16 resultados para Hepatocellular carcinoma, vascular endothelial growth factor, fibroblast growth factor, angiogenesis, tyrosine kinase inhibitor
em Université de Montréal, Canada
Resumo:
ADP-ribosylation factor-1 (ARF1) est une petite GTPase principalement connue pour son rle dans la formation de vsicules au niveau de lappareil de Golgi. Rcemment, dans des cellules de cancer du sein, nous avons dmontr quARF1 est aussi un mdiateur important de la signalisation du rcepteur du facteur de croissance pidermique (EGFR) contrlant la prolifration, la migration et l'invasion cellulaire. Cependant, le mcanisme par lequel lEGFR active la GTPase ainsi que le rle de cette dernire dans la rgulation de la fonction du rcepteur demeure inconnue. Dans cette thse, nous avions comme objectifs de dfinir le mcanisme d'activation de ARF1 dans les cellules de cancer du sein hautement invasif et dmontrer que lactivation de cette isoforme de ARF joue un rle essentiel dans la rsistance de ces cellules aux inhibiteurs de l'EGFR. Nos tudes dmontrent que les protines dadaptatrices Grb2 et p66Shc jouent un rle important dans l'activation de ARF1. Alors que Grb2 favorise le recrutement dARF1 l'EGFR ainsi que l'activation de cette petite GTPase, p66Shc inhibe le recrutement du complexe Grb2-ARF1 au rcepteur et donc contribue limiter lactivation dARF1. De plus, nous dmontrons que ARF1 favorise la rsistance aux inhibiteurs des tyrosines kinases dans les cellules de cancer du sein hautement invasif. En effet, une diminution de lexpression de ARF1 a augment la sensibilit descellules aux inhibiteurs de l'EGFR. Nous montrons galement que de hauts niveaux de ARF1 contribuent la rsistance des cellules ces mdicaments en amliorant la survie et les signaux prolifratifs travers ERK1/2, Src et AKT, tout en bloquant les voies apoptotiques (p38MAPK et JNK). Enfin, nous mettons en vidence le rle de la protine ARF1 dans lapoptose en rponse aux traitements des inhibiteurs de lEGFR. Nos rsultats indiquent que la dpletion dARF1 promeut la mort cellulaire induite par gefitinib, en augmentant l'expression de facteurs pro-apoptotiques (p66shc, Bax), en altrant le potentiel de la membrane mitochondriale et la libration du cytochrome C. Ensemble, nos rsultats dlimitent un nouveau mcanisme d'activation de ARF1 dans les cellules du cancer du sein hautement invasif et impliquent lactivit dARF1 comme un mdiateur important de la rsistance aux inhibiteurs EGFR.
Resumo:
De par sa prsence dans tous les vaisseaux sanguins, l'endothlium joue un rle clef dans le processus dhmostase, tant par sa libration de facteurs anticoagulants que par ses changements protiques qui permettent lorganisme de dclencher la rparation tissulaire. La fonction anticoagulante de lendothlium peut tre mise en dfaut en cas datteinte de son intgrit, entrainant la formation de thrombus, le rejet prcoce de greffes ou encore linduction de lathrosclrose. Lintgrit de lendothlium est donc capitale pour la prvention de nombreuses maladies cardiovasculaires. Chez ladulte, les cellules endothliales (CE), normalement quiescentes, sont rapidement actives en cas dhypoxie ou dinflammation, leur permettant ainsi damorcer le processus angiognique comme suit: Tout dabord, linduction de lhyperpermabilit vasculaire permet lextravasation des protines plasmatiques. Ensuite, la dgradation de la lame basale par des metalloproteases permet aux CE de se dtacher, de prolifrer, de migrer et de sorganiser pour former lbauche du futur vaisseau. La dernire tape consiste en la maturation du vaisseau, cest-a-dire son recouvrement par des cellules murales, telles que les cellules musculaires lisses et les