égua, ciclos/égua gestante, ciclo/prenhez e prenhez/ciclo, o número de IA/égua, o número de IA/égua gestante e o número de IA/égua vazia não foram influenciados pelos tratamentos. O diluidor de lactose gema, modificado pela retirada do glicerol de sua formulação, constitui uma opção para a diluição do sêmen a ser resfriado e transportado. O suceso do transporte do sêmen, diluído e resfriado, a pequenas distâncias, por período de tempo curto, depende mais de um bom diluídor que de um sofisticado contêiner de transporte.

Efeito da palpação retal e da frequencia de inseminações na fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco diluído

Forty-two mares were randomly assigned in a 3 x 2 factorial experiment which included three intervals between rectal palpation (6/6h, 12/12h and once a day palpation) and two frequencies of inseminations (daily or every other day). The mares were inseminated with semen from only one stallion, diluted in minimal contamination extender. There were no differences in the conception rate at first cycle, conception/cycle, conception total, efficiency of pregnancy in either system of rectal palpation, independently of the frequency of insemination utilized. Also there were no differences among intervals of rectal palpation concerning the following reproductive characteristics: number of cycles/mare, cycles/pregnant mare, cycles/ pregnancy, pregnancy/cycle, number of inseminations/mare, inseminations/ pregnant mare and insemination/open mare. There were no differences in pregnancy rate at first cycle, pregnancy rate/cycle, pregnancy rate total and efficiency of pregnancy between the two frequency of insemination. However, the frequency of insemination influenced the number of inseminations/mare, number of inseminations/ pregnant mare and inseminations/open mare. The highest values were observed with the mares inseminated daily. Therefore, insemination every other day can be recommended. If necessary the mare may be palpated rectally at intervals of six hours without reducing the pregnancy rate.

Avaliação de uma Técnica de Diluição e Transporte de Sêmen Eqüino, para as Condições Brasileiras

Ninety-seven Mangalarga Marchador mares were allocated in a randomized experimental design, with different number of replicates per treatments. The objective of this experiment was to study the effect of raw (T3) or diluted, cooled semen transported to the breeding farms 1 (T1) and 3 (T2), on mare fertility and different aspects of reproductive efficiency. The mares were inseminated, with semen of only one stallion (Farm 2), on alternate days using different inseminating volumes, according to number of inseminated mares per day using only one ejaculate. For transportation, semen diluted in a lactose-egg yolk modified extender and the MSP-2 container were used. There was no difference among treatments in relation to conception rates of mares inseminated with raw or diluted, cooled and transported semen. Regardless of the farm, the total fertility obtained with cooled semen was 80% (52/65). The following variables were not affected by the treatments: cycles/mare, cycles/pregnant mare, cycles/pregnancy, pregnancy/cycle, number of inseminations/mare, number of inseminations/pregnant mare, number of inseminations/open mare and efficiency of pregnancy. However, the breeding farm had an effect on water and semen temperature in the container, time between collection and insemination, according to time and distance covered. Based on the results, cooling and transporting equine semen, using an extender, lactose-egg yolk without glycerine and the MSP-2 container should be recommended for short distances. The use of raw semen immediately after collection is also recommended.

Oxytocinergic and serotonergic systems involvement in sodium intake regulation: satiety or hypertonicity markers?

Previous studies demonstrated the inhibitory participation of serotonergic ( 5-HT) and oxytocinergic (OT) neurons on sodium appetite induced by peritoneal dialysis (PD) in rats. The activity of 5-HT neurons increases after PD- induced 2% NaCl intake and decreases after sodium depletion; however, the activity of the OT neurons appears only after PD-induced 2% NaCl intake. To discriminate whether the differential activations of the 5-HT and OT neurons in this model are a consequence of the sodium satiation process or are the result of stimulation caused by the entry to the body of a hypertonic sodium solution during sodium access, we analyzed the number of Fos-5-HT- and Fos-OT-immunoreactive neurons in the dorsal raphe nucleus and the paraventricular nucleus of the hypothalamus-supraoptic nucleus, respectively, after isotonic vs. hypertonic NaCl intake induced by PD. We also studied the OT plasma levels after PD- induced isotonic or hypertonic NaCl intake. Sodium intake induced by PD significantly increased the number of Fos-5- HT cells, independently of the concentration of NaCl consumed. In contrast, the number of Fos-OT neurons increased after hypertonic NaCl intake, in both depleted and nondepleted animals. The OT plasma levels significantly increased only in the PD- induced 2% NaCl intake group in relation to others, showing a synergic effect of both factors. In summary, 5-HT neurons were activated after body sodium status was reestablished, suggesting that this system is activated under conditions of satiety. In terms of the OT system, both OT neural activity and OT plasma levels were increased by the entry of hypertonic NaCl solution during sodium consumption, suggesting that this system is involved in the processing of hyperosmotic signals.

Influência do intervalo entre a inseminação artificial com sêmen diluído resfriado e transportado e a ovulação sobre a fertilidade de éguas

One hundred forty seven cycles of mares were allocated in a completely randomized experiment, with different number of replications and divided in four treatments (T1 = 24 hours preovulation; T2 = 48 hours preovulation; T3 = 48 hours preovulation and in tbe same day of ovulation; T4 = 72 hours preovulation and in the same day of ovulation), in order to study the effect of AI/ovulation interval on mare fertility. The mares were inseminated three times for wek (monday, wednesday and friday), with semen of only one stallion diluted in extender skim milk-glucose, using a volume of 15ml, with 400 x 10(6) sptz viable, cooled at 14 degrees C/3.6 hours, and transported in modified container Celle. Conception rates were not different according to the treatments. So, observed spermatic survival for 60 hours showed the practicability of the inseminations on monday, wednesday and friday.

Uterine leucocyte infiltration after artificial insemination in bitches

In the present study, polymorphonuclear neutrophils (PMN) were enumerated to evaluate acute uterine inflammation after artificial insemination in the bitch. It was concluded that the canine seminal plasma possessed an immunomodulating action. However, the most commonly used extender for freezing canine semen (Tris glucose with egg yolk and glycerol) was a potential inducer of uterine inflammation. (c) 2006 Published by Elsevier B.V.

Antagonism produced by hypertonic nutrient solutions on the depressive effect of carbofuran on isolated guinea pig atria

The action of hyperosmotic nutrient solutions on the depressive effects of carbofuran was studied on spontaneously contracting guinea pig atria. The force and frequency of contraction were recorded using an isotonic lever. Carbofuran 33.0 mu g ml(-1) produced a gradual depressive effect. The time for stabilization of the depressive effect was 6.0+/-2.3 min. After the depressive effect of carbofuran was established, NaCI, mannitol, or urea were introduced into the organ bath to increase the osmolarity of the nutrient solution to about 100 mosmol kg(-1) of water. This resulted in a reversal of the contraction force and frequency to the initial levels. The addition of the osmotic agents at the same concentrations before the addition of 33.0 mu g ml(-1) carbofuran avoided its depressive effect on guinea pig atria. (C) 1996 the Italian Pharmacological Society.