Desenvolvimento de um plataforma analítica para análise qualitativa e quantitativa de peptídeos de cérebros de abelhas Apis mellifera

As abelhas da espécie Apis mellifera são conhecidas por sua organização social, comportamento devotado e aparente complexidade comportamental, sendo também consideradas excelentes sistemas-modelo para estudos de comunicação, aprendizado e formação de memória. Uma vez que o comportamento social dos insetos é resultante de interações complexas em diferentes níveis de organização biológica, torna-se importante estudar os peptídeos envolvidos nesse processo, já que estes são indispensáveis em muitos processos fisiológicos, funcionando como neurotransmissores, hormônios, toxinas, antibióticos, defensinas, neuromoduladores e neurohormônios. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi padronizar uma metodologia analítica visando à determinação do perfil peptídico do cérebro de abelhas da espécie Apis mellifera utilizando como ferramentas a espectrometria de massas e a cromatografia líquida. Foram coletadas operárias de Apis mellifera com 20 dias de idade, cujos cérebros foram dissecados e devidamente processados visando a posterior separação e identificação dos peptídeos. Foram testadas duas estratégias distintas para a separação e identificação dos peptídeos, denominadas on-line e off-line. Ambas baseavam-se na utilização de um sistema de cromatografia líquida sob fase reversa e um espectrômetro de massas do tipo electrospray/Ion Trap-Time of Flight, mas na primeira essas ferramentas estavam acopladas, enquanto na segunda os dois processos foram realizados separadamente. Tais procedimentos permitiram identificar 19 peptídeos pertencentes às principais famílias de neuropeptídeos de cérebros de abelhas já descritos na literatura, entre elas as Alatostatina, Apidaecina, Corazonina e Taquicininas. Os resultados obtidos indicam que a estratégia off-line foi melhor em comparação à estratégia on-line, devido à possibilidade de se trabalhar com cada fração obtida separadamente para as...

Determinação da atividade antimicrobiana dos extrativos das folhas/galhos, pericarpo e sementes da Crotalaria pallida (Leguminosae)

O estudo de novas alternativas terapêuticas no tratamento de infecções microbianas tornou-se crescente no cenário científico devido à grande variação genética desses micro-organismos, que resultou na resistência aos antimicrobianos existentes. A grande diversidade na flora brasileira e a ampla utilização das plantas como medicamentos pela população justificam os estudos e o crescente interesse pela descoberta de novos compostos bioativos isolados dos vegetais. Plantas usualmente utilizadas na agricultura, apenas como adubação verde, por exemplo, são atualmente alvo de estudos científicos com potenciais promissores de atuação como de produtos terapêuticos. Plantas da família Leguminosae, amplamente conhecidas e utilizadas como fornecedoras de nitrogênio ao solo, vem sendo estudadas por diversas áreas da saúde para comprovarem a ação de compostos isolados entre estes os alcalóides pirrolidizínicos como antiinflamatórios, antibióticos e até como veneno para pragas. O objetivo do presente estudo foi determinar, a partir de extrativos de Crotalaria pallida, a atividade antimicrobiana in vitro utilizando cepas padrões de: Staphylococccus aureus, Escherichia coli, Salmonella sp e da levedura Candida albicans. Para determinação dessa atividade foi utilizada a técnica de diluição em microplaca que possibilitou o estudo da atividade do extrativo vegetal e da concentração inibitória mínima, isto é, concentração bactericida e/ou bacteriostática mínima e concentração fungiostática e/ou fungicida mínima. A Crotalaria pallida, não apresentou atividade frente aos micro-organismos testados nas condições padronizadas neste estudo

Diversidade genética em Staphylococcus aureus resistentes à oxacilina em isolados de pacientes pediátricos do Hospital das Clínicas de Botucatu

Staphylococcus aureus é um patógeno ubíquo capaz de causar uma variedade de infecções em humanos. A resistência desse microrganismo a antibióticos como oxacilina e meticilina é um problema sério, de crescimento significativo para a terapêutica antimicrobiana clínica em pacientes acometidos por infecções estafilocócicas. A resistência à meticilina em S. aureus é decorrente da alteração do sítio de ação dos antibióticos β-lactâmicos, os quais agem através da inibição de enzimas que catalisam a síntese da parede celular. Essas enzimas são o sítio de ação das penicilinas, e por isso, passaram a ser chamadas de proteínas ligadoras de penicilinas (PBPs). O gene mecA codifica a PBP2a, que substitui a função das outras PBPs neste patógeno e confere resistência a β-lactâmicos. A PBP2a exibe uma afinidade reduzida pelo anel β-lactâmico e permite que a bactéria continue a sintetizar a parede bacteriana. Este gene faz parte de um elemento genético móvel encontrado em isolados de MRSA, designado cassete cromossômico estafilocócico mec (SCCmec), integrado ao cromossomo de S. aureus. O objetivo do estudo foi a caracterização molecular de 139 isolados de S.aureus provenientes de pacientes pediátricos com bacteremia durante o período de 1991 a 2010. Métodos moleculares foram utilizados para a determinação do perfil genético das amostras, incluindo, identificação do tipo de SCCmec, detecção do gene codificador de leucocidina de panton valentine (PVL) e similaridade clonal em gel de eletroforese em campo pulsado (PFGE). O gene mecA foi detectado em 32 (23%) amostras e houve predomínio do SCCmec IV (68,8%) em relação ao SCCmec III (31,2%). A presença de PVL foi encontrada em 18 amostras (12,9%), todas sensíveis à oxacilina. O clone epidêmico brasileiro, relacionado ao SCCmec tipo III, esteve presente na unidade neonatal do hospital... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)