pericytes. Ces processus sont rguls par de nombreux facteurs angiogeniques tels que les membres de la famille Notch, du vascular endothelial growth factor (VEGF), du fibroblast growth factor (FGF), des angiopotines, et des matrix metalloproteases (MMP). Langiogense pathologique, soit une insuffisance ou un excs de vascularisation, est implique dans les blessures chroniques, les accidents cardiovasculaires, les pathologies coronariennes artrielles, les pathologies tumorales, larthrite rhumatode, la rtinopathie diabtique, lathrosclrose, le psoriasis et lasthme. Ces pathologies sont souvent issues dune drgulation de lactivit endothliale, frquemment observe conjointement a lexpression continue de molcules dadhsion leucocytaires, a laugmentation de la permabilit vasculaire, et aux anomalies de la vasoreactivite. Lactivation non-contrle de lendothlium entrane ainsi une inflammation chronique et la formation de structures vasculaires anarchiques. Les premiers leucocytes rpondre lappel inflammatoire sont les neutrophiles. Equippes dune panoplie de produits antibactriens puissants mais aussi nocifs pour les tissus qui les entourent, ces cellules polylobes participent chaque tape du processus inflammatoire, depuis linduction de lhyperpermabilit vasculaire jusqu la rsolution. En effet, grce leurs rcepteurs, les neutrophiles dtectent et interprtent les signaux biochimiques prsents dans la circulation et la surface de lendothlium, et librent aussi leurs propres mdiateurs tels le VEGF, les MMP, et linterleukine-8 (IL-8), dont les effets sont la fois paracrines et autocrines. Existent-ils dautres modulateurs typiques de la fonction endothliale capables dinfluencer le comportement des neutrophiles? En effet, notre laboratoire a dmontr que chez lhumain, une stimulation directe aux angiopotines incitait les neutrophiles adhrer aux CE, migrer, synthtiser et relcher lIL-8, voire mme vivre plus longtemps. La prsence du rcepteur des angiopotines, Tie2, la surface des neutrophiles laisse prsager que la famille possderait dautres fonctions leucocytaires encore non-identifies. Par ailleurs, dans un modle classique de langiogense in vivo (matrigel), nous avons observ que sous leffet du FGF1 et 2, les bauches des nouveaux vaisseaux taient parfois accompagnes dune infiltration de cellules granulocytaires. Ainsi, en partant de ces observations, lobjectif de nos tudes (prsentes ci-aprs) tait dapprofondir nos connaissances sur la relation entre neutrophiles et facteurs angiogniques, notamment les FGF et les angiopotines. Par tests in vitro, nous avons confirm que les neutrophiles humains exprimaient plusieurs rcepteurs du FGF (FGFR1-4) dune faon htrogne, et quils migraient vers un gradient des ligands FGF1 et 2. Par ailleurs, nous nous sommes intresss aux voies de signalisation inflammatoires actives par les ligands FGF1, FGF2, Ang1 et Ang2. Grce une stratgie gnique ciblant 84 gnes inflammatoires, nous avons identifi plusieurs cibles dintrt touches par Ang1, dont certains membres de la famille de lIL-1, alors quaucun des gnes tests navait chang de faon significative sous leffet des FGF ou dAng2. Suite des cintiques approfondies, nous avons dmontr quAng1 stimulait la transcription de lARN messager de lIL-1, et augmentait simultanment la quantit de protine immature (pro-IL-1; inactive) et clive (IL-1 mature ; active). En parallle, Ang1 augmentait la scrtion de lantagoniste naturel de lIL-1, lIL-1RA, sans pour autant stimuler la relche de lIL-1. A linstar des endotoxines bactriennes dont les effets lis lIL-1 dpendaient de la kinase p38, ceux dAng1 dcoulaient presque entirement des voies de signalisation du p42/44.
