9 resultados para Staphylococcus aureus alpha-toxin HaCat keratinocyte
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Lentrotoxine B staphylococcique (SEB) est une toxine entrique hautement rsistante la chaleur et est responsable de plus de 50 % des cas dintoxication dorigine alimentaire par une entrotoxine. Lobjectif principal de ce projet de matrise est de dvelopper et valider une mthode base sur des nouvelles stratgies analytiques permettant la dtection et la quantification de SEB dans les matrices alimentaires. Une carte de peptides tryptiques a t produite et 3 peptides tryptiques spcifiques ont t slectionns pour servir de peptides tmoins partir des 9 fragments protolytiques identifis (couverture de 35 % de la squence). Lanhydride actique et la forme deutre furent utiliss afin de synthtiser des peptides standards marques avec un isotope lger et lourd. La combinaison de mlanges des deux isotopes des concentrations molaires diffrentes fut utilise afin dtablir la linarit et les rsultats ont dmontr que les mesures faites par dilution isotopique combine au CL-SM/SM respectaient les critres gnralement reconnus dpreuves biologiques avec des valeurs de pente prs de 1, des valeurs de R2 suprieure 0,98 et des coefficients de variation (CV%) infrieurs 8 %. La prcision et lexactitude de la mthode ont t values laide dchantillons dhomognat de viande de poulet dans lesquels SEB a t introduite. SEB a t enrichie 0,2, 1 et 2 pmol/g. Les rsultats analytiques rvlent que la mthode procure une plage dexactitude de 84,9 91,1 %. Dans lensemble, les rsultats prsents dans ce mmoire dmontrent que les mthodes protomiques peuvent tre utilises efficacement pour dtecter et quantifier SEB dans les matrices alimentaires. Mots cls : spectromtrie de masse; marquage isotopique; protomique quantitative; entrotoxines
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Lobjectif de cette tude tait de dterminer limpact dune infection intra-mammaire (IIM) subclinique cause par staphylocoque coagulase-ngative (SCN) ou Staphylococcus aureus diagnostique durant le premier mois de lactation chez les taures sur le comptage de cellules somatiques (CCS), la production laitire et le risque de rforme durant la lactation en cours. Des donnes bactriologiques provenant dchantillons de lait composites de 2 273 taures Holstein parmi 50 troupeaux ont t interprtes selon les recommandations du National Mastitis Council. Parmi 1 691 taures rencontrant les critres de slection, 90 (5%) taient positives S. aureus, 168 (10%) taient positives SCN et 153 (9%) taient ngatives (aucun agent pathogne isol). Le CCS transform en logarithme nprien (lnCCS) a t modlis via une rgression linaire avec le troupeau comme effet alatoire. Le lnCCS chez les groupes S. aureus et SCN tait significativement plus lev que dans le groupe tmoin de 40 300 jours en lait (JEL) (P < 0.0001 pour tous les contrastes). La valeur journalire du lnSCC chez les groupes S. aureus et SCN tait en moyenne 1.2 et 0.6 plus lev que le groupe tmoin respectivement. Un modle similaire a t ralis pour la production laitire avec lge au vlage, le trait gntique li aux parents pour la production laitire et le logarithme nprien du JEL de la pese inclus. La production laitire ntait pas statistiquement diffrente entre les 3 groupes de culture de 40 300 JEL (P 0.12). Les modles de survie de Cox ont rvl que le risque de rforme ntait pas statistiquement diffrent entre le groupe S. aureus ou SCN et le groupe tmoin (P 0.16). La prvention des IIM causes par SCN et S. aureus en dbut de lactation demeure importante tant donn leur association avec le CCS durant la lactation en cours.
