Efeito da infecção prévia com Strongyloides venezuelensis no desenvolvimento do diabetes experimental do tipo 1

O diabetes mellitus do tipo 1 (T1D) é uma doença autoimune cujo tratamento é parcialmente eficaz. A terapia existente visa apenas controlar a progressão da patologia através da injeção diária de insulina exógena, portanto, uma alternativa terapêutica ou profilática para a doença é necessária. A indução do T1D por administração de estreptozotocina (STZ) em camundongos C57BL/6 é considerada um modelo bastante adequado para a investigação dessas estratégias. Além disto, vários trabalhos demonstram que o contato com antígenos ambientais pode diminuir ou impedir as manifestações clínicas do T1D e de outras doenças autoimunes. Assim, o objetivo geral desta investigação foi avaliar o efeito da infecção prévia com Strongyloides venezuelensis no desenvolvimento do T1D. Inicialmente, acompanhamos a dinâmica da infecção em camundongos C57BL/6 para a determinação da resposta imune estabelecida na fase de recuperação da infecção, e posteriormente, avaliamos o efeito da infecção no T1D. Durante a fase de recuperação, caracterizada pelo desaparecimento de ovos nas fezes, ocorreu uma resposta imune de padrão misto (Th1/Th2) com predomínio de Th2, caracterizado pela presença de IgG1 e produção significativa de IL-4, IL-5 e IL-10. Este padrão de resposta determinou um efeito protetor discreto no desenvolvimento do T1D, caracterizado por diminuição do percentual de ilhotas com inflamação mais acentuada. Estes resultados mostram, portanto, que a infecção prévia com S. venezuelensis não impediu, de forma significativa, o desenvolvimento de insulite em modelo experimental de diabetes induzido por STZ

Efeito da imunização com BCG no diabetes experimental induzido por estreptozotocina

O Bacilo de Calmette e Guérin (BCG) é utilizado em muitos países como profilaxia contra a tuberculose. Tem sido sugerido que esta vacina possa determinar, através de atividade imunomoduladora, proteção também contra outras patologias como alergia e doenças autoimunes. Entretanto, este assunto é ainda bastante controverso. A proposta desta investigação foi avaliar o efeito da imunização prévia com BCG no desenvolvimento do diabetes experimental do tipo I em camundongos C57BL/6. Para isto foram realizados três protocolos objetivando caracterizar a resposta imune desencadeada por BCG, padronizar o diabetes experimental tipo I e avaliar o efeito do BCG neste modelo de diabetes. A imunização desta cepa de camundongos com BCG determinou produção discreta de IFN- mas produção significativa de IL-10 após estímulo in vitro das culturas com hsp65 recombinante (rhsp65). Os ensaios de padronização indicaram que o protocolo de inoculação de streptozotocina adotado determinou um quadro de diabetes típico caracterizado por glicemia elevada e graus variáveis de insulite. A imunização com BCG antes da indução do diabetes não alterou de forma significativa o peso, os níveis glicêmicos e a intensidade do processo inflamatório. Os resultados obtidos sugerem que nas condições experimentais adotadas, o BCG não alterou o desenvolvimento do diabetes tipo I induzido por STZ em camundongos C57BL/6

Avaliação de concentração de citocinas no soro de pacientes portadoras de lesão intraepitelial escamosa de baixo grau, lesão intraepitelial escamosa de alto grau e carcinoma cervical invasor

