Busca de antígenos para diagnóstico da leishmaniose visceral canina: potencial uso e aplicação da proteína rLc36

Pós-graduação em Biotecnologia - IQ

Estimating the concentration of gold nanoparticles incorporated on natural rubber membranes using multi-level starlet optimal segmentation

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Comparison of PCR with stained slides of bone marrow and lymph nodes aspirates with suspect diagnosis for leishmaniasis

Visceral leishmaniasis (VL), also known as kala-azar, is a disseminated protozoan infection caused by Leishmania donovani complex. Traditionally the definite diagnosis is made by amastigote detection in the tissue. The aim this study was to evaluate the PCR technique in stained slides of bone marrow and lymph nodes aspirates with suspect diagnosis for leishmaniasis. Slides were selected totaling 62 suspect cases (33 bone marrow samples and 29 lymph node samples) and 17 positive cases (8 bone marrow and 9 lymph node). From 62 suspect cases, 39 (62.90%) were confirmed to be positive being 17 (n = 29) lymph node aspirates and 22 (n = 33) bone marrow. This finding is in agreement with the higher sensitivity of the PCR assay compared to direct microscopic observation. In conclusion, the findings of this study supports the use of PCR on archive cytological preparation stained slides for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis, emphasizing the higher sensitivity of this technique when compared to direct microscopic examination and mostly the use of the suspect status for the cytology samples that presents the previously mentioned particularities with focus on detecting the oligosymptomatic or assymptomatic dogs in endemic areas functioning as potential reservoirs for this disease. (C) 2014 Elsevier B.V. All rights reserved.

Synthesis and biological evaluation of ternary silver compounds bearing N,N-chelating ligands and thiourea: X-ray structure of [{Ag(bpy) (mu-tu)}(2)](NO3)(2) (bpy=2,2 '-bipyridine; tu = thiourea)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Comparative evaluation of the DPP (R) CVL rapid test for canine serodiagnosis in area of visceral leishmaniasis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Alteration of sFAS and sFAS ligand expression during canine visceral leishmaniosis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Compartmentalized gene expression of toll-like receptors 2, 4 and 9 in the brain and peripheral lymphoid organs during canine visceral leishmaniasis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Produção de enzimas ligninolíticas, glioxal oxidase e proteases por fungos marinhos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudo das interações in vivo entre as proteínas teloméricas LaRPA-1 e LaRbp38 usando o sistema do duplo híbrido

A leishmaniose é um conjunto de doenças infecciosas causadas por parasitas do gênero Leishmania, que afligem milhões de pessoas no mundo, tendo a cada ano dois milhões de novos casos e 70 mil mortes. As drogas utilizadas no tratamento das diferentes formas clínicas da doença apresentam alta toxicidade e baixa eficácia, além de apresentarem muitos efeitos colaterais e colaborarem com o aparecimento de parasitas e vetores resistentes. Devido a estas adversidades, o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento desta parasitose é incentivada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e um maior conhecimento sobre a biologia molecular destes protozoários poderá facilitar estas descobertas. Ultimamente, os telômeros, estruturas nucleoproteícas nos terminais dos cromossomos de eucariotos, têm sido alvo intenso de estudos, que visam utilizá-los como alvo terapêutico contra tumores malignos e microrganismos patogênicos. Os telômeros geralmente se apresentam como estruturas dinâmicas onde ocorrem interações entre o DNA e proteínas, resultando na formação do complexo telomérico, que é responsável pela proteção e manutenção dos cromossomos e estabilidade do genoma, caracterizando uma função imprescindível para viabilidade celular. Componentes do complexo telomérico de Leishmania amazonensis foram identificados por ensaios bioquímicos em extratos positivos para a atividade de telomerase. Entre estes componentes identificou-se as proteínas LaRPA-1 (L. amazonensis Replication Protein A-1) e a LaRbp38 (L. amazonensis RNA binding protein) as quais mostraram habilidade de interagir com o DNA telomérico in vitro e in vivo. Mais recentemente, utilizando-se ensaios de imunoprecipitação e de captura por “pull-down” foi demonstrado que estas proteínas fazem parte de um mesmo complexo nos telômeros do parasita. Este trabalho pretende confirmar estas possíveis interações entre as proteínas teloméricas LaRPA-1 e ...