Prospecção de novos peptídeos com ação leishmanicida por dinâmica molecular

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo das interações de peptídeos antimicrobianos e sistemas miméticos de membrana por dinâmica molecular

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Novos peptídeos sintéticos e estudo da interação com membranas modelo: efeito de modificações no N-terminal na atividade lítica e antimicrobiana

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Aplicação e viabilidade de micro-organisos potencialmente probióticos em embutido cárneo fermentado

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Atividade antibacteriana in vitro de extratos e substâncias isoladas de espécies de Croton frente Staphylococcus aureus causador de mastite bovina

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Leuconostoc mesenteroides SJRP55 isolada de mussarela de búfala: perfil probiótico e bacteriocinogênico

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo dos fatores de virulência e resistência à oxacilina em Staphylococcus spp. isolados de aspirado traqueal de pacientes em ventilação mecânica internados em UTI

Patients that are mechanically ventilated in ICUs are constantly exposed to different pathogens, which present multiantibiotic resistance. Among these microorganisms, is MRSA (Meticillin-Resistant Staphylococcus aureus) considered to be a therapeutic challenge due to its resistance to β-lactam antibiotics. Therefore, this study proposed to identify species of Staphylococcus spp. isolated from mechanically ventilated patients in ICU, the gene mecA detection and the genes of the enterotoxins A (sea), B (seb), C (sec-1) and D (sed) in samples of S. aureus, as well as the phenotypic resistance determination to oxacillin using the disc-diffusion method with discs of oxacillin and cefoxitin. The samples collection occurred during in a period of 19 months, obtaining samples from 232 patients. A percentage of 39% (70) of Gram-positive cocci were found; which 82,8% (58) were identified as Staphylococcus spp,. among these, 75,8% (44) corresponded to S. aureus species and 47,7% were identified as MRSA. It was found resistance to both drugs in 31,8% of the S. aureus samples, 16 (36,3%) had the gene sea and 11 (25%) had the sec-1 gene. Among the coagulase-negative staphylococci obtained, the species most found was S. epidermidis, corresponding to 43% (6). The results revealed that one of the most important etiologic agents of VAP amid the Gram-positive cocci is the species S. aureus, with special attention to MRSA. The presence of enterotoxins genes in S. aureus did not showed determinant role in VAP, but the presence of these superantigens can contribute worsening the patient’s prognosis, since they are associated with intense inflammatory response

Resistência antimicrobiana e prevalência de sorovares de salmonella spp. isolados de fezes e linfonodos de suinos

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Atividade anti-Helicobacter pylori de extratos hidroetanólicos de caule e folhas de Astronium fraxinifolium e Astronium graveolens

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudos de permeação e liberação de peptídeos antimicrobianos estruturalmente derivados da toxina CCDB

O uso de peptídeos sintéticos para o desenvolvimento de novas drogas é uma estratégia promissora no campo da biotecnologia. Peptídeos derivados de toxinas bacterianas intracelulares, produzidas por sistemas de morte pós-segregacional (PKS) tais como CcdB e ParE são exemplos dessa estratégia. Porém, moléculas com estrutura peptídica derivadas de toxinas bacterianas apresentam sérios problemas na aplicação terapêutica por apresentarem baixa solubilidade e difícil permeabilidade em membranas bacterianas. O objetivo desse estudo consistiu no desenvolvimento e aprimoramento de sistemas nanoestruturados (lipossomas) que permita a imobilização de análogos peptídicos da toxina CcdB e sua consequente translocação no citosol bacteriano, permitindo que os mesmos atinjam seus alvos celulares, enzimas DNA girase e Topoisomerase IV. Lipossomas do tipo SUV (small unilamellar vesicles), foram preparados pela técnica de extrusão-evaporação variando-se suas formulações. Desta forma, pretendeu-se avaliar a eficiência de encapsulação dos peptídeos através de técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectroscopia de UV-Vis e fluorescência. Após testes de eficiência de encapsulação, os lipossomas contendo os análogos peptídicos encapsulados, foram submetidos a ensaio de inibição de crescimento em meio líquido para duas espécies bacterianas: Staphylococcus aureus e Escherichia coli. Resultados demonstraram que a utilização de sistemas nanoestruturados é de grande importância para viabilizar a aplicação desta classe de biomoléculas em estudos terapêuticos, permitindo assim, que tais peptídeos possam ser utilizados como antibióticos promissores, se associados a sistemas de transporte e liberação controlada de moléculas peptídicas.

Potencial anti-Helicobacter pylori de extratos hidroetanólicos de caule e folhas de Astronium urundeuva

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Monitoramento de cultivos submersos de linhagens de Streptomyces clavuligerus para a quantificação de distribuição de fluxos metabólicos

Pós-graduação em Biotecnologia - IQ