Renal- and calcium-dependent vascular effects of Polybia paulista wasp venom

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Renal and cardiovascular effects of Bothrops marajoensis venom and phospholipase A(2)

Bothrops marajoensis is found in the savannah of Marajo Island in the State of Par S and regions of Amapa State, Brazil. The aim of the work was to study the renal and cardiovascular effects of the B. marajoensis venom and phospholipase A(2) (PLA(2)). The venom was fractionated by Protein Pack 5PW. N-terminal amino acid sequencing of sPLA(2) showed amino acid identity with other lysine K49sPLA(2)s of snake venom. B. marajoensis venom (30 mu g/mL) decreased the perfusion pressure, renal vascular resistance, urinary flow, glomerular filtration rate and sodium tubular transport. PLA(2) did not change the renal parameters. The perfusion pressure of the mesenteric bed did not change after infusion of venom. In isolated heart, the venom decreased the force of contraction and increased PP but did not change coronary flow. In the arterial pressure, the venom and PLA(2) decreased mean arterial pressure and cardiac frequency. The presence of atrial flutter and late hyperpolarisation reversed, indicating QRS complex arrhythmia and dysfunction in atrial conduction. In conclusion, B. marajoensis venom and PLA(2) induce hypotension and bradycardia while simultaneously blocking electrical conduction in the heart. Moreover, the decrease in glomerular filtration rate, urinary flow and electrolyte transport demonstrates physiological changes to the renal system. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Purification, characterization, crystallization and theoretical molecular modeling of gyroxin fraction from Crotalus durissus terrificus venom (Laurenti, 1768)

The venom of Crotalus durissus terrificus snakes presents various substances, including a serine protease with thrombin-like activity, called gyroxin, that clots plasmatic fibrinogen and promote the fibrin formation. The aim of this study was to purify and structurally characterize the gyroxin enzyme from Crotalus durissus terrificus venom. For isolation and purification, the following methods were employed: gel filtration on Sephadex G75 column and affinity chromatography on benzamidine Sepharose 6B; 12% SDS-PAGE under reducing conditions; N-terminal sequence analysis; cDNA cloning and expression through RT-PCR and crystallization tests. Theoretical molecular modeling was performed using bioinformatics tools based on comparative analysis of other serine proteases deposited in the NCBI (National Center for Biotechnology Information) database. Protein N-terminal sequencing produced a single chain with a molecular mass of similar to 30 kDa while its full-length cDNA had 714 bp which encoded a mature protein containing 238 amino acids. Crystals were obtained from the solutions 2 and 5 of the Crystal Screen Kit (R), two and one respectively, that reveal the protein constitution of the sample. For multiple sequence alignments of gyroxin-like B2.1 with six other serine proteases obtained from snake venoms (SVSPs), the preservation of cysteine residues and their main structural elements (alpha-helices, beta-barrel and loops) was indicated. The localization of the catalytic triad in His57, Asp102 and Ser198 as well as S1 and S2 specific activity sites in Thr193 and Gli215 amino acids was pointed. The area of recognition and cleavage of fibrinogen in SVSPs for modeling gyroxin B2.1 sequence was located at Arg60, Arg72, Gln75, Arg81, Arg82, Lis85, Glu86 and Lis87 residues. Theoretical modeling of gyroxin fraction generated a classical structure consisting of two alpha-helices, two beta-barrel structures, five disulfide bridges and loops in positions 37, 60, 70, 99, 148, 174 and 218. These results provided information about the functional structure of gyroxin allowing its application in the design of new drugs.

