Clonagem de sequências codificantes de citocinas felinas para construção de curva padrão para PCR em tempo real

A quantificação de citocinas felinas possibilita uma avaliação do sistema imune do animal em diferentes doenças, permite também a identificação de diferentes fatores que alteram sua secreção, e colabora na compreensão da patogênese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensuração é feita principalmente pelo método de ELISA, mas para os felinos há uma menor disponibilidade de kits específicos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa é utilizar a reação de PCR em tempo real com transcrição reversa (RT-qPCR) para quantificação absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma técnica bastante sensível e específica para analisar a expressão desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequências gênicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padrão para a qPCR. Assim, foi feita extração de RNA de amostras de sangue total de gatos domésticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contaminação por DNA genômico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers específicos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasmídeo comercial, e introduzido em bactérias E. coli cepa DH5. Os clones recombinantes foram sequenciados para confirmar a inserção do fragmento no vetor. As curvas padrão da qPCR foram construídas com cada plasmídeo recombinante numa de 106 a 101 cópias por reação. O sequenciamento mostrou que todos os clones eram semelhantes àqueles encontrados no GenBank. A eficiência das amplificações, baseado no slope das curvas padrão foram: 101,3% para GAPDH, 99,1% para IL-1, 83,2% para IL-6, 94,4% para IL-10, 105,5% para IL-12, 83,4% para IFN- e 83,8% para TNF-. O valor de r2 foi de 0,99 em todas as reações. Dessa forma, com a clonagem dos fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Redução de tempo de setup de uma máquina de encartuchamento pela técnica SMED

Currently the market requires companies to adapt for they can have the lowest possible cost in their manufacturing, be it a good or service, thus obtaining a greater profit. For this profit the Toyota Production System applies lean manufacturing practices actions with reduced spending, smaller lots and stocks, generated by market demand. The technique allows SMED with few actions, changes and investments that time does not exceed one digit on your total time. This case study shows that only with standardization and use of inexpensive improvements, could reduce setup time on a machine for 70 minutes to time of approximately 48 minutes with little investment, demonstrating the viability of the tool presented

Padronização da técnica de PCR em tempo-real na avaliação da pluripotência de células-tronco mesequimais caninas

Este relatório final tem como objetivo apresentar as atividades desenvolvidas no período de janeiro/2009 a março/2010, pela aluna Thaila Isabel Wodewotzky, relativas ao projeto de conclusão de curso intitulado “Padronização da Técnica de PCR em tempo-real na Avaliação da Pluripotência de Células-tronco Mesenquimais Caninas”, para fins de obtenção do título de Bacharel em Ciências Biológicas. O referido projeto objetiva avaliar a quantificação e relevância dos níveis de expressão gênica do fator de transcrição Oct4 em CTM´s, por meio da padronização da técnica de PCR em tempo-real. Para tanto, o RNA total das CTM´s obtidas, isoladas e cultivadas a partir da medula óssea de cães foi extraído a partir da medula óssea de cães a fim de avaliar a quantificação e relevância dos níveis de expressão gênica do Oct4 por meio da utilização da técnica de PCR em tempo-real com transcrição reversa (RT-qPCR). O RNA total foi extraído e submetido à reação de transcriptase reversa, para a obtenção do cDNA. Posteriormente esse cDNA foi utilizado na padronização da técnica de qPCR utilizando primers desenhados a partir de sequências obtidas no genebank. . Como normalizador utilizou-se o RNA codificante de GAPDH.Verificou-se desempenho satisfatório dos primers para Otc4 na avaliação de CTM´s de cães. Também o RNAm do GAPDH foi adequado como normalizador. Dessa forma, esse sistema pode ser utilizado na realização de testes quantitativos utilizando amostras de células-tronco embrionárias caninas

O processo de configuração curricular: uma análise da compreensão de professores de educação física das séries iniciais do ensino fundamental

Pós-graduação em Educação - IBRC

O mal-estar docente e os limites da experiência no tempo presente: uma leitura frankfurtiana