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Le cartilage est un tissu conjonctif compos dune seule sorte de cellule nomme chondrocytes. Ce tissu offre une fondation pour la formation des os. Les os longs se dveloppent par l'ossification endochondral. Ce processus implique la coordination entre la prolifration, la diffrenciation et l'apoptose des chondrocytes, et rsulte au remplacement du cartilage par l'os. Des anomalies au niveau du squelette et des dfauts lis lge tels que larthrose (OA) apparaissent lorsquil y a une perturbation dans lquilibre du processus de dveloppement. ce jour, les mcanismes exacts contrlant la fonction et le comportement des chondrocytes pendant la croissance et le dveloppement du cartilage sont inconnus. Le rcepteur activateur de la prolifration des peroxysomes (PPAR) gamma est un facteur de transcription impliqu dans l'homostasie des lipides. Plus rcemment, son implication a aussi t suggre dans l'homostasie osseuse. Cependant, le rle de PPAR in vivo dans la croissance et le dveloppement du cartilage est inconnu. Donc, pour la premire fois, cette tude examine le rle spcifique de PPAR in vivo dans la croissance et le dveloppement du cartilage. Les souris utilises pour ltude avaient une dltion conditionnelle au cartilage du gne PPAR. Ces dernires ont t gnres en employant le systme LoxP/Cre. Les analyses des souris ayant une dltion au PPAR aux stades embryonnaire et adulte dmontrent une rduction de la croissance des os longs, une diminution des dpts de calcium dans los, de la densit osseuse et de la vascularisation, un dlai dans lossification primaire et secondaire, une diminution cellulaire, une perte dorganisation colonnaire et une diminution des zones hypertrophiques, une dsorganisation des plaques de croissance et des chondrocytes dforms. De plus, la prolifration et la diffrenciation des chondrocytes sont anormales. Les chondrocytes et les explants isols du cartilage mutant dmontrent une expression rduite du facteur de croissance endothlial vasculaire (VEGF)-A et des lments de production de la matrice extracellulaire. Une augmentation de lexpression de la mtalloprotinase matricielle (MMP)-13 est aussi observe. Dans les souris ges ayant une dltion au PPAR, y est aussi not des phnotypes qui ressemblent ceux de lOA tel que la dgradation du cartilage et l'inflammation de la membrane synoviale, ainsi quune augmentation de lexpression de MMP-13 et des nopitopes gnrs par les MMPs. Nos rsultats dmontrent que le PPAR est ncessaire pour le dveloppement et lhomostasie du squelette. PPAR est un rgulateur essentiel pour la physiologie du cartilage durant les stades de croissance, de dveloppement et de vieillissement.
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Les tumeurs des cellules de la granulosa (GCTs) sont des tumeurs avec un potentiel malin ayant tendance rcidiver, provoquant ainsi la mort dans 80% des cas de stade avanc conscutif une rechute. Bien que les GCTs reprsentent 5% des tumeurs ovariennes, peu dtudes ont valu les protocoles de traitement adjuvant pour la maladie avance ou rcurrente. Notre but tait dvaluer lefficacit de la voie de signalisation du facteur de croissance de lendothlium vasculaire A (VEGFA) comme cible pour le traitement de la GCT utilisant le modle murin transgnique Ptentm1Hwu/tm1Hwu; Ctnnb1tm1Mmt/+; Amhr2tm3(cre)Bhr/+ (PCA) qui reproduit le stade avanc de la maladie humaine. Un anticorps anti-VEGFA a t administr une fois par semaine par voie intrapritonale (IP) partir de 3 semaines dge. La thrapie anti-VEGFA a permis une rduction de la taille des tumeurs 6 semaines dge (p<0.05) et une prolongation de la survie des animaux traits, lorsque compar aux animaux contrles. Lanalyse des GCTs a montr une rduction significative de la prolifration cellulaire (p<0.05) et de la densit microvasculaire (p<0.01) mais aucune diffrence significative na t dtecte dans lapoptose cellulaire. p44/p42 MAPK, un effecteur de la signalisation pour le rcepteur 2 de VEGFA (VEGFR2) associ la prolifration cellulaire, tait moins activ dans les tumeurs traites (p<0.05). Par contre, lactivation dAKT, un effecteur impliqu dans la survie cellulaire, tait similaire dun groupe lautre. Ces rsultats suggrent que lanticorps anti-VEGFA rduit la prolifration cellulaire et la densit microvasculaire chez les souris PCA par inhibition de la voie de signalisation VEGFR2-MAPK, inhibant ainsi la croissance tumorale. En conclusion, lefficacit de la thrapie anti- VEGFA mrite dtre value en essais contrls randomiss pour le traitement des GCTs chez lhomme.