A infecção genital por Papilomavírus Humano (HPV) é uma das doenças sexualmente transmissíveis (DST), de origem viral, mais prevalente no mundo. As lesões intraepiteliais escamosas de baixo grau (LIEBG) e de alto grau (LIEAG), assim como carcinoma cervical invasor (CCI), estão associadas à presença do HPV. A resposta imune tem papel importante na infecção pelo HPV na cérvice uterina, sendo as citocinas importantes reguladoras da transcrição viral. Avaliar a concentração de IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-γ e TNF-α no soro de mulheres portadoras de LIEBG, LIEAG e CCI. Foram incluídas no estudo 40 mulheres com diagnóstico histopatológico de LIEBG (n=11), LIEAG (n=10), CCI (n=10) e 9 mulheres com suspeita de doença HPV induzida, mas sem alterações histopatológicas na biópsia do colo do útero (controle), atendidas no Ambulatório de Colposcopia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e no Ambulatório de Ginecologia Preventiva do Hospital Amaral Carvalho, Jaú, SP. O sangue periférico foi colhido por punção venosa e o soro armazenado até o processamento. A dosagem das citocinas no soro foi avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA). A pesquisa de HPV foi realizada empregando-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os dados sócio-demográficos foram obtidos por entrevista no momento da consulta ginecológica. A mediana de idade das pacientes do grupo controle, LIEBG, LIEAG, e CCI foi de 38 (21-69), 32,5 (17-51), 39 (23-65) e 51,5 (29-72), respectivamente. Houve diferença estatisticamente significante de mediana de idade das pacientes do grupo CCI quando esta foi comparada com os demais grupos. Em relação às características das pacientes, 76% eram brancas, 68% relataram união estável, 31% concluíram o 2º grau, 42% eram fumantes, 37% das mulheres relataram 3 ou mais parceiros sexuais durante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Avaliação do efeito terapêutico da associação proteoglicano /vitamina D3 na artrite experimental

A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória crônica de caráter autoimune que compromete as articulações. A maioria das terapias aprovadas para o tratamento desta e outras patologias autoimunes é baseada na inibição global da resposta imune, o que aumenta a susceptibilidade aos agentes infeciosos. O objetivo geral deste projeto foi definir se a associação de vitamina D (VitD3) com o antígeno proteoglicano (PG) é tolerogênica e serve como medida terapêutica. Para isso, utilizamos o modelo de artrite experimental obtido pela imunização de camundongos BALB/c com PG. Inicialmente, os animais foram imunizados com diferentes doses do antígeno específico (PG) na presença de VitD3 para determinação da dose tolerogênica. O potencial terapêutico da estratégia mais tolerogênica foi testado no período pré-clínico da doença, isto é, no período após o aparecimento do nível máximo de anticorpos anti-PG, mas antes das manifestações clínicas da artrite (eritema e edema articular). A eficácia terapêutica foi avaliada através da incidência de artrite e do escore clínico da doença. O possível mecanismo imunológico envolvido no efeito terapêutico foi estudado por avaliação dos níveis de citocinas (IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-10 e IL-17) produzidas por células esplênicas estimuladas in vitro com PG. Analisados em conjunto, os resultados obtidos mostraram que os três procedimentos (PG, VitD3 e PG+VitD3) determinaram efeito terapêutico. Entretanto, a análise mais detalhada, incluindo número de animais com escore clínico maior que oito (escore > 8), início dos sintomas clínicos e escore máximo atingido, sugere que o uso de PG50 (50μg de PG) associado à VitD3 ou o uso isolado de VitD3 foram os procedimentos terapêuticos mais eficazes. A produção mais elevada de IL-10 nestes dois grupos sugere contribuição desta citocina neste efeito terapêutico

Clonagem de sequências codificantes de citocinas felinas para construção de curva padrão para PCR em tempo real

A quantificação de citocinas felinas possibilita uma avaliação do sistema imune do animal em diferentes doenças, permite também a identificação de diferentes fatores que alteram sua secreção, e colabora na compreensão da patogênese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensuração é feita principalmente pelo método de ELISA, mas para os felinos há uma menor disponibilidade de kits específicos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa é utilizar a reação de PCR em tempo real com transcrição reversa (RT-qPCR) para quantificação absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma técnica bastante sensível e específica para analisar a expressão desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequências gênicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padrão para a qPCR. Assim, foi feita extração de RNA de amostras de sangue total de gatos domésticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contaminação por DNA genômico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers específicos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasmídeo comercial, e introduzido em bactérias E. coli cepa DH5. Os clones recombinantes foram sequenciados para confirmar a inserção do fragmento no vetor. As curvas padrão da qPCR foram construídas com cada plasmídeo recombinante numa de 106 a 101 cópias por reação. O sequenciamento mostrou que todos os clones eram semelhantes àqueles encontrados no GenBank. A eficiência das amplificações, baseado no slope das curvas padrão foram: 101,3% para GAPDH, 99,1% para IL-1, 83,2% para IL-6, 94,4% para IL-10, 105,5% para IL-12, 83,4% para IFN- e 83,8% para TNF-. O valor de r2 foi de 0,99 em todas as reações. Dessa forma, com a clonagem dos fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeito das baixas concentrações de agentes antineoplásicos sobre linfócitos humanos de sangue periférico

