Padronização da metodologia do RT-PCR utilizado para identificação do mRNA da alfa-amilase em sementes de milho

Durante a germinação das sementes, os carboidratos de reserva são degradados pela atividade de a-amilase. A identificação de mRNA é uma ferramenta fundamental para a definição da cinética de síntese de alfa-amilase. Objetivou-se padronizar a metodologia do RT-PCR para identificar o mRNA do gene de a-amilase em sementes de milho. Após três dias de germinação das cultivares Saracura-BRS 4154 e CATI-AL34, extraiu-se o RNA total pelo método do tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio, com algumas modificações. A partir do RNA total extraído foi obtido cDNA com utilização de random primers. A amplificação por PCR de uma porção do gene da alfa-amilase foi realizada com os primers: sense - CGACATCGACCACCTCAAC; antisense - TTGACCAGCTCCTGCCTGTC; gelatina; DMSO e 1,25 unidades de Taq DNA polimerase por reação e completados com água tratada com DEPC. Os ciclos para a amplificação foram 94ºC durante 4 minutos, seguidos por 34 ciclos de 94ºC durante 1 minuto, 42ºC durante 1 minuto e 72ºC durante 1,5 minutos e, finalmente, 72ºC por 5 minutos. O produto do RT-PCR apresentou uma banda de 249 pares de base (pb) bem definida, para as duas cultivares estudadas, não ocorrendo bandas inespecíficas. A técnica do RT-PCR mostrou ser uma metodologia eficiente para a identificação da expressão de alfa-amilase durante a germinação das sementes e pode ser usado para estudo qualitativo e quantitativo da cinética de síntese dessa enzima em experimentos de germinação.

Relationship between carbon source, production and pattern action of alpha-amilase from Rhizopus sp

This paper discusses the inducer effect of corn soluble starch and the individual components (amylose and amylopectin) from corn and potatoes starch for alpha-amylase production by a strain of Rhizopus sp. The following decreasing order in the enzyme production was obtained: corn amylose > potatoes amylose > corn amylopectin > potatoes amylopectin > starch > maltose, coinciding with the ability of the enzyme to release reducing units, except the soluble starch that was more softly hydrolysed. However, when the enzyme action was measured by the iodine binding method, an inverse order of enzyme activity was obtained, that is: amylopectins > starch > amylosis. The results suggest that: a) branched structures in substrate affect the enzyme production; b) corn amylose and corn amylopectin are better inducers than their respectives homologous from potatoes; c) cc-amylase from Rhizopus sp has different action patterns on substrates with straight or branched chains: from the former, it removes only reducing units with lower molecular weight (G1-G3); from the latter it also removes oligosaccharides with higher molecular weight (G5-G6).

COMPARACAO ENTRE MEDICAMENTOS ORAIS ATRAVES DAS TAXAS SERICAS DE GLICOSE, AMILASE, ACIDOS GRAXOS LIVRES E LIPOPROTEINAS DE ALTA DENSIDADE (HDL-COLESTEROL) NOS DIABETICOS DE AMBOS OS SEXOS, DA REGIAO DE ARARAQUARA, NAO-DEPENDENTES DE INSULINA

A study was carried out, on both sexes, to determine the effects of chlorpropamide (DIABINESE) and glibenclamide (DAONIL) on patients with Type II diabetes using as metabolic parameters the following serum: glucose, amilase, high density lipoprotein cholesterol, free fatty acids. The results indicated that both drugs were potentially similar in relation to glycemia, high density lipoprotein cholesterol, and free fatty acids, in both sexes. Chlorpropamide was significantly more effective in reducing amilase activity in male diabetics than glibenclamide. The above mentioned hypoglycemiants did not reduce glycemia to basic levels in either masculine or feminine groups of diabetics.