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Le systme de recombinaison Xer est impliqu dans la monomerisation des rplicons bactriens, comme les plasmides et les chromosomes, dans une grande varit de bactries. Ce systme est un systme de recombinaison site-spcifique compos de deux tyrosine recombinases, soit XerC et XerD. Ils agissent ensemble afin de convertir les chromosomes dimriques en monomres en agissant un site spcifique prs du terminus de la rplication, appel le site dif. Les gnes Xer et leur site daction sont identifis dans plusieurs bactries gram positives et gram ngatives. Staphylococcus aureus reprsente une bactrie gram positive qui contient un systme XerCD/dif. Elle est impliqu dans plusieurs maladies humaines, tels que des infections cutanes, des gastroentrites, et le syndrome de choc toxique, pour en nommer quelques unes. Bien que les gnes codant les protines XerC et XerD ont t identifis, il y a beaucoup dinconnu sur leur mode daction au site dif. Des mutations dans XerC ont t obtenues, mais aucune dans XerD, suggrant que ce gne pourrait tre essentiel pour cet organisme. Les tudes prsentes dans ce mmoire ont permis de commencer mieux caractriser XerD de S. aureus, en squenant le gne et en faisant des tests de liaison lADN. Elles ont montr que la recombinase XerD se lie au site dif dEschericia coli seul et de faon cooprative avec la recombinase XerC dE. coli. XerD de S. aureus est, aussi, efficace dans la complmentation de XerD mut dE. coli dans la raction de recombinaison chromosomique. Cependant, elle ne dmontre pas cette mme capacit de complmentation lors de la recombinaison plasmidique aux sites cer.
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Le Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline (SARM) est un pathogne important qui a t identifi comme agent dinfection chez les animaux dlevage et les travailleurs exposs ces animaux. Au Canada, trs peu dinformations sont disponibles concernant les SARMs dorigine porcine. Lobjectif de cette tude tait de dterminer la prvalence des SARMs provenant de porcs labattoir, de caractriser leur rsistance aux antibiotiques ainsi que dvaluer le niveau de sroconversion des porcs envers le S. aureus chez les animaux porteurs ou non du SARM. Un total de 107 isolats ont t identifis positifs aux SARMs sur 660 chantillons. La prvalence de SARMs labattoir A tait de 30,8% et de 23,8% labattoir B. La susceptibilit aux antibiotiques a t dtermine en utilisant la mthode de micro-dilution de Sensititre. Tous les isolats ont dmontr une sensibilit envers la ciprofloxacine, la gatifloxacine, la gentamicine, la lvofloxacine, le linzolide, la quinupristine/dalfopristine, la rifampicine, la streptomycine, le trimthoprime/sulfamthoxazole et la vancomycine. De la rsistance a t observe envers la daptomycine (0,93%), lrythromycine (29%), la clindamycine (29%), la ttracycline (98,1%). De plus, 30% des SARMs isols taient rsistants plus de deux antibiotiques autres que les -lactamines. Par typage, deux clones prdominants ont t obtenus ainsi que deux types de SCCmec (type V et possiblement un nouveau type comprenant les cassettes III et IVb). 15 clones ont t identifis par typage MLVA, comprenant les clones prdominants VI (40.1%; 43/107) et XI (17.7%; 19/107). Deux souches de SARMs ont t caractrises par biopuce ADN et des gnes dantibiorsistance, de typage (SCCmec et MLST) et de virulence ont t identifis. Sans considration pour le site de colonisation, les porcs SA-/MRSA- (n=34) et les porcs SA+ (n=194) montrent, respectivement, des taux de sroconversion de 20.6% et 32.5%. Les porcs coloniss par un SARM un site de iv prlvement et non coloniss par un SA lautre site (n=18) montrent une sroconversion (5.6%) significativement (P < 0.05) plus faible comparativement aux porcs coloniss par SA un ou deux sites de prlvement et nayant pas de SARM. Nos rsultats dmontrent que les porcs provenant dabattoir peuvent tre coloniss par des SARMs multi-rsistants aux antibiotiques. De plus, ces SARMs sont possiblement capable de coloniser leurs htes sans stimuler la production danticorps et ce par lattnuation de la rponse immunitaire ou par la colonisation de porcs qui sont moins immunocomptents.