Extração e pré-tratamento químico de frutanos de Yacon, Polymnia sonchifolia

O processo de desintegração de tubérculos de yacon promove a incorporação de oxigênio que favorece a oxidação de compostos fenólicos e decorrente contaminação do extrato aquoso com cores e odores objetáveis que prejudicam a sua utilização. Este estudo buscou verificar uma metodologia simplificada de extração dos carboidratos presentes nos tubérculos de yacon e efetuar uma primeira remoção de resíduos e compostos originários das cores e odores indesejáveis, utilizando processos de coagulação e precipitação, aplicando tecnologias de baixo custo. Após a etapa de trituração e remoção dos restos celulares, o extrato teve seu pH aumentado para 9,5 e a temperatura para 90ºC, seguido de sedimentação. A remoção deste precipitado foi realizada por filtração em papel após a coagulação com diferentes concentrações de sulfato de alumínio comercial. Verificou-se que a melhor concentração de coagulante no extrato foi de 100ppm, removendo 90,6% dos compostos coloridos. O balanço de massa mostrou uma recuperação de 47,5% dos sólidos totais sendo que 35,6% estão na forma de carboidratos, verificado através da concentrção de carbono orgânico. O processo de pré-tratamento químico causou hidrólise nos oligofrutanos, detectado por um aumento na concentração de açúcares redutores totais, diretamente proporcional à concentração de sulfato de alumínio utilizado no tratamento de coagulação. Análises cromatográficas indicaram o perfil dos açúcares no hidrolisado e a extensão desta hidrólise que foi considerada pequena. A metodologia aplicada mostrou-se fácil, de baixo custo, eficiente e aplicável em agroindústrias nas zonas produtoras desta espécie de raiz tropical.

Sistema com aeração, decantação e filtragem para a melhoria da qualidade de água em irrigação localizada

A qualidade da água é muito importante para irrigação por gotejamento, pois ela escoa por pequenos bocais dos emissores, podendo ocorrer obstrução devido à deposição dos sólidos em suspensão. Portanto, antes da instalação do projeto, devem-se avaliar parâmetros de qualidade da água, para adotar medidas preventivas, evitando o risco de entupimento do sistema. Este trabalho teve como objetivo avaliar um sistema composto por aeradores com aspersores, sobre leito de pedra, para a precipitação dos íons Fe+2e Mn+2 em tanque de decantação, e um conjunto de filtragem composto por três filtros de areia e um de disco, em sistema de irrigação localizada. O trabalho foi realizado na Fazenda Alvorada, no município de Nova Granada - SP, no período de março a outubro de 2008. Foram realizadas determinações de variáveis físicas e químicas da água, ao longo do sistema de aeração, decantação e filtragem, o qual foi eficiente para a melhoria da qualidade de água, reduzindo os níveis de risco de entupimento de severo para médio e de médio para baixo. Oxigênio dissolvido, condutividade elétrica, pH, Fe+2e Fe+3 não diferenciaram a qualidade de água entre os pontos do sistema de tratamento, porém a turbidez, sólidos dissolvidos, sólidos em suspensão, ferro total e manganês total reduziram-se significativamente pelo uso do sistema proposto, melhorando a qualidade da água.

Participação da excreção renal de cálcio, fósforo, sódio e potássio na homeostase em cães sadios e cães com doença renal crônica

Na doença renal crônica (DRC) a manutenção da homeostase de água e sódio é o primeiro problema a ser contornado pelo organismo e com o agravamento das lesões renais surgem outros problemas graves relacionados à homeostase de cálcio e fósforo. O presente estudo tem por escopo avaliar a excreção renal de cálcio, fósforo, sódio e potássio, e o perfil sérico destes eletrólitos em cães normais e em cães com DRC naturalmente adquirida. Foram avaliados três grupos de cães adultos, machos ou fêmeas, de raças variadas. Animais normais compuseram o grupo controle (G1) e os cães com DRC foram distribuídos em dois grupos de acordo com os estágios de comprometimento da função renal (G2 e G3, respectivamente, estágios 1-2 e estágios 3-4, descritos pela IRIS 2006 staging CKD). Os cães do G3 apresentaram aumento das concentrações séricas de cálcio ionizado e fósforo, além de diminuição da concentração sérica de sódio. Quanto à excreção renal dos eletrólitos analisados, os animais dos grupos G1 e G2 apresentaram diminuição de carga filtrada e aumento de excreção fracionada, mas as excreções urinárias não variaram significativamente. Os resultados são indicativos de que os rins de cães com DRC podem manter a excreção urinária dos eletrólitos em valores se melhantes aos dos normais. O mecanismo envolve aumento da excreção fracionada na medida em que haja diminuição da filtração glomerular. Esse processo de compensação, entretanto, pode perder a eficiência nos estágios mais avançados da enfermidade no que se refere à manutenção das concentrações séricas de fósforo e sódio.

