Produção de hidrolisado enzimático de farinha de batata-doce para fermentação etanólica

Recently there is a great quest of producing alcohol from starchy resources, replacing the sugar cane. The most common starchy sources are cassava, maize and sweet potatoes and a lot of research are been realized with excellent results. In this work it was evaluated the influence of the concentration of dry matter on the enzymatic hydrolysis process of starch from sweet potato for ethanol production. Through the sweet potato was produced a flour using a low-cost method and easy operation equipments. The sweet potato flour was characterized physical and chemically and from these results was prepared the treatments for enzymatic hydrolysis. The experimental design considered as independent variable the dry matter concentration of the sweet potato flour in 3 levels; 10, 15 and 20% in the formulation of suspensions. The other variables were keeping constant being: temperature in the 1° hydrolysis step of 90°C and time of 2 hours; temperature in the 2° saccharification step of 60°C and time of 17 hours. The hydrolysates obtained at the three assays were transferred to six liter enlerynmeyer and inoculated with a biologic catalyst, Saccharomyces, dehydrated yeasts of Saccharomyces cerevisiae CAT 1, at a rate of 5% in weight. The flasks were placed in a shaker type orbital with controlled temperature of 30°C during a time of 15 hours. The initial reducer sugars concentration and respective ethanol concentrations in wine were: 11.2% glucose and 2.16% ethanol in the suspension with 10% of dry matter; 13.5% glucose and 4.39% ethanol with 15% and 17.5% glucose and 6.03% ethanol in suspension with 20% of dry matter. ix The results showed that the higher percentage of dry matter carried out to higher sugar yield in hydrolyzed. It was possible observed that products quality improved with a higher concentration of dry matter

Atividade imunomoduladora de parasporina de Bacillus thuringiensis sobre linfócitos e monócitos humanos

Bacillus thuringiensis is an environmental bacteria that produces a group of crystallizable proteins (Cry) that are toxic for several insects and worms species. Recently, it was described a novel class of Cry proteins called parasporins (PS) that showed cytotoxic effects on animal and human tumor cells. Six types of PS have been described so far, PS1 to PS6, and their cytotoxic activity has been studied. However, the direct effect on tumor cells has been the current research focus, while the immunomodulatory role of the PS has not been studied yet. Therefore, this study aimed to verify whether PS of TC 2.3.1R6 B. thuringiensis strain has immunostimulatory activity on human lymphocytes and monocytes. We have evaluated the protein toxicity against human cells, the lymphoproliferative activity and the effects on peripheral blood monocytes. The PS-PK showed no toxic or stimulating activity on lymphocyte proliferation. However, it inhibited the spontaneous production of IL-10 as well as ConA-induced and the production of IFN-γ. PS-PK decreased the release of hydrogen peroxide and increased the production of TNF- α by monocytes. PS-PK performed inhibitory production of hydrogen peroxide and TNF-α by monocytes, whereas PS-Tp showed stimulation of the production of hydrogen and TNF-α

Desenvolvimento e validação de método bioanalítico por difusão em ágar para determinação da potência do fenticonazol creme vaginal

O nitrato de fenticonazol é um derivado imidazólico de amplo espectro de ação contra patógenos dermatófitos, como Malassezia furfur e leveduras, a principal delas Candida albicans. É necessário que se possa garantir a qualidade dos medicamentos produzidos. O controle de qualidade é uma ferramenta que assegura a qualidade, eficácia e segurança desses produtos até o momento de sua utilização e faz-se necessário que métodos analíticos sejam desenvolvidos e validados para o doseamento desses fármacos. A grande importância dos métodos microbiológicos utilizados no controle de qualidade de fármacos com atividade antimicrobiana é demonstrar sua atividade biológica por meio de seu efeito inibitório no crescimento de micro-organismo. A diminuição da atividade antimicrobiana ou potência pode indicar alguma alteração sutil na molécula, que é pouco detectável em um método analítico físico-químico. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar o método microbiológico difusão em ágar para o produto nitrato de fenticonazol creme vaginal. O método de difusão em ágar foi desenvolvido utilizando meio de cultura ágar Sabouraud e cepa de Candida albicans ATCC 64548 como micro-organismo teste. Para o ensaio foi utilizado o delineamento 3 x 3, conforme preconiza a Farmacopeia Brasileira (2010). A validação do método proposto demonstrou linearidade entre os diâmetros dos halos de inibição e o logaritmo da concentração na faixa de 50,0 a 200,0 μg/mL. O método obteve resultados precisos e lineares com r2=1. A exatidão foi comprovada pelo intervalo de tolerância de 98,83%, dentro dos limites permitidos. O método foi validado de maneira satisfatória, podendo ser utilizado em análises do Controle de Qualidade deste fármaco.