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

A variação entre ter e haver em construções existenciais na fala e na escrita da variedade riopretense

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Um tempo para a literatura ou a vida entre o labirinto e a bússola

Since the priors, man has been trying to understand the concept of time. From myth to quantum physics, time is something that inspires reflections on our own lives. Do we exist in time or for time? Literature, a peculiar form of knowledge, deals with the experience of time in many ways. By avoiding categorizations, literature converges time and space in a dimension in which labyrinth and compass converge: at the reading time, in the reader’s space, in the universe of the book, where Cronos, Kairos, and their heir, by excellence, the literary word, constellate. In this way, in this essay, I discuss some aspects of the relationship between literature and time, or still, what literature can teach us about the time.

Degradação da manipueira utilizando reator de lodo ativado em batelada sequencial com elevado tempo de paralisação intermitente da aeração

Conselho Nacional de Desenvolvimento em Pesquisa (CNPq)

Machado de Assis, jornalista: o homem, o texto, o tempo.

This article analyses some of Machado de Assis’ newspaper chronicles written in 1878 for O Cruzeiro. We intend to show that behind their extremely free literary composition, those texts show the author’s deepest critical point of views. Respecting the narrator fictional status, we are trying to see, as carefully as this subject demands on us, the man behind the journalist.

Estudo para correção dos sensores da rede de monitoramento do campo elétrico em função do campo elétrico de tempo bom

A monitoring network of atmospheric electric field covering the Vale do Paraiba region was implemented. The sensors were located on different sites with different altitude and geographic topology. The present work reports the study carried on those sensors in order to verify the necessity of using some correction factor to the measured local electric field intensity due to effects of local environment. The measurements were done in continuous 24 hours per day with the data recorded on registers in each device accumulating information during a period of four months. The relation between the electric field values by each sensor was compared to the reference located on Sao Jose dos Campos city using the same period. In a graphical analysis using the local field intensity and the reference, the data were fitted to a straight line obtained by minimum square method. Variation up to 95% was observed between the field values in some sensors. Another method was proposed, comparing the mean values of the electric field in a function of time. The variation in some sensors reached up to 133%. We conclude that the variations are due to local atmospheric conditions and no correction factor is required on the electric field sensors

Vida e morte em diálogo com a voz narrativa, o tempo e o espaço em Mrs. Dalloway, To The Lighthouse e Between the Acts de Virginia Woolf

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Determinação do tempo de vida de restaurações totalmente cerâmicas (y-tzp/porcelana) com incidência da carga em diferentes regiões de contato

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeito da escovação utilizando dentifrícios com diferentes graus de abrasividade no desgaste do esmalte após o uso de agentes clareadores com e sem cálcio, em diferentes intervalos de tempo

Pós-graduação em Odontologia Restauradora - ICT

Validação de técnicas moleculares para o diagnóstico de bactérias em peixes, visando redução de tempo e custo

Pós-graduação em Microbiologia Agropecuária - FCAV

Tempo Ideal para a coleta do sopro no teste respiratório com isótopos estáveis (13C) para o diagnóstico do Helicobacter pylori

A study was conducted to determine the optimal time for collecting the breath examination urea breath marked with the stable isotope 13C. We selected patients before undergoing the examination of endoscopy at the Endoscopy Section of the University Hospital of Botucatu - SP. A screening was performed to determine which patients wanted and could participate. Before performing endoscopy basal sample was collected from the patient and then the labeled urea ingested. The blows were collected in double every 2.5 minutes until an interval of 30.0 minutes after were collected every 5.0 minutes until the time of 45.0 minutes . The samples were analyzed in a mass spectrometer for isotope ratio, located in the center of Stable Isotopes, Institute of Biosciences, UNESP - Botucatu campus. The data were studied and arranged in the form of graphics to better interpretation of results. Based on the obtained results it was determined that a standby time of 15.0 minutes to collect the wind is sufficient for accurate diagnosis and effective