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La prvalence du Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline (SARM) a augment de faon dramatique dans les dernires annes chez les patients atteints de fibrose kystique. Quoique le rle du SARM dans la pathognse de latteinte respiratoire de la fibrose kystique ne soit pas clairement dtermin, certaines tudes rcentes ont suggr une association entre la persistance du SARM et le dclin acclr de la fonction respiratoire. Cependant, limportance clinique des diverses souches qui colonisent les patients atteints de fibrose kystique na pas encore t lucide. Les objectifs de ce mmoire taient de dterminer les effets dune colonisation persistante par un SARM sur le statut clinique et respiratoire des enfants atteints de fibrose kystique. galement, nous tenions tudier les caractristiques des diffrentes souches de SARM dans cette population. Nous avons ralis une tude rtrospective en analysant les donnes cliniques ainsi que les mesures de la fonction respiratoire chez les enfants atteints de fibrose kystique suivis la Clinique de fibrose kystique du CHU Sainte-Justine entre 1996 et 2008 et ayant une colonisation persistante par un SARM. Afin de dterminer les souches qui colonisent cette population, nous avons effectu une caractrisation molculaire des isolats du SARM. Nous avons identifi 22 patients avec une colonisation persistante par un SARM. Les rsultats nont dmontr aucun changement significatif en ce qui concernait le taux de dclin de la fonction respiratoire avant ou aprs lacquisition du SARM. Cependant, la colonisation persistante par un SARM tait associe une augmentation du nombre dhospitalisations pour une exacerbation pulmonaire. La plupart de nos patients taient coloniss par le CMRSA-2, une souche pidmique au Canada. La prsente tude suggre que la souche pidmique CMRSA-2 pouvait affecter lvolution clinique des enfants atteints de fibrose kystique.
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Lmergence des souches bactriennes rsistantes aux antibiotiques est un phnomne inquitant, qui se rpand travers le monde. Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa sont des bactries pathognes opportunistes multi rsistantes qui peuvent causer plusieurs maladies. Cependant, ces bactries deviennent difficiles traiter avec des antibiotiques sans occasionner de toxicit. Alors pour trouver des solutions, cest ncessaire de dvelopper de nouvelles molcules afin de combattre les agents pathognes rsistants. Grce leur action pharmacologique, les fluorures exercent un certain effet antibactrien au niveau de l'mail des dents; donc, leur association aux antibiotiques pourrait bien a mliorer lactivit antimicrobienne. De ce fait, nous nous sommes proposs dtudier les activits in vitro de la vancomycine (VAN), loxacilline (OXA), la ceftazidime (CFT) et la mropenme (MER) libre ou associe au fluorure de sodium (NaF) et fluorure de lithium (LiF) qui ont t values sur des souches S.aureus et P.aeruginosa sensibles et rsistantes, par la mthode de la microdilution en bouillon, dterminant leur concentration minimale inhibitrice (CMI), leur concentration minimale bactricide (CMB), leur courbe cintique (Time-Kill). Leur cytotoxicit sur les globules rouges humains, et leur stabilit la temprature de 4C et 22C ont t tudies. Les associations des antimicrobiens aux drivs des fluorures ont montr une amlioration de leffet des antibiotiques par la rduction des leurs concentrations et toxicit pour traiter correctement ces pathognes rsistants. Par consquent, des antibiotiques associs aux drivs de fluorure pourraient devenir une option de traitement contre des souches rsistantes afin de diminuer la toxicit cause par de fortes doses des antibiotiques conventionnels.