Inorganic pyrophosphate-phosphohydrolytic activity associated with rat osseous plate alkaline phosphatase

Purified membrane-bound alkaline phosphatase from rat osseous plate hydrolyzed pyrophosphate in the presence of magnesium ions, with a specific activity of 92.7 U/mg. Optimal apparent pH for pyrophosphatase activity was 8.0 and it remained unchanged on increasing the pyrophosphate concentration. In the absence of magnesium ions the enzyme had a K-m = 88 mu M and V = 36.7 U/mg for pyrophosphate and no inhibition by excess substrate was observed. Pyrophosphatase activity was rapidly destroyed at temperatures above 40 degrees C, but magnesium ions apparently protected the enzyme against danaturation. Sodium metavanadate (Ki = 1.0 mM) was a competitive inhibitor of pyrophosphatase activity, while levamisole (Ki = 8.2 mM) and theophylline (Ki = 7.4 mM) were uncompetitive inhibitors. Magnesium ions (K-0.5 = 1.7 mu M) stimulated pyrophosphatase activity, while cobalt (Ki = 48.5 mu M) and zinc (Ki = 22.0 mu M) ions were non-competitive inhibitors. Manganese and calcium ions had no effect on pyrophosphatase activity. The M-w of the pyrophosphatase: protein was 130 kDa by gel filtration, but a value of 65 kDa was obtained by dissociative gel electrophoresis, suggesting that it was a dimer of apparently identical subunits. These results suggested that pyrophosphatase activity stems from the membrane-bound osseous plate alkaline phosphatase and not from a different protein.

Avaliação da determinação da fibra em detergente neutro e da fibra em detergente ácido pelo sistema ANKOM

O objetivo do trabalho foi comparar os valores de fibra em detergente neutro (FDN) e os de fibra em detergente ácido (FDA) obtidos com o equipamento ANKOM e pelo método convencional (Van Soest). No primeiro ensaio foram analisados cinco materiais diferentes (cana-de-açúcar, capim-braquiária, silagem de milho, polpa cítrica e fezes bovina) e testados quatro tipos de saquinhos para filtragem de amostra. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, em um fatorial 5x4 (cinco materiais diferentes e quatro tipos de saquinhos de filtragem), com três repetições. As médias obtidas foram comparadas àquelas obtidas com método convencional. No segundo ensaio procurou-se avaliar o efeito da quantidade de amostra por saquinho (0,5; 0,8 e 1,0 g) sobre os teores de FDN e FDA em três tipos de alimentos, utilizando o ANKOM. Neste ensaio, o delineamento experimental foi em blocos casualizados em esquema fatorial 3x3 (três alimentos x três quantidades), com três repetições. Os tipos de saquinhos de filtragem utilizados não influenciaram os teores de FDN nos diferentes alimentos, com exceção das fezes, cujos saquinhos de náilon resultaram em concentrações de FDN inferiores. Não houve diferença entre os valores de FDN e FDA, obtidos pelo equipamento ANKOM ou pelo convencional, para os alimentos estudados, com exceção da polpa cítrica, cujo valor médio de FDA pelo ANKOM foi inferior àquele obtido pelo método convencional. A quantidade não exerceu efeito sobre a concentração de FDN dos alimentos analisados no equipamento ANKOM.

Purification and structural characterisation of (1 -> 3 ; 1 -> 6)-beta-D-glucans (botryosphaerans) from Botryosphaeria rhodina grown on sucrose and fructose as carbon sources: a comparative study

Two botryosphaerans, exopolysaccharides (EPS) secreted by the ascomyceteous fungus Botryosphaeria rhodina, when grown on sucrose and fructose as sole carbon sources, were structurally compared after their isolation from the culture medium. Both EPS were submitted to trypsin digestion, and eluted as a single peak on gel filtration. Total acid hydrolysis yielded only glucose, and data from methylation analysis and Smith degradation indicated that both EPS constituted a main chain of glucopyranosyl beta(1 -> 3) linkages substituted at O-6. The products obtained after partial acid hydrolysis demonstrated side chains consisting of glucosyl- and gentiobiosyl- linked beta(1 -> 6) residues. C-13-NMR spectroscopy studies showed that all glucosidic linkages were of the beta-configuration. The carbon source affected the side chain structures of botryosphaeran but not the main chain makeup. Sucrose produced less branching (21%) than fructose (31%). (c) 2005 Published by Elsevier Ltd.