Avaliação do metabolismo oxidativo em cepas de Trypanosoma cruzi naturalmente resistentes ao benzonidazol

O agente etiológico da doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, é responsável pela infecção de milhões de pessoas na América Latina. No momento há apenas dois fármacos disponíveis, o nifurtimox (5-nitrofurano), teve o uso descontinuado no Brasil, e o benzonidazol (2-nitroimidazole), embora ambos possuam ações limitadas, visto que dependem da fase da doença, das condições fisiológicas do hospedeiro, da suscetibilidade e variabilidade genética da cepa. Assim, a busca de novas moléculas torna-se urgente e necessária, bem como a compreensão do mecanismo de resistência aos fármacos tripanocidas. Alguns estudos relatam aumento na produção de enzimas que atuam na defesa celular, as quais, provavelmente, poderiam ser responsáveis pela resistência de certas cepas do parasita. Tais enzimas têm funções importantes na sobrevivência e crescimento dos parasitas: superóxido dismutase (SOD), uma metaloenzima que elimina radicais superóxido ao convertê-los em peróxido de hidrogênio e oxigênio molecular; old yellow enzyme (OYE), que é uma NADPH flavina oxidoredutase e pode estar envolvida na redução de substâncias tripanocidas; e, peroxiredoxina (Prx), que catalisa a redução de peróxidos. O objetivo deste projeto é avaliar a suscetibilidade de diferentes cepas ao benzonidazol, clonar, sequenciar e expressar enzimas possivelmente envolvidas na resistência a este fármaco e realizar análises morfológicas serão nos parasitos após serem expostos à substância em questão. Futuramente os anticorpos policlonais obtidos a partir das proteínas recombinantes de Prx, SOD e OYE serão empregados para avaliar o nível de expressão das mesmas em parasitas tratados e não tratados com o benzonidazol.

Comportamento de Escherichia coli produtora de toxina de Shiga em meios ácidos

Escherichia coli é uma bactéria Gram-negativa, pertencente à família Enterobacteriaceae, que habita o intestino de animais de sangue quente, com 90% sendo comensais para o ser humano e 10% patogênicas. Quando presente em alimentos esse grupo é considerado um bom indicador higiênico-sanitário de alimentos. Em alimentos, a cepa patogênica mais estudada é E. coli produtora de toxina de Shiga (STEC) O157:H7. Entretanto, muitos casos vêm ocorrendo em todo o mundo devido a cepas patogênicas não O157, como O103, O111, O145 e O26. As STECs são responsáveis por desde uma simples diarréia até diarréia sanguinolenta que pode evoluir ainda para síndrome hemolítica urêmica e púrpura trombótica trombocitopênica, que podem ocasionar danos crônicos como falência renal. A transmissão destas cepas se deve a carnes mal cozidas, leites e derivados não pasteurizados, água e vegetais contaminados. Uma característica interessante de E. coli O157:H7 é o seu mecanismo de resistência ao estresse ácido – ácido tolerância – de modo que os alimentos ácidos não podem mais ser considerados seguros contra tais organismos. A fim de ampliar o conhecimento acerca das cepas não O157 e dos mecanismos de ácido resistência, este trabalho teve por objetivo verificar o comportamento de linhagens de STEC não O157:H7 submetidas às condições de estresse de baixo pH utilizando para tanto meios de cultura acidificados e polpas de frutas como matriz alimentar. Constatou-se que quando mantidas em condições-controle e as ácido-adaptadas mantêm populações da ordem de 2 a 3 log UFC/mL quando em polpas de frutas sabor cajá (pH 2,3) e tamarindo (pH 2,3) armazenadas a 4 C por até 30 dias

