1 resultado para V4
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Resumo:
O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parmetros da seleo por gradiente de Percoll e da adio de plasma seminal do smen eqino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperao de espermatozides aps seleo por Percoll em diferentes protocolos de centrifugao. Foram realizadas 5 coletas de smen de um garanho. Imediatamente aps a coleta, o smen foi avaliado quanto motilidade, vigor e concentrao. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diludas em leite desnatado UHT com concentraes de 50 e 100 x 106 espermatozides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alquotas de 1 mL, que foram ento colocadas sobre Percoll e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugao. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Aps esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentrao, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adio de plasma seminal de diferentes qualidades ao smen eqino selecionado por gradiente de Percoll e resfriado a +4C por at 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhes, sendo dois com boa qualidade de smen e dois com baixa qualidade de smen. Imediatamente aps a coleta, o smen foi avaliado quanto motilidade, vigor e concentrao e preparadas cinco fraes de 100x106 espermatozides, diludas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constitudas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll. A frao restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condies de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugao por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adio de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homlogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleo por Percoll, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de smen diludo em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4C e examinadas a cada 24h at as 72 horas em relao motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmtico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleo por gradiente descontnuo de Percoll 90/45% mostrou-se efetiva na recuperao de espermatozides com motilidades progressiva e total. A adio de 5% de plasma seminal ou a ausncia de plasma no influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll. A seleo por Percoll no influenciou na percentagem de clulas com membrana plasmtica funcional. Concentraes superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decrscimo do nmero de clulas com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilizao de Percoll no separou clulas com alterao de membrana. A percentagem de clulas com membrana completamente ntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugao, independentemente da seleo. O processo de seleo por Percoll foi efetivo na recuperao de espermatozides de eqino com motilidade progressiva, mas no selecionou espermatozides quanto funcionalidade nem integridade de membrana. Concentraes inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausncia de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmtica e acrossomal; e a adio de plasma de alta qualidade no melhorou a motilidade de espermatozides selecionados por Percoll.