Resumo:
Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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Depuis quelques annes et dans plusieurs pays, un nouveau type de Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline (SARM), le squence type (ST) 398, a t frquemment retrouv chez les porcs et chez les fermiers en contact avec ces porcs. Au Canada, trs peu dinformations sont disponibles concernant le SARM dorigine porcine. Une premire tude dans notre laboratoire a permis de rcolter 107 isolats de SARM provenant de deux abattoirs porcins du Qubec. Le prsent travail vise caractriser les gnes de virulence et de rsistance aux antibiotiques de ces SARM, dtudier leur formation de biofilm en relation avec la spcificit du groupe agr et de vrifier la localisation plasmidique et la transfrabilit de ces gnes des souches de SARM dorigine humaine. Plusieurs souches ont dmontr diffrents patrons phnotypiques de rsistance aux antibiotiques. Vingt-quatre souches reprsentatives de ces isolats ont t soumises une caractrisation plus approfondie par une tude gnotypique en utilisant une biopuce ADN et un grand nombre de gnes de virulence a t dtect codant pour des entrotoxines staphylococcales, des leucocidines, des hmolysines, des aurolysines, des facteurs dimmunovasion, des superantignes, des facteurs dadhsion et des facteurs impliqus dans la formation de biofilm. Des gnes de rsistance envers les aminoglycosides, les macrolides, les lincosamides, les ttracyclines et les biocides ont t galement dtects par biopuce et leur localisation plasmidique a par la suite t dtermine. La transfrabilit de ces gnes de souches porcines des souches de SARM dorigine humaine a t dmontre par conjugaison bactrienne; ainsi le transfert horizontal de certains gnes de rsistance aux antibiotiques et de virulence a t observ. Ces travaux de recherche apportent une meilleure connaissance de la rsistance aux antibiotiques et de la virulence des SARM dorigine porcine et de leur potentiel de contribution lmergence de certaines rsistances et facteurs de virulence chez le SARM dorigine humaine.
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Le Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline (SARM) est un enjeu majeur en sant publique. Il est responsable dune grande varit dinfections. Les Livestock Associated-MRSA (LA-MRSA) sont des SARM ayant comme origine les animaux de production tels le porc ou la volaille. Ils constituent un risque de transmission lhumain via la chane alimentaire. Les LA-MRSA peuvent former du biofilm ce qui augmente leur tolrance aux stress environnementaux. Le biofilm est partiellement rgul par le systme Agr. Il nexiste aucune donne sur les LA-MRSA dorigine aviaire au Qubec. Les objectifs de ce projet taient : (i) de dterminer la prvalence de ces SARM dans la viande de poulet et le poulet griller de la province de Qubec et (ii) de caractriser les isolats retrouvs. La collecte dchantillons sest effectue dans 43 piceries (309 cuisses et pilons de poulet) et dans deux abattoirs (chantillons nasaux et fcaux de 200 poulets) de la Montrgie. La prvalence de SARM a t value 1.29% (IC 95%: 0.35-3.28) et 0% dans la viande et les oiseaux respectivement. Les isolats tests se sont rvls rsistants aux bta-lactamines (n=15), la ttracycline (n=10), loxyttracycline (n=10), la spectinomycine (n=10) et la tobramycine (n=1). Le typage a rvl deux clones diffrents (ST398-V, n=10; et ST8-IVa USA300, n=5). La prsence de gnes de rsistance aux antibiotiques (blaZ, blaR, blaI, erm(A), lnu(A), aad(D), fosB, tet(K), tet(L) et spc) ainsi que plusieurs gnes codant pour lvasion du systme immunitaire (IEC), la production de toxines ou encore pour la production de biofilm ont aussi t dtects. Une forte production de biofilm a t observe pour la majorit des isolats (n=11) lexception de certains isolats ST398. Le taux dexpression du systme Agr na rvl aucune diffrence particulire entre les SARM tests. Pour conclure, nos donnes indiquent une faible prvalence de SARM chez la volaille et la viande de poulet. Les isolats ont t catgoriss en deux gnotypes, dont un portant plus de gnes de rsistance aux antibiotiques (ST398) et lautre possdant plus de gnes de virulence (ST8).
