Análise do envolvimento do fator de início de tradução de eucariotos 5A (eIF5A) na translocação de proteínas para o retículo endoplasmático em Saccharomyces cerevisiae

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Ação da IL-18 sobre a expressão do receptor dectina-1 e produção de citocinas por monócitos humanos desafiados com diferentes cepas de Paracoccidioides brasiliensis

Estudos têm demonstrado que o reconhecimento inicial de microrganismos é mediado por receptores celulares expressos em células da imunidade inata denominados receptores de reconhecimento de padrões (PRRs). Assim, a interação entre moléculas de superfície dos patógenos e receptores homólogos presentes na membrana celular de monócitos, modula a fagocitose, a ativação da célula e conseqüentemente a produção de citocinas. Trabalhos têm demonstrado a importância da estimulação de receptores toll-like 2 e 4 (TLR2 e TLR4), receptores de manose (MR) e dectina-1 de monócitos, tanto em infecções bacterianas como fúngicas, culminando com indução de produção de várias citocinas. A IL-18 é uma citocina indutora de IFN-g e possui uma ação extremamente importante, por ser capaz de promover tanto uma resposta do tipo Th1 ou Th2, dependendo do contexto de estimulação e do microambiente de citocinas. Em trabalho recente demonstramos que a IL-18 possui uma ação importante sobre o aumento da expressão de MR em monócitos humanos, e o reconhecimento do Paracoccidioides brasiliensis via esse receptor causaria aumento do crescimento fúngico no interior da célula. Dessa forma, os objetivos do presente projeto foram: 1) Avaliar a ação da IL- 18 sobre a expressão do receptor dectina-1 por monócitos humanos desafiados in vitro com diferentes cepas do P. brasiliensis; b) Avaliar a participação da dectina-1 na indução da produção de IL-18, TNF-a e IL-10 por monócitos desafiados in vitro com diferentes cepas do P. brasiliensis. Assim, monócitos de indivíduos normais tratados in vitro com IL-18 foram desafiados com diferentes de cepas do P. brasiliensis, e a expressão do receptor dectina-1 foi avaliada pela técnica de citometria de fluxo. A dosagem de IL-18, TNF-a e IL-10 no sobrenadante de cultura de monócitos desafiados com P. brasiliensis foi realizada utilizando a técnica de ELISA . Os resultados mostraram que a ...

Avaliação do efeito citotóxico da nitensidina A em células de glioblastoma multiforme e células não tumorais

Astrocitomas difusos são o tipo de tumor cerebral primario mais comum em adultos. O glioblastoma multiforme (GBM) é o astrocitoma mais frequente e letal. Pacientes diagnosticados com GBM geralmente morrem em aproximadamente 14 meses apesar do tratamento normalmente adotado. O tratamento consiste em remoção cirúrgica do tumor, radioterapia e quimioterapia com o agente alquilante temozolomida (TMZ). Entretanto, devido a elevada resistência desse tumor à radioterapia e quimioterapia, na maioria dos casos ocorre recidiva do tumor algumas semanas após a cirurgia. Baseado nesse prognóstico pobre e na elevada resistência das células de GBM à quimioterapia, a busca por novos fármacos a fim de aumentar as chances de sobrevivência e a qualidade de vida dos pacientes, é de extrema importância. Nitensidina A é um alcaloide guanidínico isolado da planta típica do cerrado brasileiro Pterogyne nitens, que demonstrou notável efeito citotóxico em células de câncer cervical. A fim de analisar o potencial da nitensidina A como antineoplásico foram realizados ensaios de citotoxicidade desta substância e da TMZ. Os resultados mostraram que a nitensidina A apresenta efeito citotóxico em concentração muito inferior à TMZ. Os resultados também demonstram que dentre as células analisadas, a RO é a célula não tumoral mais resistente a ambas as substâncias e, dentre as células tumorais, a célula mais sensível e a mais resistente são, respectivamente, U87MG e U343MG. Estes resultados indicam que a nitensidina A tem um potencial terapêutico promissor para este tipo tumoral. Experimentos adicionais estão em andamento para investigar esta hipótese

