Preparation of polymeric micelles for use as carriers of tuberculostatic drugs

Purpose: This paper focuses on the characterization of polymeric micelle-forming tuberculostatic prodrugs and the antimycobacterial activity of these prodrugs.Method: By the condensation of hydroxymethylpyrazinamide, isoniazid and rifampin with free carboxyl groups on the copolymer poly(ethyleneglycol)-poly(aspartic acid), micelle-forming carrier-drug conjugates were obtained. These micelles were characterized by dynamic light scattering, to measure the micelle diameter; by acid-base titration, to determine the percentage of carboxylic groups occupied by the tuberculostatic; by Sudan III solubility tests, to estimate the critical micelle concentration (CMC); and visual control and spectrophotometric measurement, to determine the stability of micelles. These micelles were tested in vitro against several Mycobacterium strains.Results: As expected, the size and distribution of the micelle-forming tuberculostatic prodrugs found to be small (78.2nm, 84.2nm and 98.9 nm) while the level of the drug conjugated was high (65.02-85.7%). Furthermore, the micelles were stable in vitro, exhibiting a low level of CMC and stronger antimycobacterial activity than the original drugs.Conclusion: the results demonstrate that polymeric micelles can be used as efficient carriers for drugs, which alone, exhibit undesired pharmacokinetics, poor solubility, and low stability. The synthesized micelle-forming tuberculostatic prodrugs opens a perspective of alternative prodrugs that prolong action and decrease the toxicity of the tuberculostatic drugs of choice.

A first case of protease codon 35 amino acid insertion in a HIV-1 subtype B sequence detected in the Bauru region, state of São Paulo, Brazil: case report

Inserções de aminoácidos na protease têm sido raramente descritas em pacientes infectados pelo HIV. Uma destas inserções foi, recentemente, descrita no codon 35, embora seu impacto na resistência mantém-se pouco conhecido. Este trabalho apresenta um caso de uma variante viral com inserção no codon 35 da protease, descrita pela primeira vez em Bauru, São Paulo, Brasil, circulante em um homem, caucasiano, com 38 anos, o qual apresenta infecção assintomática pelo HIV desde 1997. A variante isolada mostrou uma inserção no codon 35 da protease de dois aminoácidos: uma treonina e um ácido aspártico, resultando na sequência de aminoácidos E35E_TD.

Digestibilidade aparente do triticale para a tilápia-do-nilo

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Tritrichomonas fetus extracellular products decrease progressive motility of bull sperm

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Phylogenetic analysis of PRP8 intein in Paracoccidioides brasiliensis species

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Giardia duodenalis: protein substrates degradation by trophozoite proteases

The present investigation was undertaken to identify and characterize trophozoite proteases of five axenic strains of Giardia duodenalis isolated in Brazil and the reference strain Portland 1 isolated in the United States. Trophozoite cell lysates of each strain were analysed for the pattern of proteins and for proteolytic activity. Samples were tested in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis for the protein profiles, and the detection of proteases in cell lysates was performed using substrate gel electrophoresis [gelatin, collagen, bovine serum albumin (BSA) and haemoglobin] and azocasein assays. Indeed, synthetic inhibitors were included in the assays to characterize the protease classes. Differences on the hydrolysis patterns of protein substrates were observed in relation to the substrate composition as much as the Giardia trophozoite strain. The substrate-containing gels revealed hydrolysis bands with molecular masses ranging from > 97 to 20-15 kDa, and most zones were common to the five strains. However, some pronounced differences could be detected in the BTU-11 pattern. Azocasein was also degraded; however, depending on the lysate assayed, the degree of substrate degradation was variable. It was observed that inhibitory effects are substrate-dependent since the activity was predominantly due to cysteine proteases against gelatin, collagen, BSA and azocasein substrates and due to serine against haemoglobin. The presence of aspartic protease and aminopeptidase activity in the lysates was also indicated.