Atividade in vitro do extrato hidroalcoólico da casca de Astronium fraxinifolium (Anacardiaceae) sobre trofozoítos de Giardia duodenalis

As investigações conduzidas para avaliar novas substâncias para o tratamento da giardíase justificam-se pelo fato dos medicamentos convencionais apresentarem inconvenientes relacionados à toxicidade, à resistência e aos custos. Diante disso, a busca por novas alternativas terapêuticas tem despertado grande interesse, principalmente, entre os extratos de plantas, produtos complexos com diferentes atividades biológicas e farmacológicas. Considerando que nas infecções por Giardia, a diarréia é um dos principais sintomas, tem sido crescente o interesse em se investigar o efeito de extratos de plantas com atividade antidiarréica. Com isso, o presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar in vitro o efeito do extrato hidroalcoólico da casca da planta Astronium fraxinifolium, espécie típica do Cerrado brasileiro e empregada na medicina popular no tratamento contra inflamações, diarréias e úlceras gástricas. Para este fim, avaliou-se a atividade sobre o crescimento e aderência de trofozoítos de cepa autóctone de Giardia duodenalis isolada e axenizada em Botucatu, São Paulo. Em todos os ensaios, 105 trofozoítos da cepa BTU-11 foram inoculados em tubos contendo 4,5ml de meio TYI-S-33 e 100μl do extrato nas concentrações de 125; 250; 375 e 500 μg/ml. Para avaliar a atividade sobre o crescimento, os parasitas foram incubados com o extrato durante 24, 48 e 72 horas a 37°C. Nos experimentos que verificaram o efeito sobre a aderência, somente os parasitas aderidos às paredes dos tubos foram incubados com o extrato, durante 24 e 48 horas a 37°C. Em cada ensaio, os trofozoítos recuperados foram contados em câmara de Neubauer e a atividade sobre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Influência da fonte alimentar na infecção de triatomíneos por Trypanosoma cruzi

Embora a doença de Chagas seja amplamente estudada, ainda não se conhece todos os interferentes que modulam a relação parasitária Trypanosoma cruzi- vetor- hospedeiro vertebrado. Sabe-se que as aves são refratárias ao T. cruzi, ou seja, o parasito não consegue estabelecer parasitismo nas mesmas, enquanto que nos camundongos a infecção ocorre. Essa refratariedade representa um exemplo de resistência natural do hospedeiro a uma infecção parasitária. Originalmente, acreditava-se que isso ocorria devido à presença de um anticorpo natural contra o T. cruzi no sangue das aves, porém estudos atuais atribuem tal atividade ao sistema complemento presente no sangue das mesmas. Pretendeu-se avaliar neste projeto se a referida característica peculiar do sangue das aves interfere no processo e no nível de infecção dos triatomíneos, em especial de Rhodnius neglectus, espécie de comprovada importância epidemiológica. Para tanto, utilizou-se a cepa Y de T. cruzi e ninfas de 4º estádio de R. neglectus. Avaliou-se também a capacidade lítica do soro de galinha em formas epimastigotas e tripomastigotas em meio de cultura LIT, utilizando a cepa Y. Referente à influência de diferentes fontes alimentares na infecção de R. neglectus por T. cruzi, observou-se um decréscimo no número de exemplares infectados após alimentação em patos , apresentando Índice de Infecção médio de 19,74%. Por outro lado, exemplares infectados após alimentação em camundongos não apresentaram diferença significante na parasitemia total. Os testes in vitro demonstraram que a adição de soro de galinha em meio de cultura LIT, com formas epimastigotas e tripomastigotas, foi capaz de diminuir notoriamente a contagem de parasitos móveis até a contagem zero, uma hora após a adição. O conjunto desses resultados sugere que a refratariedade das aves ao T. cruzi influencia a infecção de R. neglectus pelo flagelado e foi demonstrada, in vitro, pela ...