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Rsum Selon l'OMS, la retard de croissance intra-utrine (RCIU; 10% en dessous du poids normal pendant la grossesse) affecte 5-10% des grossesses et est une cause principale de la morbidit et de la mortalit prinatales. Dans notre tude prcdente sur un modle de souris transgnique de prclampsie (R+A+), nous avons constat que lentranement physique (ExT) avant et pendant la grossesse rduisait la pression artrielle maternelle et empchait la RCIU en amliorant le dveloppement placentaire. Dans le cadre de mon projet, nous avons confirm les bnifices de lExT dans un modle de RCIU (souris dficiente en p57Kip2 (p57-/+). Ainsi, nous avons observ la prsence de RCIU, dune masse placentaire rduite, dune augmentation de la pathologie placentaire ainsi quune plus petite taille des portes chez les souris p57-/+ sdentaire. LExT prvient la RCIU ainsi que tous les paramtres mentionns ci-haut. Nous avons observ que l'expression du facteur de croissance de lendothlium vasculaire, un rgulateur cl de l'angiogense lors de la croissance placentaire, tait rduite dans le placenta des souris p57-/+ et normalise par lExT. Nous avons galement trouv que l'expression en ARN dans le placenta de 2 facteurs inflammatoires (interleukine-1 et MCP-1) tait augment chez les souris sdentaires p57-/+ alors que ceci ntait pas prsent chez les souris entranes, ce qui suggre que l'inflammation placentaire peut contribuer la pathologie placentaire. Toutefois, contrairement aux souris R+A+, le systme rnine-angiotensine placentaire chez les souris p57-/+ tait normale et aucun effet de lExT a t observ. Ces rsultats suggrent que lExT prvient la RCIU en normalisant la pathologie placentaire, langiogense et linflammation placentaire.
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La signalisation par lestrogne a longtemps t considre comme jouant un rle critique dans le dveloppement et la progression des cancers hormono-dpendants tel que le cancer du sein. Deux tiers des cancers du sein expriment le rcepteur des estrognes (ER) qui constitue un lment indiscutable dans cette pathologie. Lacquisition dune rsistance endocrinienne est cependant un obstacle majeur au traitement de cette forme de cancer. Lmergence de cancers hormono-indpendants peut est produite par lactivation de ER en absence destrogne, lhypersensibilit du rcepteur aux faibles concentrations plasmique destrogne ainsi que lactivation de ER par des modulateurs slectifs. Lactivit du ER est fortement influence par lenvironnement cellulaire tel que lactivation de voie de signalisation des facteurs de croissances, la disponibilit de protines co-rgulatrices et des squences promotrices cibles. Prsentement, les tudes ont principalement considres le rle de ER, cependant avec la dcouverte de ER, notre comprhension de la diversit des mcanismes potentiels impliquant des rponses ER-dpendantes sest amliore. Lactivation des voies des kinases par les facteurs de croissance entrane le dveloppement dun phnotype tumoral rsistant aux traitements actuels. Nos connaissances des voies impliques dans lactivation de ER sont restreintes. ER est considr comme le sous-type dominant et corrle avec la plupart des facteurs de pronostic dans le cancer du sein. Le rle de ER reste imprcis. Les rsultats prsents dans cette thse ont pour objectif de mieux comprendre limplication de ER dans la prolifration cellulaire par ltude du comportement de ER et ER suite lactivation des voies de signalisation par les facteurs de croissance. Nous dmontrons que lactivation des rcepteurs de surfaces de la famille ErbB, spcifiquement ErbB2/ErbB3, inhibe lactivit transcriptionnelle de ER, malgr la prsence du coactivateur CBP, tout en activant ER. De plus, linhibition de ER est attribue un rsidu srine (Ser-255) situ dans la rgion charnire, absente dans ER. Des tudes supplmentaires de ErbB2/ErbB3 ont rvl quils activent la voie PI3K/Akt ciblant son tour la Ser-255. En effet, cette phosphorylation de ER par PI3K/Akt induit une augmentation de lubiquitination du rcepteur qui promeut sa dgradation par le systme ubiquitine-protasome. Cette dgradation est spcifique pour ER. De faon intressante, la dgradation par le protasome requiert la prsence du coactivateur CBP normalement requis pour lactivit transcriptionnelle des rcepteurs nuclaires. Malgr le fait que lactivation de la voie PI3K/Akt corrle avec une diminution de lexpression des gnes sous le contrle de ER, on observe une augmentation de la prolifration des cellules cancreuses. Linhibition de la dgradation de ER rduit cette prolifration excessive cause par le traitement avec Hrg1, un ligand de ErbB3. Un nombre croissant dvidences indique que les voies de signalisations des facteurs de croissance peuvent slectivement rguler lactivit transcriptionnelle de sous-types de ER. De plus, le ratio ER/ER dans les cancers du sein devient un outil de diagnostique populaire afin de dterminer la svrit dune tumeur. En conclusion, la caractrisation molculaire du couplage entre la signalisation des facteurs de croissance et la fonction des ERs permettra le dveloppement de nouveaux traitements afin de limiter lapparition de cellules tumorales rsistantes aux thrapies endocriniennes actuelles.