Busca de atividade leishmanicida de substâncias obtidas de plantas

Diante da baixa eficácia e elevada toxicidade apresentada pelos fármacos antimoniais e anfotericina B, faz-se premente a pesquisa de novos agentes leishmanicidas. Para tanto, produtos naturais e sintéticos têm sido estudados na busca de novos protótipos antiparasitários. Este trabalho de conclusão de curso teve como objetivo avaliar a potencial ação leishmanicida de substâncias obtidas de Pterogyne nitens contra formas promastigotas de Leishmania Amazonensis e Leishmania chagasi e a ação citotóxica contra macrófagos da linhagem contínua J774. As amostras testadas, cedidas pelo NuBBE (Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais), foram obtidas por meio de técnicas de extração das diferentes partes da planta (flores, folhas e caule). Os ensaios biológicos em promastigotas e macrófagos J774 foram realizados pelo método colorimétrico utilizando-se MTT (Methyl Thiazolyl Blue). A leitura da densidade ótica (DO) foi realizada em espectrofotômetro a 490 nm e os resultados foram obtidos em absorbância. A porcentagem de citotoxidade (%C) foi calculada para determinação da Concentração Inibitória 50% (CI50). Os resultados foram comparados aos fármacos atualmente preconizados como segunda escolha de tratamento pelo Ministério da Saúde (pentamidina e anfotericina B), de acordo com o Manual de Vigilância das Leishmanioses, divulgado no portal do Ministério da Saúde. Os resultados obtidos corroboram o potencial farmacológico notável das substâncias obtidas de P. nitens para o uso terapêutico em doenças negligenciadas, tal como a leishmaniose

Desenvolvimento e caracterização de microemulsões contendo fluconazol para o tratamento da Leishmaniose tegumentar

A leishmaniose tegumentar é causada pela picada da fêmea dos insetos flebotomíneos. As lesões podem evoluir de pápulas para úlceras, que apresentam fundo granuloso e bordas infiltradas, as quais são indolores, podendo ser únicas ou múltiplas. Trata-se de uma doença negligenciada e o investimento em seu tratamento é desprezível. Até hoje, são empregados no tratamento medicamentos a base de antimonial pentavalente, além de outros fármacos como pentamidina, anfotericina B, paromomicina, imidazoquinolina, antifúngicos, como o fluconazol (FLU). As microemulsões (MEs) melhorarem a solubilidade e estabilidade dos fármacos, além de proporcionarem ação prolongada, vetorização diferenciada para determinados tecidos ou órgãos do organismo. Este trabalho teve como objetivos desenvolver e caracterizar MEs contendo FLU, caracterizar estruturalmente por meio de análises de microscopia de luz polarizada, análise do tamanho das gotículas, análise do perfil de textura e avaliação da bioadesão. Para o estudo de estabilidade foram empregados ensaios de avaliação visual e determinação do pH. Quanto aos ensaios biológicos in vitro, foram realizados ensaios colorimétricos das amostras visando verificar se o sistema desenvolvido permite a potencialização do poder leishmanicida do FLU contra as formas promastigotas da Leishmania amazonensis. Pelo diagrama de fases observou fases líquido-cristalinas confirmadas pela microscopia de luz polarizada, e foram selecionadas três formulações: uma SLT e duas SVT. Todos os ensaios de caracterização estrutural para a F2 sofreu variação quando acrescentou o fármaco, exceto para o potencial zeta, difração de raios X e bioadesão. Não houve alteração no ensaio estabilidade físico-química no período analisado. Os ensaios biológicos in vitro evidenciaram, nas condições metodológicas, inefetividade do sistema contra as formas promastigotas de L. amazonensis

Clonagem, Expressão e Purificação da Proteína Telomérica LaTRF em sistema bacteriano (pMAL)