Our previous studies have shown that low concentrations (noncytotoxics) of antineoplastic agents modulate positively the dendritic cells, favoring their in vitro maturation and improving their antigen presenting function. The effects on colorectal cancer cells (HCT-116) were also investigated and we have observed an increased immunogenicity and susceptibility to cytotoxic T cells. Thereby, this study aimed to investigate the effect of 5-fluorouracil (5-FU) an azacitidine (AZA), in minimum effective and noncytotoxic concentrations on lymphocytes of healthy donors. In this study we have analyzed the cytotoxic effect of drugs at these concentrations as well as the proliferative ability of lymphocytes. In vitro production of IL-10 and IFN-γ has been also evaluated. We have observed that low concentrations of those chemotherapeutic agents are not cytotoxic for lymphocytes. However, the minimum effective concentrations (5-FU: 0,410±0,088 e AZA: 0,757±0,233; p<0, 05) have reduced the cell number. Proliferative activity of allogeneic lymphocytes in a mixed reaction (MLR) was not affected by the treatment. The cytokine production was not affected by the treatments, either. In conclusion, low concentrations of 5-FU and AZA has no deleterious effects on human peripheral blood lymphocytes and seems to be safe for combinatory administration with DC vaccines

Respostas inflamatórias sistêmica, do casco e do cólon menor submetido à distensão em equinos

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Efeito protetor da proteína anti-inflamatória Galectina-1 sobre o processo de uveíte induzida pelo inflamógeno lipopolissacarídeo

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Modelo experimental de conjuntivite alérgica: efeito do tratamento farmacológico com a proteína anti-inflamatória galectina - 1

Pós-graduação em Genética - IBILCE

Efeito das oncoproteínas virais E6 e E7 do HPV-16 na resposta de células T de pacientes com carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Flora intermediária em mulheres em idade reprodutiva: aspectos inflamatórios, atividade de sialidases e carga bacteriana

Pós-graduação em Patologia - FMB

Bidens pilosa L: efeitos protetores na inflamação intestinal

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Antitumor and Anti-Inflammatory Effects of Palladium(II) Complexes on Ehrlich Tumour

Palladium(II) complexes are an important class of cyclopalladated compounds that play a pivotal role in various pharmaceutical applications. Here, we investigated the antitumour, anti-infl ammatory, and mutagenic effects of two complexes: [Pd(dmba)(Cl)tu] (1) and [Pd(dmba)(N3)tu] (2) (dmba = N,N-dimethylbenzylamine and tu = thiourea), on Ehrlich ascites tumour (EAT) cells and peritoneal exudate cells (PECs) from mice bearing solid Ehrlich tumour. The cytotoxic effects of the complexes on EAT cells and PECs were assessed using the 3-(4,5-dimethylthiazol-3-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. The effects of the complexes on the immune system were assessed based on the production of nitric oxide (NO) (Griess assay) and tumour necrosis factor-Į (TNF-Į), interleukin-12 (IL-12), and interleukin-10 (IL-10) (ELISA). Finally the mutagenic activity was assessed by the Ames test using the Salmonella typhimurium strain TA 98. Cisplatin was used as a standard. The IC50 ranges for the growth inhibition of EAT cells and PECs were found to be (72.8 ± 3.23) µM and (137.65 ± 0.22) µM for 1 and (39.7 ± 0.30) µM and (146.51 ± 2.67) µM for 2, respectively. The production of NO, IL-12, and TNF-Į, but not IL-10, was induced by both complexes and cisplatin. The complexes showed no mutagenicity in vitro, unlike cisplatin, which was mutagenic in the strain. These results indicate that the complexes are not mutagenic and have potential immunological and antitumour activities. These properties make them promising alternatives to cisplatin.

Estratégias tolerogênicas antígeno-específicas visando profilaxia e terapia na artrite autoimune experimental

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Modulation of Immune Response by RAGE and TLR4 Signalling in PBMCs of Diabetic and Non-Diabetic Patients

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)