Produção de alfa-amilase e glucoamilase termoestável pelo fungo termofílico Thermomyces lanuginosus TO-03 por fermentação submersa e em estado sólido e caracterização das enzimas

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Imobilização de amilase de Neurospora crassa (mutante exo-1) e produção de derivados ativos estabilizados

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Alfa-amilase e maltase nos simbiontes Leucoagaricus gongylophorus Singer (Möller) (Leucocoprineae: agaricaceae) e Atta sexdens Linnaeus (Attini: formicidae)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Níveis de alfa-amilase, cortisol salivar e avaliação comportamental de crianças com retardo do desenvolvimento neuropsicomotor na situação odontológica, participantes da dinâmica de arte: análise comparativa

Pós-graduação em Ciência Odontólogica - FOA

Influência da temperatura na atividade de amilase e protease de Rhizopus oligosporus cultivado por fermentação em estado sólido

Amilases e proteases constituem um dos principais grupos de enzimas industriais pelo seu amplo espectro de aplicações biotecnológicas. Elas podem ser obtidas a partir de fontes microbianas e com altos rendimentos por processos de fermentação em estado sólido (FES). Conhecer as características bioquímicas das enzimas é fundamental para adequação aos processos industriais. O objetivo do trabalho foi determinar a melhor temperatura para atividade das enzimas amilase e protease de Rhizopus oligosporus obtidas por fermentação em estado sólido utilizando farelo de trigo como substrato. Os melhores valores para atividade amilolítica e proteolítica foram obtidos nas temperaturas de 55 - 65 °C e de 50 - 60 °C, respectivamente. Estes resultados sugerem que as enzimas estudadas podem ser utilizadas em processos que empregam elevadas temperaturas.

Efeito da β-amilase e α-amilase fúngica seguido de desramificação na formação e características estruturais de amido resistente tipo 3 de batata e araruta

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Production of α-amilase by solid state fermentation by Rhizopus oryzae

A thermotolerant strain of Rhizopus oryzae was grown in three agro-industrial by-products: brewers’ rice, corn grits and wheat bran. Different substrates, cultivation time, moisture content, additional nitrogen sources, pH and temperature of incubation were evaluated aiming to optimize growing conditions. The highest enzymatic activity was observed after 24 h of cultivation using wheat bran as substrate with the following salt solutions: NH4NO3, MgSO4.7H2O and (NH4)2SO4 0.1% at temperature of 35°C. It was observed that changes in the pH range 4.0-6.0 did not significantly affect α-amylase activity. The optimum operation conditions were 75°C and pH 4.5. The enzymes remained stable at 75°C in the absence of substrate for 25 min.

Produção e caracterização de amilases bacterianas: α-amilase e ciclodextrina glucanotransferase (CGTase)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Desempenho de juvenis de tilápia-do-nilo alimentados com rações contendo complexo enzimático

Avaliou-se o efeito da inclusão de um complexo enzimático em dietas para tilápias-do-nilo (Oreochromis niloticus) sobre o desempenho, a composição química da carcaça e a qualidade da água. Foram utilizados 200 alevinos revertidos (4,57 ± 1,24 g), distribuídos em delineamento inteiramente casualizado em 20 tanques de 500 litros, com quatro tratamentos e cinco repetições, considerando a unidade experimental uma caixa com dez peixes. Os peixes foram alimentados com dietas contendo 0; 0,033; 0,066 ou 0,099% de complexo enzimático. As dietas foram processadas na forma peletizada e fornecidas quatro vezes ao dia, às 8, 11, 14 e 17 h. Os valores médios de pH, condutividade elétrica, oxigênio dissolvido, temperatura, fósforo total, amônia e nitrato da água de cultivo não foram influenciados pela dieta. A inclusão do complexo enzimático na dieta não afetou o ganho de peso, as taxas de sobrevivência e de crescimento específico, mas influenciou o consumo de ração e a conversão alimentar, cujos valores foram maiores nos peixes alimentados com a dieta com 0,066% de complexo enzimático. Não foram observadas diferenças nos teores de matéria seca, umidade, proteína bruta, matéria mineral, cálcio e fósforo na carcaça dos peixes, no entanto, o teor de extrato etéreo reduziu de forma linear com o aumento do nível de complexo enzimático. A utilização de complexo enzimático (amilase, protease, celulase, lipase, pectinase, xilanase, β-glucanase e fitase) no nível de 0,066% em dietas para juvenis de tilápia-do-nilo piora a conversão alimentar, mas não influencia o desempenho e a composição corporal dos peixes.