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Rsum: La Scoliose Idiopathique de lAdolescent (SIA) est une condition dbilitante qui peut avoir comme rsultat une douleur importante, une altration du fonctionnement quotidien et une dtrioration de la qualit de vie. Pour les patients qui ne rpondent pas au traitement conservateur, la fusion vertbrale, en utilisant des greffes osseuses, est devenue un traitement de choix pour stabiliser la colonne. Des connaissances plus pointues propos des facteurs impliqus dans lostognse et la formation de los peuvent raccourcir le processus de gurison et permettre aux patients de rintgrer leurs activits dans un laps de temps plus court. Les plaquettes peuvent jouer un rle important dans la premire tape de la gurison des fractures car elles sont une source autologue de plusieurs facteurs de croissance qui soutiennent la prolifration et la diffrenciation des ostoblastes in vivo et in vitro. Au cours des dernires annes, plusieurs tentatives ont t ralises afin de trouver des traitements additionnels pour : 1) Raccourcir le temps de gurison des fractures relativement long ; 2) Obtenir une plus courte priode de convalescence pour les patients qui ont besoin de prothses ; 3) Corriger plus facilement plusieurs maladies congnitales; 4) Amliorer le processus de fusion vertbrale et 5) Dvelopper de nouvelles approches thrapeutiques, notamment au niveau des processus rgularisant le remodelage osseux et la rgnration des tissus osseux. Dans le cadre de la prsente tude, jai tudi la contribution possible du facteur de croissance de linsuline (IGF) et du facteur vasculaire endothlial de croissance (VEGF) sur la maturation de lostoblaste scoliotique dans des cultures cellulaires in vitro et jai compar les rsultats avec celles obtenues dans les mmes conditions mais en stimulant les ostoblastes avec de la mlatonine. Cette tude prliminaire a t ralise sur des chantillons dos rcolts de quatre patients atteints par la Scoliose Idiopathique de lAdolescent (SIA), ainsi que sur des chantillons dos issus de quatre sujets tmoins (cas traumatiques). Les rsultats montrent que lIGFs et le VEGFs possdent une action dinhibition sur la prolifration dostoblastes scoliotiques et non scoliotiques, et que cette action est proportionnelle la concentration de ces facteurs. Les ostoblastes scoliotiques tendent avoir une prolifration cellulaire plus rapide et plus leve que les tmoins non scoliotiques. De faon gnrale les ostoblastes provenant de patients scoliotiques ont une ostognse in vitro plus acclre que le sujet non scoliotique. De plus, il semble que la mlatonine joue un rle physiologique dans la diffrenciation de lostoblaste scoliotique et elle semble aider avoir une diffrenciation plus prcoce que chez les non traits. Les ostoblastes scoliotiques expriment un dfaut dexpression de lIGF 1 et dIGF 1R en prsence de la mlatonine. En conclusion, le VEGF A et lIGF 1 peuvent galement promouvoir la diffrenciation et la prolifration des ostoblastes humains scoliotiques en culture primaire.
