Produção in vitro de embriões bovinos: utilização de diferentes fontes de gonadotrofinas na maturação dos oócitos

O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da utilização de diferentes fontes de gonadotrofinas para maturação in vitro dos oócitos bovinos fecundados e desenvolvidos in vitro sobre as taxas de clivagem (TC) e de blastocistos (TBL). Oócitos imaturos provenientes de ovários de vacas de abatedouro foram submetidos a maturação in vitro sob diferentes condições: meio TCM 199, acrescido de 10% de soro de vaca em estro (SVE), aditivos, hepes, NaHCO3, piruvato de sódio, antibióticos (meio B-199), 20 UI/mL de PMSG e 10 UI/mL de hCG (PMSG/hCG) ou meio B-199, acrescido de 5 mig/mL de FSH e 5 mig/mL de LH (FSH/LH). Seguidos 24 h de cultura a 38,5ºC em atmosfera com 5% de CO2, os oócitos maturos foram incubados com sêmen descongelado durante 18 a 21 horas. Após esse período, os oócitos foram transferidos para placas contendo microgotas de meio Ménezo suplementado com 10% de SVE e células epiteliais do oviduto bovino em suspensão, cobertas com óleo de silicone, os quais permaneceram em cultura por mais 9 dias. Os dados foram analisados pelo teste do Qui-quadrado. A TC e a TBL, para PMSG/hCG e FSH/LH, foram 60 e 13,9% e 61,2 e 10,6%, respectivamente. Não houve diferença entre os tratamentos com relação a TC ou a TBL. Esses resultados sugerem que ambas as fontes de gonadotrofinas podem ser utilizadas para maturação in vitro dos oócitos fecundados e desenvolvidos in vitro.

Avaliação da maturação nuclear in vitro de oócitos de gatas domésticas (Felis catus) pré-púberes e púberes

O objetivo do trabalho foi avaliar a taxa de maturação nuclear in vitro de oócitos provenientes de gatas doméstica púbere e pré-púbere. Foram utilizadas 15 fêmeas felinas, 10 púberes e 5 pré-púberes; sendo os oócitos obtidos por aspiração quantificados e classificados. Os oócitos classificados como excelentes e regulares foram reunidos em grupos de 10, em meio de cultura, recobertos em óleo mineral em Placas de Petri siliconizadas e descartáveis. Após permanência em estufa, a 38°C e 5% de CO2 por 48 horas, os oócitos foram submetidos a duas lavagens com solução de hialuronidase a 0,4%, fixados em metanol/acido acético e corados com orceína acética. A avaliação da configuração cromossômica de oócitos maturados in vitro resultou em 44,68% das células em metáfase II no grupo das fêmeas púberes e 25,32% no grupo das doadoras pré-púberes, indicando que a puberdade influencia a capacidade dos oócitos se desenvolverem in vitro.

Efeito das células do cumulus e cisteamina durante o cultivo de maturação in vitro de oócitos bovinos sobre a maturação nuclear e aquisição da competência para desenvolvimento embrionário

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência do diâmetro e da fase folicular sobre a competência in vitro de oócitos obtidos de novilhas da raça Nelore

Avaliou-se o efeito do diâmetro e da fase do desenvolvimento folicular sobre a competência de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos. A primeira onda folicular foi sincronizada com progestógeno por nove dias e 24 horas após a sua retirada aplicou-se LH. Os ovários foram recuperados 60h (G-60), 96h (G-96) e 108h (G-108) após a ovulação induzida pelo LH. Os folículos foram dissecados ou aspirados e medidos e os oócitos recuperados e submetidos à maturação, fecundação e cultivo in vitro. Os ovários do G-60 apresentaram mais oócitos viáveis (graus I, II e III) (96,6%). A taxa de clivagem teve efeito significativo sobre o diâmetro folicular, sendo maior nos oócitos oriundos de folículos classe 3 (>7mm). Na taxa de produção de blastocisto observou-se interação diâmetro versus fase de desenvolvimento folicular. A taxa de produção de blastocisto foi maior em oócitos obtidos de folículos com diâmetros <5mm (classe 1) no G-60 (64,5%), de 5-7mm (classe 2) no G-96 (33,3%) e >7mm (classe 3) no G-108 (50%). Conclui-se que o diâmetro e a fase de desenvolvimento folicular influenciam a competência oocitária para o desenvolvimento in vitro. Nos estádios iniciais da onda folicular a produção de blastocisto foi maior em oócitos de folículos pequenos; com o avanço da onda, a produção de blastocistos foi maior em oócitos obtidos de folículos maiores.