Avaliação da atividade antifúngica de extrato de Plinia cauliflora e Endopleura uchi

O uso indiscriminado dos medicamentos sintéticos e a própria evolução dos micro-organismos selecionou espécies extremamente resistentes aos agentes químicos utilizados. Para contornar tal situação e ampliar o arsenal de compostos ativos contra micro-organismos, o estudo de plantas tornou-se uma necessidade crescente. A utilização de fitoterápicos na prevenção e/ou cura de doenças são necessários estudos prévios relativos a aspectos botânicos, farmacognósticos, fitoquímicos, farmacológicos e toxicológicos. Neste trabalho, foram estudados extratos obtidos com as folhas de Plinia cauliflora (Mart.) Kausel e de cascas pulverizadas de Endopleura uchi (Huber) Cuatrec., quanto às propriedades antimicrobianas frente a diferentes linhagens de fungos: Aspergillus niger, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Trichoderma reesei e Trichophyton rubrum. Foram avaliadas as atividades antifúngicas dos materiais vegetais determinando sua Concentração Inibitória Mínima (CIM). Com base nesses dados foi realizada a avaliação da atividade antifúngica observando o crescimento radial dos fungos em placas de Petri contendo meio de cultura incorporado com os materiais vegetais nas concentrações de CIM e 1%, sendo após realizada a mensuração dos diâmetros formados. Trichophyton rubrum foi o micro-organismo que apresentou maior sensibilidade frente ao extrato e as frações de P. cauliflora, com valores de CIM baixos, enquanto que a cepa industrial de Aspergillus niger mostrou-se totalmente resistente a todos os extratos testados. A determinação da atividade antifúngica em placas contendo meio sólido, mostrou uma confirmação dos resultados pois o extrato etanólico, a fração butanólica e a fração aquosa de P. cauliflora, tanto na concentração 1% quanto na obtida pelo CIM, inibiram o crescimento T. rubrum

Produção de biofilme por bastonetes gram negativos isolados de água de hemodiálise

No Brasil, 90% de pacientes com insuficiência renal crônica ou aguda dependem dos procedimentos de hemodiálise para remover produtos de degradação metabólica, excesso de água e de sais minerais do organismo, a fim de restaurar o equilíbrio ácido-base e eletrolítico. Entretanto, o processo de osmose reversa, que visa remover todos os íons da água, também remove o cloro, que exerce efeito bacteriostático sob diversas bactérias autóctones, que passam a se multiplicar na água. Entre os principais grupos dessas bactérias, estão os bastonetes Gram negativos não fermentadores (BGN) e os mais frequentemente associados a bacteremias, em pacientes de hemodiálise são Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia. Essas bactérias podem produzir biofilmes, o que torna sua eliminação do encanamento quase impossível. Assim, o objetivo do trabalho foi a análise de água e do dialisato, da Unidade de Hemodiálise de um Hospital Universitário, na pesquisa dos três BGNs citados. Também foram utilizadas 42 cepas previamente isoladas do mesmo local. Entre as 67 amostras de água, foram isoladas 8 cepas de Pseudomonas aeruginosa e as 50 cepas foram submetidas à pesquisa do gene rpoS, um dos responsáveis pela produção de biofilme. Esse gene foi observado em 20 (40%) cepas, sendo 16 (80%) P. aeruginosa, seguida por 3 (15%) cepas de S. maltophilia e 1 (5%) de B. cepacia. Essas cepas foram submetidas à produção de biofilme a 35ºC (temperatura ótima de crescimento) e a 20ºC (temperatura média da água no encanamento da Unidade de Hemodiálise), em aço inoxidável (material de muitos instrumentos cirúrgicos), PVC (matéria prima da tubulação) e plástico de poliestireno (capacidade de produção de biofilmes em diferentes materiais). Em poliestireno, somente 1 (5%) cepa de P. aeruginosa produziu biofilme a 35ºC e a 20ºC, 2 (10%) cepas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeito da adição de inulina no crescimento, resistência gastrintestinal e capacidade de remoção de colesterol de Lactobacillus helveticus 416 e Enterococcus faecium CRL 183