Partial characterization of proteolytic activity in Giardia duodenalis purified proteins

O presente estudo consiste em uma caracterização preliminar da atividade proteolítica de frações de proteínas purificadas a partir de lisados de trofozoítos de cepa isolada e axenizada no Brasil. Frações obtidas por cromatografia líquida (FPLC) foram analisadas quanto ao perfil eletroforético em géis de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a atividade proteolítica foi avaliada em géis contendo gelatina como substrato. A caracterização das enzimas foi realizada a partir da análise do efeito de inibidores sintéticos de cisteína-proteases (E-64, IAA), serina-proteases (PMSF), serina e cisteína-proteases (TPCK, TLCK, elastatinal), metalo-proteases (EDTA) e aspartil proteases (pepstatina) sobre a degradação do substrato. Entre 30 frações eluídas, bandas de proteínas foram observadas em oito delas, entretanto, atividade proteolítica foi detectada apenas nas frações 23, 24, 25 e 26. O perfil eletroforético das proteínas revelou poucas bandas distribuídas na faixa de 45 a 18 kDa. Os zimogramas revelaram zonas de proteólise na faixa de aproximadamente 62 a 35 kDa, entretanto destacaram-se as bandas de hidrólise de 62, 55, 53, 50, 46 e 40 kDa. Nos ensaios de inibição, a proteólise foi marcantemente inibida por E-64, TPCK, TLCK e elastatinal. Redução discreta da proteólise foi observada com IAA e PMSF, enquanto que EDTA e pepstatina não promoveram alteração dos perfis de hidrólise. Estas observações são relevantes, especialmente se considerarmos que para elucidar o envolvimento das proteases na relação parasita-hospedeiro, a purificação dessas moléculas é um requisito importante.

Quantitative comparisons and models of time-averaging in bivalve and brachiopod shell accumulations

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Purification and some properties of an extracellular acid protease from Aspergillus clavatus

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Production and characterization of a milk-clotting protease in the crude enzymatic extract from the newly isolated Thermomucor indicae-seudaticae N31 (Milk-clotting protease from the newly isolated Thermomucor indicae-seudaticae N31)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

At the interface: Crystal structures of phospholipases A(2)

The protein content of many snake venoms often includes one or more phospholipases A(2) (PLA(2)). In recent years a growing number of venoms from snakes of Agkistrodon, Bothrops and Trimeresurus species have been shown to contain a catalytically inactive PLA(2)-homologue in which the highly conserved aspartic acid at position 49 (Asp49) is substituted by lysine (Lys49). Although demonstrating little or no catalytic activity, these Lys49-PLA(2)s disrupt membranes by a Ca2+-independent mechanism of action. In addition, this family of PLA(2)s demonstrates myotoxic and cytolytic pharmacological activities, however the structural bases underlying these functional properties are poorly understood. Through the application of X-ray crystallography in combination with biophysical and bioinformatics techniques, we are studying structure/function relationships of Lys49-PLA(2)s. We here present results of a systematic X-ray crystallographic and amino acid sequence analysis study of Lys49-PLA(2)s and propose a model to explain the Ca2+ independent membrane damaging activity. (C) 1998 Elsevier B.V. Ltd. All rights reserved.

New Insight into the Mechanism of Action of Wasp Mastoparan Peptides: Lytic Activity and Clustering Observed with Giant Vesicles

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Alkyl Hydroxybenzoic Acid Derivatives that Inhibit HIV-1 Protease Dimerization

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Protease inhibition activity of extracts from Salicaceae species from Brazilian Cerrado and Atlantic Rain Forest and of an enriched fraction of clerodane diterpenes (casearins)

Considerando o uso popular de Casearia sylvestris Sw., Salicaceae, para o tratamento de problemas gástricos e resultados pré-clínicos que mostraram potencial atividade anti-ulcerogênica, foi realizado um screening farmacológico para avaliar a atividade biológica de outras espécies de Salicaceae. Para isso, foi utilizado um ensaio de inibição de proteases como um modelo farmacológico molecular para screening de extratos com atividade anti-ulcerogênica. Os extratos etanólico e aquoso dos galhos e folhas de C. gossypiosperma, C. decandra e C. rupestris mostraram inibição da atividade da pepsina em aproximadamente 50% com a concentração de 1 μg/mL. Curiosamente, C. obliquoa e Flacourtia ramontchi não apresentaram atividade sobre a pepsina, mas seus extratos mais apolares mostraram atividade inibitória sobre a subtilisina. A fração enriquecida de diterpenos clerodânicos mostrou atividade inibitória (42,75%) sobre a pepsina com a concentração de 1 μg/mL, mas não sobre a subtilisina (23,76%). Os resultados obtidos com os extratos e folhas das espécies testadas mostraram um padrão de atividade diferente sobre os dois tipos de proteases, a pepsina e a subtilisina, as quais estão relacionadas com diferentes tipos de atividades biológicas. Ainda mais, os resultados com a fração enriquecida de diterpenos clerodânicos sugerem que estas substâncias podem estar relacionadas com a atividade do extrato bruto de C. sylvestris.

Production and partial characterization of serine and metallo peptidases secreted by Aspergillus fumigatus Fresenius in submerged and solid state fermentation

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)