Diagnóstico sorológico da brucelose bovina em animais adultos vacinados com dose reduzida da cepa 19 de Brucella abortus

Com o presente trabalho avaliou-se o uso de dose reduzida da vacina produzida com a amostra 19 de Brucella abortus, em rebanho adulto negativo para a enfermidade, por meio de técnicas de diagnóstico sorológico preconizadas pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal e por um ensaio indireto de imunoadsorção enzimática (ELISA ID). A prova de fixação de complemento detectou 46,77% de positivos, o antígeno acidificado tamponado 67,74%, o 2-mercaptoetanol com soroaglutinação lenta 87,09% e o ELISA ID 100%. A dose reduzida interferiu no diagnóstico sorológico. Nenhuma das técnicas apresentou especificidade adequada para uso em rebanho nestas condições, até 3 meses após a vacinação.

Avaliação das provas de soroaglutinação rápida, soroaglutinação lenta, antígeno acidificado e 2-mercaptoetanol no diagnóstico da brucelose bovina

Avaliaram-se comparativamente as provas de soroaglutinação rápida, soroaglutinação em tubo, 2-mercaptoetanol e antígeno tamponado acidificado no diagnóstico da brucelose bovina. Todas as provas apresentaram boa concordância quando considerada a interpretação preconizada pelo Ministério da Agricultura do Brasil. As provas do antígeno tamponado acidificado e do 2-mercaptoetanol apresentaram alta concordância. Neste sentido, o presente estudo propõe o uso da prova do antígeno tamponado acidificado como triagem para o diagnóstico da brucelose bovina.

A polymerase chain reaction for the detection of Brucella canis in semen of naturally infected dogs

The objective was to evaluate a PCR assay for the detection of Brucella canis in canine semen, comparing its performance with that of bacterial isolation, serological tests and PCR assay of blood. Fifty-two male dogs were examined clinically to detect reproductive abnormalities and their serum was tested by the rapid slide agglutination test, with and without 2-mercaptoethanol (2ME-RSAT and RSAT, respectively). In addition, microbiological culture and PCR assays were performed on blood and semen samples. The findings of the semen PCR were compared (Kappa coefficient and McNemar test) to those of blood PCR, culture of blood and semen, RSAT, and 2ME-RSAT. Nucleic acid extracts from semen collected from dogs not infected with B. canis were spiked with decreasing amounts of B. canis RM6/66 DNA and the resulting samples subjected to PCR. In addition, semen samples of non-infected dogs were spiked with decreasing amounts of B. canis CFU and the resulting suspensions were used for DNA extraction and amplification. of the 52 dogs that were examined, the following tests were positive: RSAT, 16 (30.7%); 2ME-RSAT, 5 (9.6%); blood culture, 14 (26.9%); semen culture, 11 (21.1%); blood PCR, 18 (34.6%); semen PCR, 18 (34.6%). The PCR assay detected as few as 3.8 fg of B. canis DNA experimentally diluted in 444.9 ng of canine DNA (extracted from semen samples of noninfected dogs). In addition, the PCR assay amplified B. canis genetic sequences from semen samples containing as little as 1.0 x 10(0) cfu/mL. We concluded that PCR assay of semen was a good candidate as a confirmatory test for the diagnosis of brucellosis in dogs; its diagnostic performance was similar to blood culture or blood PCR. Furthermore, the PCR assay of semen was more sensitive than the 2ME-RSAT or semen culture. Examination of semen by PCR should be included for diagnosis of brucellosis prior to natural mating or AI; in that regard, some dogs that were negative on serological and microbiological examinations as well as blood PCR were positive on PCR of semen. (c) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

A polymerase chain reaction for detection of Brucella canis in vaginal swabs of naturally infected bitches