Avaliação do comportamento da temperatura na massa deresíduos com diferentes tempos de disposição no aterro sanitário de Rio Claro - SP

The present work investigates solid waste temperature behavior in different depths in two cells in the Rio Claro-SP city’s sanitary landfill. One of the cells is in operation with waste disposal beginning about one year ago. The other one is located in an closed area and contain waste disposed from five to seven years before. Measures were also made in an area that have no disposed waste in order to collect reference values. The data were obtained every fifteen days. The temperature results shows higher values in the operating cell, with maximum 38,1 °C in a depth of 4,0 m. In the closed cell the highest values were 36,3 °C in a depth of 8,5 m. The highest temperature values were obtained in the operating cell due to wider substract availability that indicates a more intense biological degradation activity. With three meters depth, the temperature results were 36,6 °C in the operating cell, 33,8 °C in the closed cell and 24,5 °C in the reference area. Therefore the temperature can be used as a biological activity indicator in sanitary landfills, supporting biogas studies

Identificação de fatores celulares que interagem fisicamente com Lia1 por meio do rastreamento de duplo-híbrido

A síntese de hipusina é uma modificação pós-traducional única e essencial que ocorre somente no provável fator de início de tradução de eucariotos 5A (eIF5A). Enquanto que a enzima desoxi-hipusina sintase catalisa a formação de desoxi-hipusina no precursor de eIF5A, posterior hidroxilação deste intermediário pela enzima desoxi-hipusina hidroxilase gera a forma madura hipusinada. Apesar da essencialidade de eIF5A e hipusina no crescimento celular, a função biológica desempenhada por este fator intrigante permaneceu obscura por décadas. Recentemente, novas evidências fortaleceram o envolvimento de eIF5A na tradução, mas o seu mecanismo de ação ainda precisa ser elucidado. Com o objetivo de identificar proteínas que interagem com eIF5A que pudessem contribuir para a elucidação de sua função, foi realizado um rastreamento de duplo-híbrido através do qual um novo parceiro físico foi revelado, a proteína codificada pelo gene YJR070C, denominado LIA1 (Ligante de eIF5A) pelo nosso laboratório. Entretanto, este dado não contribuiu para a determinação do papel de eIF5A dentro da célula, pois a função exercida por Lia1 era naquele momento desconhecida. Em 2006, a clonagem de LIA1 como o gene codificador da enzima desoxi-hipusina hidroxilase culminou na completa identificação das enzimas da via de síntese de hipusina no precursor de eIF5A. No entanto, o mecanismo pelo qual eIF5A contendo desoxi-hipusina é hidroxilado não é completamente conhecido. Como o rastreamento por duplo-híbrido tem-se revelado de grande importância para a compreensão dos processos biológicos que ocorrem em uma célula, pois vem sendo amplamente empregado na elucidação da função de diferentes fatores celulares através da análise de interações proteína-proteína, o presente trabalho visou à busca de ligantes físicos de Lia1 através do emprego desta técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Projeto de um transdutor binocular utilizando extensometria e aplicação na pesagem rodoviária

With the passage of time, the variety of companies from each branch has gradually grown throughout the country. As a consequence, the logistics to attend to such demand has grown in the same proportion. One factor to highlight about this rapid growth is the increase of freight vehicles roaming the roads, often carrying loads over the limit established by law. At first it may seem that this would not bring any problem, however, note that an excessive number of overloads ends up deteriorating the asphalt, causing ondulations, potholes and other imperfections on the roads, which can cause accidents. In addition, the money spent for the maintenance of the roads is high. Thinking about it, it was established by law a regulation that restricts the weight limit for these vehicles, through axle weighing, subject to a fine. With this control the road floor is preserved for longer, requiring less maintenance expenses. The weighing stations use load cells to display the inferred weight, these cells use strain gages in its construction. The following work presents a methodology to dimension a binocular load cell, its main elements and its dimensioning. Showing how different materials can affect the dimensioning, so that can work satisfactorily. It also presents an overview of how are the parameters for weighing, and fines