O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito da adição de um prebiótico nas características de crescimento, resistência às condições do trato gastrintestinal e remoção de colesterol in vitro, das cepas de Enterococcus faecium CRL183 e Lactobacillus helveticus 416. A fonte de prebiótico foi composta por Inulina GR – Orafti, sendo testadas as seguintes concentrações: 1,0%, 2,0%, 3,0%; 4,0%; 5,0% e 6,0% p/v). Para a avaliação da resistência às condições do trato gastrintestinal, os microrganismos foram colocados em contato com um fluido gástrico simulado por 2 horas (9g/L de NaCl, 3g/L de pepsina, pH 1,8) e com um fluido intestinal simulado por 3 horas (0,9g/L de pancreatina, 12,5g/L de bicarbonato de sódio e 6,0 g/L de Oxgall). Após o período de contato com os fluidos, foram realizadas diluições seriais e plaqueamento em meios específicos. No estudo de redução de colesterol, meios de cultura contendo inulina e colesterol (1%) foram inoculados com as cepas probióticas e incubados em anaerobiose a 37°C/24h. A capacidade de redução do colesterol foi determinada pela diferença entre a concentração de colesterol adicionada ao meio de cultura e a de colesterol residual. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste de médias de Tukey (p≤0,05). A adição de inulina não resultou em alteração no ciclo logarítmico de crescimento dos microrganismos. Porém, quando os dados foram submetidos à análise estatística, constatou-se que a adição de 1% a 4% de inulina inibiu o crescimento de Lactobacillus helveticus 416, sendo que para as concentrações de 5% a 6% estas alterações não foram perceptíveis. A cepa de Enterococcus faecium CRL 183 apresentou crescimento superior na presença de 2% e 4% de inulina. Após o contato com o fluido gástrico simulado, observou-se redução de 1 ciclo logarítmico no crescimento da cepa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Efeito da imunização com BCG no diabetes experimental induzido por estreptozotocina

O Bacilo de Calmette e Guérin (BCG) é utilizado em muitos países como profilaxia contra a tuberculose. Tem sido sugerido que esta vacina possa determinar, através de atividade imunomoduladora, proteção também contra outras patologias como alergia e doenças autoimunes. Entretanto, este assunto é ainda bastante controverso. A proposta desta investigação foi avaliar o efeito da imunização prévia com BCG no desenvolvimento do diabetes experimental do tipo I em camundongos C57BL/6. Para isto foram realizados três protocolos objetivando caracterizar a resposta imune desencadeada por BCG, padronizar o diabetes experimental tipo I e avaliar o efeito do BCG neste modelo de diabetes. A imunização desta cepa de camundongos com BCG determinou produção discreta de IFN- mas produção significativa de IL-10 após estímulo in vitro das culturas com hsp65 recombinante (rhsp65). Os ensaios de padronização indicaram que o protocolo de inoculação de streptozotocina adotado determinou um quadro de diabetes típico caracterizado por glicemia elevada e graus variáveis de insulite. A imunização com BCG antes da indução do diabetes não alterou de forma significativa o peso, os níveis glicêmicos e a intensidade do processo inflamatório. Os resultados obtidos sugerem que nas condições experimentais adotadas, o BCG não alterou o desenvolvimento do diabetes tipo I induzido por STZ em camundongos C57BL/6

Propriedades de adesão e invasão de cepas de Escherichia coli isoladas de pacientes com doença inflamatória intestinal

