1 resultado para Ni2
em Lume - Repositório Digital da Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Resumo:
O carrapato Boophilus microplus um ectoparasita hematfago que infesta os rebanhos bovinos de regies tropicais e subtropicais, causando grande prejuzo pecuria. O principal mtodo de controle deste parasita baseia-se no uso de acaricidas, entretanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um mtodo de controle promissor. A Boophilus Yolk pro-Cathepsin (BYC) uma asprtico proteinase presente no ovo do carrapato e envolvida na embriognese que foi anteriormente testada como imungeno vacinal. Neste estudo, o cDNA da BYC foi amplificado por PCR e clonado em dois vetores de expresso para produo de duas formas da protena recombinante com cauda de histidina, rBYC e rBYC-Trx (fusionada com tioredoxina). As duas formas foram expressas em Escherichia coli na forma de corpsculos de incluso (CI) e comparadas quanto ao nvel de expresso, solubilidade e rendimento na purificaco. Trs agentes desnaturantes (N-lauroil sarcosina, hidrocloreto de guanidina e uria) foram testados para solubilizao dos CIs. Sarcosina foi o agente mais eficiente, solubilizando mais de 90 % de rBYC-Trx e rBYC. As duas protenas recombinantes foram purificadas em cromatografia de afinidade por metal (Ni2+), sob condies desnaturantes. O rendimento na purificao da protena solvel foi de 84 % para r-BYC-Trx e 6 % para rBYC. As duas formas foram reconhecidas por soro de coelhos, camundongos e bovinos previamente imunizados com BYC nativa, demonstrando a existncia de eptopos comuns entre a BYC nativa e as formas recombinantes expressas em E. coli. Para verificar o potencial vacinal da protena recombinante, um grupo de bovinos Hereford foi imunizado com rBYC e desafiado com 20.000 larvas de B. microplus por animal. Os soros dos bovinos imunizados reconheceram a BYC nativa em ELISA e Western blot, com ttulos entre 500 e 4.000. Os resultados do desafio mostraram uma proteo parcial contra a infestao, com 25 % de proteo global. O perfil de expresso de citocinas (IL-2, IL-4, IL-10, IFN-) foi verificado por RT-PCR, porm os resultados no permitiram identificar a polarizao da resposta imune em Th1 ou Th2. Os resultados de imunoproteo obtidos com a BYC recombinante foram similares aos obtidos na imunizao de bovinos com BYC nativa, indicando a possibilidade de uso da forma recombinante como imungeno vacinal.