Carga viral e genotipagem do vírus de Epstein-Barr (EBV) e análise da frequência das variantes do gene viral BNLF-1 em indivíduos portadores do vírus da imunodeficiência humana (HIV)

Indivíduos imunocomprometidos possuem maior risco de desenvolver linfomas associados ao EBV. A detecção desse vírus em sangue periférico e a determinação de sua carga viral podem ter importância na evolução clínica de indivíduos portadores do HIV. Foram avaliadas 156 amostras de pacientes HIVpositivos pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção e quantificação da carga viral do EBV. 123/156 (78,8%) casos apresentaram carga viral detectável para o EBV, sendo que a carga viral média foi de 6,9x10-3 cópias de EBV/célula. Foi detectada elevada carga viral do EBV em indivíduos com falha terapêutica ou sem HAART (p =0,0076), em coinfectados pelos EBVs 1 e 2 (p=0,0205), em pacientes com altas cargas de HIV (rho=0,27614, p=0,0005) e longos períodos de infecção pelo HIV (rho= 0,24164, p =0,0026) e os que apresentavam altos níveis de linfócitos T CD8 + (rho=0,19286, p =0,0159). A amplificação do gene EBNA-2 para realização da tipagem viral foi possível em 95/123 (77,2%) amostras, das quais 72 (75,8%) revelaram infecção pelo EBV-1, 9 (9,5%) pelo EBV-2 e 14 (14,7%) apresentavam coinfecção entre os EBVs 1 e 2. Esses dados estão de acordo com a literatura visto que o tipo 1 é predominante em países ocidentais e 70,0% da coorte era composta por indivíduos caucasianos e heterossexuais. A maioria dos pacientes que apresentaram coinfecção pelos EBVs 1 e 2 tiveram contagem de linfócitos T CD4 + entre 200 e 499 células/μL de sangue segundo classificação CDC (p =0,0272). Quanto a analise do gene BNLF-1, a amplificação foi possível em 99/123 (80,5%). Desses 50/99 (50,5%) apresentavam a deleção de 30pb no gene, enquanto 49/99 (49,5%) não a possuíam. Em conjunto, os resultados obtidos evidenciam deterioração do sistema imunitário, caracterizada...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Expressão do gene Glipican 3 (Gpc3) no urotélio da bexiga de ratos expostos ao diuron (3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea) por 7 dias e 20 semanas

Diuron (3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea) is a substituted urea herbicide widely used in crops of sugar cane, cotton and soybeans. In 1997, this agent has been classified by the United States Environmental Protection Agency as known/likely human carcinogen because it induced tumors in the urinary bladder and renal pelvis of rats, and breast and skin of mice exposed to 2500 ppm for feed for two years. A previous study from our group demonstrated dose-response relationship in the gene expression profile associated with severe necrosis on bladder urothelium and increased incidence of simple hyperplasia in male Wistar rats treated with different concentrations of diuron for 20 weeks. To check how early the molecular changes occurs, rats were fed for 7 days with diets containing diuron at 0, 125, 500 or 2500 ppm. The main observations recorded were urothelium ultrastructural alterations and disruptions of molecular pathways associated with cell-cell interaction and the tissue organization maintenance. Particularly, the gene Glypican 3 (Gpc3), a surface proteoglycan related to cellular adhesion and apoptosis induction, was down regulated on urothelium exposed to 2500ppm diuron for 7 days and 20 weeks. The aim of this study was validate by quantitative RT-PCR real time, the reduced Gpc3 gene expression in epithelial cells of the urinary bladder of male Wistar rats treated with different concentrations of diuron for 7 days and 20 weeks. The endogenous control of the quantitative PCR real time technique was the β-actin gene and the target was the gene Gpc3. The relative quantification (RQ) was obtained by the method of relative quantification 2-ΔΔCt . Animals exposed to diuron for 7 days or for 20 weeks presented reduction of Gpc3 gene expression compared to the control group. This reduction was statistically significant only for the 7 days study. Moreover, by comparing animals exposed for 7 days with the exposed for 20 weeks, it was ...