A Doença Inflamatória Intestinal (DII) engloba um grupo de processos inflamatórios crônicos de causas não conhecidas. Duas formas clínicas da DII são reconhecidas atualmente: a Retocolite Ulcerativa (RU) e a Doença de Crohn (DC). Foram isoladas de 348 amostras, dos quais 17 foram diagnosticados com com DC, e 40 com RU. Os 41 restantes apresentavam outras patologias e compreenderam o grupo controle. Entre as amostras que apresentaram adesão positiva, 110 delas apresentaram padrão de Adesão Agregativa (AA) e 19 apresentaram padrão de Adesão Difusa (AD). A cepa, DII/013, apresentou o padrão de adesão agregativo e invisibilidade média 18 vezes superior à cepa da EIEC. Quando observada ao microscópio eletrônico, bactérias intracelulares foram detectadas na amostra. Assim, a maioria das amostras apresentaram padrão de adesão agregativo, indicando juntamente com estudos anteriores, que esse padrão teria uma possível relação com a patogenicidade da bactéria em relação a DII

Avaliação da citotoxicidade de extratos, frações e substâncias puras de Pterogyne nitens em Trypanosoma cruzi e em macrófagos

A atividade biológica de extratos, frações e substâncias puras de Pterogyne nitens foi avaliada em formas epimastigotas das cepas Y e Bolívia de Trypanosoma cruzi, e a citotoxicidade das substâncias com potente atividade tripanocida foi testada em macrófagos murinos pelo método colorimétrico de redução do sal 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2-5-difeniltetrazólio (MTT) a formazana, um produto colorido. As mesmas amostras foram também avaliadas quanto a um possível sinergismo com o fármaco benzonidazol. Foram consideradas substâncias ativas contra o parasito: nitensidinas A, D, E e ácido cafeico, com concentrações inibitórias (CI50) inferiores às do benzonidazol (9,01 µg/mL para cepa Y e 25,00 µg/mL para cepa Bolívia). Essas substâncias foram avaliadas quanto a sua citotoxicidade em macrófagos de camundongos isogênicos Balb/c e C57/Black não infectados utilizando-se o mesmo método colorimétrico. Além disso, essas mesmas substâncias foram analisadas em diferentes tempos: 2, 6, 24, 48 e 72 horas, a fim de detectar-se o seu tempo mínimo de ação nos parasitos que foram então observados quanto à sua morfologia através de microscopia de contraste de fase. Os resultados indicam que não há toxicidade seletiva, ou seja, as moléculas se mostraram tóxicas tanto para as cepas testadas do parasito, quanto para macrófagos murinos das linhagens utilizadas. Modificações nas estruturas químicas podem ser sugeridas para que as substâncias continuem ativas contra Trypanosoma cruzi e se tornem menos tóxicas para células de mamíferos

Avaliação da atenuação da toxicidade de lodo de esgoto por associação com resíduo vegetal da indústria sucro-alcooleira

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Clonagem de sequências codificantes de citocinas felinas para construção de curva padrão para PCR em tempo real

A quantificação de citocinas felinas possibilita uma avaliação do sistema imune do animal em diferentes doenças, permite também a identificação de diferentes fatores que alteram sua secreção, e colabora na compreensão da patogênese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensuração é feita principalmente pelo método de ELISA, mas para os felinos há uma menor disponibilidade de kits específicos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa é utilizar a reação de PCR em tempo real com transcrição reversa (RT-qPCR) para quantificação absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma técnica bastante sensível e específica para analisar a expressão desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequências gênicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padrão para a qPCR. Assim, foi feita extração de RNA de amostras de sangue total de gatos domésticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contaminação por DNA genômico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers específicos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasmídeo comercial, e introduzido em bactérias E. coli cepa DH5. Os clones recombinantes foram sequenciados para confirmar a inserção do fragmento no vetor. As curvas padrão da qPCR foram construídas com cada plasmídeo recombinante numa de 106 a 101 cópias por reação. O sequenciamento mostrou que todos os clones eram semelhantes àqueles encontrados no GenBank. A eficiência das amplificações, baseado no slope das curvas padrão foram: 101,3% para GAPDH, 99,1% para IL-1, 83,2% para IL-6, 94,4% para IL-10, 105,5% para IL-12, 83,4% para IFN- e 83,8% para TNF-. O valor de r2 foi de 0,99 em todas as reações. Dessa forma, com a clonagem dos fragmentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)