Efeito do uso de probiótico sobre o desempenho e atividade de enzimas digestivas de frangos de corte

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Amylase utilization for the extrusion of dog diets

Effects of amylase addition on extruder parameters, cost of extrusion, kibble quality and digestibility of dog food were measured in two separate experiments. In experiment 1, 120 kilo-novo-alpha-amilase-unit (KNU)/kg of heat stable alpha-amylase produced by Bacillus licheniformis was added in liquid form during a preconditioning period. In experiment 23684 KNU/kg of heat stable alpha-amylase produced by Aspergillus oryzae was mixed with the ingredients before extrusion. The diets were processed in a single screw extruder and submitted to digestibility and on experiment 1 also to palatability tests. Digestibility was tested using 12 dogs, six per diet. Data were submitted to analysis of variance followed by F-test. Amylase addition altered extrusion parameters in both experiments (P<0.05), with higher output (kg of dry matter [DM]/h: 28% and 43% higher in experiments 1 and 2) and less electric energy consumption (kW to produce 100 kg DM: 22% and 29% lower in experiments 1 and 2). Kibble appearance and quality [density (g/L), cutting force (g), and starch gelatinization degree (%)] did not change with enzyme treatment (P>0.05). Likewise, enzyme addition did not change nutrient digestibility, fecal dry matter or food palatability (P<0.05). Taken together our results suggest that amylase promoted the breakdown of amylose chains, thereby reducing the dough viscosity and resistance inside the extruder which allowed for higher product flow and less electricity energy consumption without altering food quality. (C) 2012 Elsevier B.V. All rights reserved.

Atributos bioquímicos e químicos do solo rizosférico e não rizosférico de culturas em rotação no sistema de semeadura direta

Sistemas autossustentáveis favorecem as populações microbianas devido à conservação e ao aumento da matéria orgânica no solo. Além disso, as plantas que fazem parte desses sistemas promovem o efeito rizosférico, por meio da zona de influência das raízes, que resulta no aumento da atividade e na modificação da população microbiana. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da rotação de culturas de inverno sobre sequências de verão, em sistema de semeadura direta, nos atributos bioquímicos (amilase, urease, celulase e protease) e químicos (carbono orgânico total - COT, carboidratos totais e proteínas totais) em solo rizosférico (SR) e não rizosférico (SNR). Este estudo foi constituído de três culturas de inverno: milho (Zea mays L.), girassol (Helianthus anuus L.) e guandu (Cajanus cajan (L.) Millsp), que estavam em rotação sobre três sequências de verão: soja/soja (Glycine max L.), milho/milho e soja/milho, e duas posições no solo: solo aderido às raízes das plantas (SR) e solo da entrelinha de plantio (SNR). As atividades da amilase, celulase, protease e urease no SR foram 16, 85, 62 e 100 % maiores do que no SNR; para COT e proteínas totais a diferença foi de 21 %. Das culturas de inverno, o milho foi a que mais estimulou as atividades das enzimas amilase, celulase, urease e protease no SR, bem como a atividade das enzimas amilase, urease e protease no SNR. de modo geral, os teores de proteínas totais não foram influenciados pelas culturas de inverno e pelas sequências de verão; os carboidratos totais foram influenciados pelas culturas de inverno milho e girassol. Para o COT houve influência apenas da sequência de verão milho/milho. Os atributos bioquímicos e químicos avaliados neste estudo podem ser utilizados como indicadores das alterações no solo promovidas pelas culturas de inverno e pelas sequências de verão.