Arranjo fisico na montagem com fluxo continuo nas superficies de comando composto

Based on the fierce competitiveness of manufacturing companies and the planning problems arising from the lack of flexibility and forecasting demand, companies are increasingly looking to reflect on the most appropriate methods to manage its manufacture. Today it is possible to obtain higher gains and lower costs through very efficient tools, this paper uses action-research to model and implement the physical layout of a manufacturing cell, with strong theoretical basement returned to Lean Production System and acting systematically in flexibility in mounting. Through observation and joint action of the observer and staff can report problems that occurred during the phases of planning and implementation of improvements. With the improvement of the physical arrangement in the assembly was possible to obtain significant gains by reducing the production cycle, the manpower required, spending of non-compliance and increasing productivity, final product quality and health in the workplace

Desenvolvimento de equipamento LED para aplicação em cultura celular

O estágio realizado em parceria entre o Departamento de Física e Biofísica do IBB-UNESP e o Hemocentro de Botucatu da FMB-UNESP teve como objetivo desenvolver um novo equipamento de luz LED capaz de interagir com culturas celulares. Desta forma foi desenvolvido um equipamento com luz azul e luz vermelha. A luz azul é responsável por inibir o crescimento celular, a luz vermelha é responsável por aumentar o crescimento celular. O equipamento consiste de uma fonte, e dois conjuntos com três LEDs cada. A cultura celular escolhida foi a de Miemola Murino (NS1), uma linhagem que possui alta taxa de crescimento e que foi mantida em estufa e meio de cultura, (simulando condições normais de sobrevivência), sendo irradiada três vezes ao dia. As amostras foram coletadas e contadas em câmara de Neubauer. Os resultados obtidos, quando comparados com o controle, não apresentaram significativa diferença de crescimento quando irradiados com luz LED vermelho. Porém quando comparados o grupo controle com o grupo irradiado com LED azul, notou-se uma significativa redução da quantidade de células a partir do sétimo dia de irradiação. Acredita-se que a ineficácia dos LEDs vermelhos ocorreram pois utilizamos células com metabolismo bastante elevado, dificultando um aumento ainda maior da taxa de crescimento. A redução da população de células azuis ocorre pois a radiação interage com a membrana celular, causando a quebra dessa membrana e conseqüente morte da célula. Outra via para a morte é a lesão causada no DNA das células, que ocorre quando a luz azul é absorvida pela molécula

Requalificação urbana em Luanda

O plano inicial é de desenvolver um projeto em uma área com 602.087,50 km2, em um dos bairros da periferia da cidade de Luanda capital de Angola. A idéia principal é de melhorar as condições de moradias, saneamento básico, acesso ao próprio bairro, acesso ao transporte, infra-estrutura urbana e outros. Chamaria este projeto como célula modelo em que futuramente poder-se-ia espelhar ou até mesmo reproduzir para outras áreas adjacentes. Será um projeto de parceria, entre governo, e entidades privadas ou até mesmo financiamento através dos bancos, e o principal objetivo é chegar a um projeto que funcione e que se possa aplicar futuramente. Com base no aprendizado sobre os planos diretores e instrumentos de gestão urbana, adquiridos durante o curso, se vai fazer um projeto adaptado ao sistema ou mesmo à legislação de Angola

Desenvolvimento da antera, microsporogênese e microgametogênese em Juncus L. (Juncaceae, Poales)

O presente trabalho teve o objetivo de estudar o desenvolvimento da antera, incluindo a microsporogênese e microgametogênese, em Juncus micranthus, J. microcephalus e J. tenuis var. dichotomus avaliando caracteres que possam auxiliar na delimitação infragenérica de Juncus e compará-los àqueles disponíveis para o gênero e outras Juncaceae e famílias ciperídeas em Poales. As três espécies de Juncus estudadas apresentaram características comuns como desenvolvimento da parede da antera do tipo monocotiledôneo, endotécio uniestratificado e com espessamento em espiral, camada mediana uniestratificada e efêmera, tapete secretor com células uninucleadas e grãos de pólen dispersos em tétrades tetraédricas, trinucleadas. Como caracteres inéditos no gênero foram observados, apenas em J. microcephalus, grãos de amido no citoplasma das células do endotécio e da célula vegetativa do grão de pólen, em estágio anterior ao desenvolvimento de espessamento no endotécio. A maioria das características embriológicas aqui observadas assemelha-se ao conhecido para a gênero em Juncaceae, corroborando a uniformidade embriológica da família dentre as ciperídeas em Poales