A PCR assay for the detection of Brucella canis in canine vaginal swab samples was evaluated, comparing its performance with that of bacterial isolation, serological tests, and a blood PCR assay. One hundred and forty-four female dogs were clinically examined to detect reproductive problems and they were tested by the rapid slide agglutination test, with and without 2-mercaptoethanol (2ME-RSAT and RSAT, respectively). In addition, microbiological culture and PCR were performed on blood and vaginal swab samples. The results of the vaginal swab PCR were compared to those of the other tests using the Kappa coefficient and McNemar test. of the 144 females that were examined, 66 (45.8%) were RSAT positive, 23 (15.9%) were 2ME-RSAT positive, 49 (34.02%) were blood culture positive, 6 (4.1%) were vaginal swab culture positive, 54 (37.5%) were blood PCR positive, 52 (36.2%) were vaginal swab PCR positive, and 50.69% (73/144) were positive by the combined PCR. The PCR was able to detect as few as 3.8 fg of B. canis DNA experimentally diluted in 54 ng of canine DNA, extracted from vaginal swab samples of non-infected bitches. In addition, the PCR assay amplified B. canis genetic sequences from vaginal swab samples containing 1.0 x 10(0) cfu/mL. In conclusion, vaginal swab PCR was a good candidate as a confirmatory test for brucellosis diagnosis in bitches suspected to be infected, especially those negative on blood culture or blood PCR; these animals may be important reservoirs of infection and could complicate attempts to eradicate the disease in confined populations. (C) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

Fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em ovinos e caprinos no estado de Pernambuco

Objetivou-se com este estudo investigar a participação de Toxoplasma gondii em falhas reprodutivas em pequenos ruminantes de criatórios situados na Zona da Mata e no Agreste do Estado de Pernambuco e que apresentavam histórico de distúrbios reprodutivos. Foram selecionadas 12 propriedades das quais se coletaram amostras de 262 animais, sendo 167 caprinos e 95 ovinos. Realizou-se a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, utilizando-se a técnica da Imunofluorescência Indireta (RIFI). Foram aplicados questionários investigativos nas propriedades visitadas para identificar os fatores de risco associados à infecção. em 100% das propriedades foram encontrados animais soropositivos. Para T. gondii, das 167 amostras de soro caprino analisadas, 31,7% foram positivas, enquanto que na espécie ovina, das 95 amostras, 16,9% foram positivas. Para a espécie ovina, não foram observadas associações significativas. Para os caprinos, houve associação significativa (p<0,05) para as variáveis: manejo intensivo (OR=2,40), exploração leiteira (OR=2,10), animais procedentes de outros estados (OR=7,89) e monta natural (OR=5,69). Conclui-se que a infecção pelo T. gondii encontra-se disseminada nos rebanhos de caprinos e ovinos estudados e que medidas sanitárias devem ser adotadas para controlar os fatores de risco identificados neste estudo.

Soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação do teste do anel em leite na vigilância epidemiológica da brucelose bovina em rebanhos e em laticínios

Analisaram-se 464 amostras individuais de leite e 54 amostras de leite de latões, oriundos de leite dos mesmos animais, por meio do teste do anel do leite (TAL) visando à sua aplicação no diagnóstico individual e de rebanhos da brucelose bovina. Foram também avaliadas 464 amostras de soro sangüíneo por meio de provas do antígeno tamponado acidificado (ATA), soroaglutinação lenta em tubos (SAL) e 2-mercaptoetanol (2-ME), todas para brucelose. Cento e vinte e três amostras (26,5%) testadas pelo TAL apresentaram resultados positivos. Dessas, 30 resultaram positivas ao ATA, 28 ao ATA, à SAL e ao 2-ME e 18 à SAL. Das amostras positivas ao TAL, 95 pertenciam a animais sorologicamente negativos ao 2-ME, caracterizando 77,2% (95/123) das reações falso-positivas; dos resultados negativos ao TAL, 4 pertenciam a animais sorologicamente positivos, caracterizando 1,2% (4/341) de reações falso-negativas no TAL individual. Das 54 amostras de leite de latões analisadas pelo TAL, 17 foram consideradas positivas, das quais uma foi caracterizada como falso-positivo, pois todos os animais que a compunham foram negativos ao 2-ME. de 37 latões considerados negativos ao TAL, três continham leite de animais positivos ao 2-ME, caracterizando 8,1% de falso-negativos. O TAL individual demonstrou elevado percentual de resultados falso-positivos, enquanto o TAL em amostras de leite obtidas em latões detectou 84,2% de latões contaminados e 75% de rebanhos infectados.