As proteínas da família TRF2 (“TTAGGG repeat-binding factor 2”) fazem parte de complexos multiprotéicos responsáveis pela manutenção dos telômeros de alguns eucariotos. Elas apresentam domínios funcionais que a caracterizam como proteínas que interagem com DNA telomérico na forma de dupla fita. São eles, o domínio de interação com o DNA do tipo Myb-like, localizado na porção C-terminal, um domínio acídico N-terminal e um domínio de homodimerização TRFH (“TRF homology domain for homodimerization”). A proteína TRF2 também está envolvida na formação de estruturas teloméricas terminais denominadas “t-loops”. O intuito deste projeto é a clonagem, expressão em vetor bacteriano (pMAL) e a purificação de uma proteína homóloga as proteínas teloméricas TRFs humana em parasitas do gênero Leishmania, especificamente a espécie Leishmania amazonensis (LaTRF). Primeiramente foram desenhados iniciadores (primers) utilizados para a amplificação da sequência LaTRF por PCR. O(s) produto(s) de amplificação foram clonados em vetores de clonagem para produtos de PCR e sequenciados para análise. Uma vez obtida a seqüência da LaTRF, o inserto contendo o gene foi subclonado direcionalmente e na mesma fase de leitura do vetor de expressão bacteriano (pMAL-c5x, NEB) para obtenção e futura purificação da proteína recombinante. Verificou-se a expressão da proteína recombinante LaTRF utilizando SDS-PAGE e “Western Blot”. Pelos resultados obtidos na análise de expressão em pequena escala da proteína recombinante, foi observado possíveis indícios de que esta esteja sendo expressa. Com isso, torna-se possível a tentativa de uma expressão em grande escala utilizando esse mesmo sistema bacteriano (pMAL) a fim de se obter a proteína purificada que poderá ser futuramente utilizada para ensaios de “pull-down” dentre outras aplicações

Manifestações oculares na leishmaniose

The Canine Visceral Leishmaniasis is a chronic disease of endemic character, caused by Leishmania Chagasi in Americas. The inoculation of the promastigote form in the individual triggers a local and widespread immune reaction with formation of inflammatory infiltrates and deposition of immune complexes in tissues. Initial clinical symptoms of the disease are: weight reduction, hepatomegaly, splenomegaly and, according to the disease chronicity, signs such as alopecia, erythema, onychogryphosis, arthropathies, renal diseases, pyoderma, seborrheic dermatitis, muscle atrophy and Ocular diseases. Ocular diseases are often reported and are result of the direct parasitism or immune-mediated mechanisms caused by the disease. The Leishmania spp have greater affinity for the anterior segment, so that anterior uveitis is one of the most frequently diagnosed injuries. Blepharitis diffuse and Keratoconjunctivitis also appear as important ocular changes. In histological section, inflammatory infiltrates and macrophages with amastigote form are observed in all ocular tissues, with the exception of the retina and optical nerve. In the clinical analysis and disease diagnosis, should be considered the differential diagnosis, such as Ehrlichiosis and systemic hypertension, because these may cause some ocular manifestations similar to those observed in leishmaniasis

Busca de atividade leishmanicida de extrato, frações e subfrações obtidas da planta Baccharis trimera (Less.) DC

Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), leishmanioses são antropozoonoses e estão entre as seis doenças tropicais de maior importância no Velho Mundo e nas Américas. São endêmicas em 88 países e estima-se que sua prevalência seja de 12 milhões de casos no mundo. Nas duas últimas décadas, o número de casos tem aumentado, assim como sua ocorrência geográfica. No Brasil, é uma realidade em diversos estados, apresentando perfis epidemiológicos diferentes. A terapêutica empregada atualmente conta com poucos fármacos, em uso há mais de 40 anos, e que apresentam potencial nefro, hepato e cardiotóxico. Além disto, são contraindicados a idosos e gestantes, o que caracteriza mais um entrave à terapêutica atual. Tendo em vista a imensa biodiversidade brasileira, uma fonte alternativa para o tratamento destas e outras inúmeras enfermidades é a busca de novas moléculas por meio da pesquisa com extratos vegetais e seu fracionamento, a partir de diferentes espécies de plantas. Este trabalho avaliou a atividade leishmanicida do extrato acetato de etila, frações e subfrações obtidas da planta Baccharis trimera (Less.) DC sobre a espécie Leishmania amazonensis. Os ensaios biológicos foram realizados in vitro pelo método colorimétrico de MTT (Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólio) utilizando formas promastigotas do parasito e macrófagos da linhagem J774, para estudos de citotoxicidade. Os testes foram realizados em triplicata, utilizando-se microplacas de 96 orifícios. Como resultado, três frações (CI50 = 23,56 μg/mL; 29,89 μg/mL; 42,31 μg/mL) e cinco subfrações (CI50 < 1,56 e CI50 = 5, 07 μg/mL ; 5,21 μg/mL; 24,61 μg/mL) apresentaram interessante potencial leishmanicida, sendo que duas destas subfrações também demonstraram baixa citotoxicidade (IS = 64,1). A partir de análises cromatográficas das frações e subfrações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)