Genotipagem de HLA de classe I e II para seleção de células precursoras dendríticas para estudo da imunobiologia do vírus associado ao Sarcoma de Kaposi (KSHV)

The Kaposi-associated Herpesvirus (KSHV) also known as Human Herpesvirus 8 (HHV-8) is associated with the development of Kaposi’s sarcoma (KS) and others limphoprolipheratives diseases such as Primary Effusion Lymphoma (PEL) and Multicentric Castleman Disease (MCD). Even though the virus is considered lymphotropic, it is able to infect others cell types such as macrophages, dendritic cells, endothelial cells, monocytes and fibroblasts. After infection, KSHV be latent expressing essential viral genes to its maintenance in a infected cell. However, in some circumstances may occur the reactivation of lytic cycle producing new viral particles. K1 protein of KSHV interferes in the cellular signaling inducing proliferation and supporting cellular transformation. K1 is encoded by viral ORF-K1, which shows high variability between different genotypes of KSHV. So far, it is not clear whether different isoforms of K1 have specific immunobiological features. The KSHV latency is maintained under strict control by the immune system supported by an adequate antigen presentation involving Human Leucocyte Antigen (HLA) class I and II. Polymorphisms of HLA class I and II genes confer an enormous variability in molecules that recognize a large amount of antigens, but also can increase the susceptibility to autoimmune diseases. Therefore, the present study aims to genotype HLA class I (A and B) and class II (DR and DQ) from volunteers to identify haplotypes that can provide better response to K1 epitopes of different KSHV genotypes. First of all, 20 volunteers were selected to genotype HLA genes. In our results we observed prevalence of certain HLA class I haplotypes as HLAA1, HLA-A2, HLA-A24, HLA-A26, HLA-B8, HLA-B18 e HLA-B44. After the in silico analysis using BIMAS and SYFPEITHI databases, we observed high scores for epitopes from the B genotype of KSHV, indicating...(Complete abstract click electronic access below)

Análise comparativa do perfil lipídico do plasma seminal associado ao estresse oxidativo

O estresse oxidativo é um dos fatores mais importantes na diminuição da qualidade do sêmen, pois leva a perda da integridade da membrana dos espermatozóides e de danos estruturais ao DNA através da cascata de lipoperoxidação. Os danos funcionais relacionados ao estresse oxidativo como a diminuição da motilidade e da viabilidade do espermatozóide são algumas das principais causas de infertilidade masculina. Ainda, os lipídios que compõe a membrana plasmática são macromoléculas que, além de estarem envolvidas em complexos sistemas biológicos e processos metabólicos da célula, são altamente susceptíveis ao processo de lipoperoxidação desencadeado pelo estresse oxidativo. Neste contexto, este projeto propôs o estudo das alterações no perfil lipídico do plasma seminal que pudessem estar relacionadas ao estresse oxidativo e posterior comparação destes perfis em busca de biomarcadores de infertilidade. Para isso, foram coletadas amostras de sêmen de 116 pacientes que procuraram o setor de Reprodução Humana da Universidade Federal de São Paulo. Estas amostras foram submetidas a técnica de TBARS para quantificação dos produtos finais do estresse oxidativo e separação dos grupos, e em seguida, ao protocolo de extração de lipídios para obtenção dos espectros de massa através da técnica de MALDI (Matrix Assisted Laser Disorption Ionization). Com esta análise foi possível a identificação de 31 lipídeos super representados nos diferentes grupos e que, futuramente, poderão vir a ser utilizados na avaliação da qualidade seminal

Caracterização dos rastros branquiais de Astyanax altiparanae (Characidae) por técnicas histoquímicas e ultramorfológicas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)