Comparison of infection by Brucella spp. in free-ranging and captive wild animals from São Paulo State, Brazil

The aim of the current study was to evaluate the infection rate by Brucella spp. in wild and in captive animals. Serum samples from 121 animals (94 free-ranging and 27 captive) of different mammal species were evaluated. Sera were submitted to rose Bengal test (RBT) for screening and serum agglutination tests (SAT) and 2-mercaptoethanol test (2-ME) for confirmatory results. Nine animals (five free-ranging and four captive) tested positive in RBT, but negative in the confirmatory tests. Several domestic animal diseases that have control programs are not focused on wild reservoirs, such as brucellosis in Brazil. The study of new reservoirs in wildlife is essential to prevent emerging diseases.

Serological profile of buffalo (Bubalus bubalis) female calves vaccinated with standard Brucella abortus strain 19 vaccine using rose bengal, 2-mercaptoethanol and complement fixation tests

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Rapid serum agglutination and agar gel immunodiffusion tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Emerging infectious diseases in cetaceans worldwide and the possible role of environmental stressors

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Imunodifusão em gel de ágar com polissacarídeos de membrana de Brucella abortus 1119-3 no diagnóstico da brucelose bovina

Comparou-se a prova de imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando extrato polissacarídico (POLI O), obtido da amostra de B. abortus 1119-3, com os testes de soroaglutinação rápida em placa, de soroaglutinação lenta em tubos, de antígeno acidificado e de 2-mercaptoetanol para o diagnóstico da brucelose bovina. O IDGA mostrou alta especificidade, porém sensibilidade inferior aos métodos convencionais.

Aglutininas anti-Brucella abortus no soro e em secreção de bursite cervical em eqüinos

Fistulous wither secretions from three horses were tested by the plate agglutination (PAT), tube agglutination (SAT), buffered plate-Rose Bengal (RBPT) and 2-mercaptoethanol (2-ME) tests, comparatively with standard agglutination tests. In the modified tests, titers were increased in the PAT, SAT and 2-ME tests and positive reaction was observed in RBPT. Brucella abortus was isolated from the secretion of fistulous withers collected from one animal. These results suggest that the modified tests may be used as alternative tests to diagnose brucellosis in horses with fistulous withers.

Perfil sorológico, isolamento bacteriano e valores hematológicos e urinários em cães naturalmente infectados com Brucella canis

Descrevem-se os parâmetros hematológicos, urinários, perfil sorológico de aglutininas antibrucélicas e resultados de isolamento bacteriano de swab vaginal, líquido prostático e hemocultura de 12 cães naturalmente infectados por Brucella canis. Observaram-se flutuação dos resultados sorológicos, ausência de isolamento de B. canis nos diversos materiais colhidos e valores hematológicos e urinários predominantemente normais. Discute-se o diagnóstico de brucelose canina em nível individual.

Uso da ciclofosfamida em modelo de imunodepressão experimental em ovinos

Cyclophosphamide (CY) was used to evaluate the effect on the immune system of sheep. Castred adult rams were divided into 3 groups, with 6 animals each one. Group I (day 0) and Group II (day 1) were treated with CY (40 mg/kg, single dose, IV), and Group III was not treated and remained as control. All groups were immunized on day 0 with B19 brucellosis vaccine. on day 6, all animals were bled and serum agglutination test for brucellosis antibodies detection was performed. During 7 days blood lymphocyte counts and electrophoresis gammaglobulin dosage were daily performed. The results showed statistical decrease of immune response. Low serum titers of brucellosis antibodies were found in Groups I and II, and lymphopenia and hypogammaglobulinemia were also found in these groups. A high mortality rate (40%) occurred in the treated animals.