Influência do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) adicionado ao meio fluido sintético de tuba uterina (SOF) sobre a maturação in vitro de oócitos caninos (Canis familiaris)

The follicular growth and oocyte maturation knowledge are very important to the development and improvement of new biotechnologies such as in vitro fertilization and somatic cell nuclear transfer. In order to the necessity of clarify the basic mechanisms related to canine oocyte maturation, this investigation focuses on the evaluation of the effect of insulin-like growth factor-i (IGF-I), added to synthetic oviductal fluid medium (SOF) on the in vitro maturation of domestic dog oocytes. Thirty-seven bitches undergoing ovariohysterectomy for castration or due to pathological conditions of the uterus were selected as oocytes' donors (n=875). The oocytes were allocated in the following groups: MO (stained in the collection's time), Control (72h in SOF) and Experimental (72h in SOF plus 100 ng IGF-I). After 72 hours of maturation the oocytes' nuclear status were assessed by Hoechst 33342 dye. The best results in terms of oocyte harvest were observed in those juvenile donors,, females in estrus, nuliparous and pure breeds. No significant differences were observed between treatments control (SOF) or experimental (IGF-I).

Correlação entre a taxa de fertilização e o fuso meiótico em oócitos humanos: Uma meta-análise

Objective: To investigate the relationship between the presence of meiotic spindle in human oocytes and fertilization rates in ICSI cycles. Methods: Search strategies included online surveys of databases from 1990 to 2008. Nine trials fulfilled the inclusion criteria Results: According to the meta-analysis, the results showed statistically significant higher fertilization rate (p<0.0001) when the meiotic spindle was viewed than when it was not. There was heterogeneity in this comparison. Conclusion: The presence of a birefringent meiotic spindle in human oocytes can predict a higher fertilization rate. This observation has clinical relevance mainly in countries where there is a legal limit on the number of oocytes to be fertilized. Copyright - SBRA - Sociedade Brasileira de Reprodução Assistida.

Locus no cromossomo 19 influencia positivamente o número de oócitos recuperados em ciclos estimulados

Objective: To evaluate if identified loci associated with normal age of menopause variation and early menopause can account for the poor response to controlled ovarian stimulation. Methods: A total of 71 patients, with age ≤ 35 years old, undergoing intracytoplasmic sperm injection were tested for three of the four newly identified genetic variants associated with normal variation in menopausal age and early menopause. Patients were divided into two groups: poor responder group (PR group, n=21) and normoresponder group (NR group, n=50). The influence of risk allele frequency on the response to controlled ovarian stimulation (COS) was evaluated. Logistic regression models were used. Results: There was no significant difference in the incidence of the genetic variants between NR and PR group. The risk allele for chromosome 19 variant (rs4806660) demonstrated a protective effect. The presence of a risk allele, either in homozygosis or in heterozygosis, was associated with an increased response to COS, resulting in an elevated number of follicles (Coef: 2.54, P= 0.041) and retrieved oocytes (Coef: 1.41, P= 0.041). Conclusions: Genetic variants rs244715, rs9379896 and rs4806660 are not risk factors for poor ovarian response. Instead, rs4806660 is associated with higher number of follicles and retrieved oocytes. It could be hypothesized that rs4806660 is associated with an increased response to gonadotrophin stimulus. © Todos os direitos reservados a SBRA - Sociedade Brasileira de Reprodução Assistida.

Efeito da suplementação de cisteína e cisteamina sobre a maturação nuclear de oócitos de fêmeas caninas (Canis familiaris) obtidos por ovariosalpingo-histerectomia durante a fase pré-ovulatória do estro

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

O papel do fator de crescimento semelhante à insulina-l sobre os efeitos deletérios do choque térmico em oócitos bovinos no estádio de vesícula germinativa

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Maturação in vitro de oócitos ovinos com o uso da roscovitina e ciclohexemida

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estimulação ovariana, recuperação e maturação de oócitos de veado-catingueiro (Mazama gouazoubira)

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Maturação in vitro de oócitos de ovelhas Santa Inês submetidas a sucessivas sessões de aspiração folicular por videolaparoscopia

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Influência de diferentes suplementos na maturação oocitária sobre o acúmulo de lipídeos citoplasmáticos em oócitos e embriões bovinos cultivados in vitro

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Efeito da adição de antioxidante (Trolox®) ao meio de manutenção de embriões bovinos produzidos in vivo e ao meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários provenientes de abatedouro

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Efeitos da demecolcina na cinética de maturação, microtúbulos e na enucleação química de oócitos bovinos

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)