A lectin from the lichenized Basidiomycete Dictyonema glabratum

A lectin with hemagglutinating activity has been isolated from an aqueous extract of the symbiotic phenotype of Dictyonema glabratum and its cyanobacterial photobiont Scytonema sp. The purified lectin had a pi of 6.8 and its molecular mass was investigated by electrospray ionization mass spectrometry, gel filtration and SDS-PAGE, which indicated its native conformation as a dimer formed by two identical subunits of 16540 Da. The lectin is a glycoprotein with a low degree of glycosylation, containing galactose, xylose, glucose and mannose as neutral monosaccharides, in addition to glucosamine, which could indicate both N- and O-linkages. Amino acid analysis showed the predominance of nonpolar residues such as phenylalanine. Agglutination of human erythrocytes required divalent cations, which is affected by addition of EDTA. The lectin was more stable at 30 degreesC or less for at least 1 h and between pH 5.0 and 7.0. Among the various compounds tested for hemagglutination inhibition, N-acetylgalactosamine was the most active. The potential role of this lectin in recognition of the compatible cyanobacterial photobiont is discussed.

Chemical Modification of Botryosphaeran: Structural Characterization and Anticoagulant Activity of a Water-Soluble Sulfonated (1 -> 3)(1 -> 6)-beta-D-Glucan

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Purificação e caracterização de uma gentioexaose obtida de botriosferana por hidrólise ácida parcial

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

SENSORY ACCEPTANCE of JUICE FROM FCOJ PROCESSING STEPS

The acceptance of orange juice from the frozen concentrated orange juice (FCOJ) processing steps was evaluated by 101 consumers for color, overall impression, aroma, flavor and texture. The juice from the extraction, filtration, concentration, cooling and blend steps was collected at the beginning and the end of the 2009 harvest period. The juice from the extraction and filtration steps showed higher acceptance means for overall impression, aroma and flavor, while the juice from the concentration, cooling and blend steps had acceptance lower than the cutoff score. The internal preference mapping showed that color discriminated the juice from the collection periods while texture allowed discrimination between the steps of extraction and of filtration. The acceptance of the orange juice was driven by the aroma and flavor. The sensory acceptance was successfully applied to evaluate change during the process and the difference between the orange juice from different steps of the FCOJ processing.

DSC studies on protein isolate of guava seeds Psidium guajava

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Partial characterization of proteins from baru (Dipteryx alata Vog) seeds

BACKGROUND: Baru (Dipteryx alata Vog.) is a fruit distributed throughout the Brazilian savanna and contains a seed with a high protein content, whose properties have been rarely explored. The purpose of this study was to characterize this protein, especially by isolation and quantifying its fractions and measuring some of its molecular properties.RESULTS: Baru seeds contain 244 g kg(-1) protein on a dry weight basis. Solubility profiles showed a preponderance of globulins. This fraction dominated the seed composition, with 61.7 wt% of the total soluble proteins. Albumins and glutelins accounted for 14 and 3.3 wt%, respectively. SDS-PAGE resolution of albumin and globulin showed main bands with molecular weights of 84 kDa and 64,66 and 73 kDa, respectively. The total protein of the flour and the globulin showed values of in vitro digestibility of 85.59% and 90.54%, relative to casein. Total globulin produced only one chromatographic peak, both on Sepharose CL-6B gel filtration and on DEAE-cellulose ion-exchange columns, eluted at a concentration of 0.12 mol L(-1) NaCl.CONCLUSION: The baru seed had high protein content with large quantities of storage proteins. The chromatographic and solubility profiles indicate the predominance of a fraction with characteristics of a legumin-type protein. (C) 2011 Society of Chemical Industry