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Depuis la dcouverte de la premire protine possdant une activit tyrosine kinase (protein tyrosine kinase [PTK]) dans les annes 1980, limportance des PTKs et de la phosphorylation sur rsidu tyrosine dans la rgulation des vnements de signalisation intracellulaire est bien tablie. Quant aux protines qui possdent une activit tyrosine phosphatase (protein tyrosine phosphatase [PTP]), dont lexistence na t dvoile quune dixaine dannes plus tard, elles ont longtemps t perues comme des enzymes dont le rle ne se rsumait qu' contrecarrer passivement les activits des PTKs. Il est maintenant clair que les activits des PTPs sont spcifiques, hautement rgules, et quelles doivent tre coordonnes avec celles des PTKs pour une rgulation adquate des vnements de signalisation intracellulaire. En dpit de cette vidence, la contribution des PTPs la rgulation des diffrents processus physiologiques fondamentaux demeure encore peu caractrise. Cest le cas, notamment, de langiogense, le processus par lequel de nouveaux vaisseaux sanguins sont forms partir de ceux prexistants. Le VEGF (Vascular endothelial growth factor), un des facteurs angiogniques les plus importants, est connu pour induire majoritairement ses effets biologiques via lactivation du rcepteur activit tyrosine kinase VEGFR2 (Vascular endothelial growth factor receptor 2). Puisque langiogense est implique dans le dveloppement dune multitude de pathologies, dont la progression tumorale, une meilleure caractrisation des PTPs qui assurent la qualit de la rponse angiognique en agissant de pair avec le VEGFR2 savre cruciale et ce, afin de raffiner les outils thrapeutiques actuels. Lexpression de la PTP DEP-1 corrle avec la dphosphorylation du rcepteur VEGFR2 localis au niveau des jonctions cellules-cellules et contribue linhibition de la prolifration des cellules endothliales en rponse au VEGF lorsque les cellules sont confluence. Par contre, la contribution spcifique de DEP-1 la rgulation des voies de signalisation et des rponses biologiques induites par le VEGF demeurait toujours inconnue. Les travaux de recherche prsents dans cette thse dmontrent tout dabord que DEP-1 rgule ngativement lactivit tyrosine kinase de VEGFR2 en dphosphorylant spcifiquement les rsidus tyrosine Y1054/Y1059 de sa boucle dactivation. Cette dphosphorylation mne par consquent une diminution gnrale de la phosphorylation du rcepteur et une attnuation de la plupart des voies de signalisation induites par le VEGF, incluant la voie mitognique PLC-ERK1/2. Par ailleurs, malgr ce rle ngatif global, nos travaux rvlent tonnement, et pour la premire fois, que DEP-1 contribue dune manire positive la promotion de la survie des cellules endothliales via lactivation de la voie Src-Gab1-Akt en aval du rcepteur VEGFR2. Ce pouvoir pro-survie de DEP-1 dans les cellules endothliales rside avant tout dans sa capacti dphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529). Au cours de notre tude, nous avons pu identifier deux rsidus tyrosine au niveau de lextrmit carboxy-terminale de DEP-1, Y1311 et Y1320, dont la phosphorylation est dpendante de Src. Nos travaux rvlent par ailleurs que ces deux rsidus tyrosine phosphoryls lient le domaine SH2 de Src et que la Y1320 est principalement requise pour lactivation de Src et dAkt en rponse au VEGF dans les cellules endothliales. Ces rsultats constituent donc une avance majeure dans la comprhension des mcanismes molculaires par lesquels DEP-1 peut rguler le programme angiognique dpendant du VEGF. De plus, cette dcouverte dun rle positif pour DEP-1 dans la survie des cellules endothliales pourrait mener llaboration de nouvelles approches thrapeutiques visant inhiber cette fonction spcifique de DEP-1 pour bloquer l'angiogense pathologique.
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Notre laboratoire a dmontr que la capacit proinflammatoire du vascular endothelial growth factor (VEGF-A165) implique la synthse endothliale du facteur dactivation plaquettaire (PAF) via lactivation du rcepteur tyrosine kinase homodimrique VEGFR-2/R-2. La synthse du PAF requiert lactivation de la p38 MAPK et p42/44 MAPK qui activent la phospholipase A2 secrte de type V (sPLA2-V). Nous avons dcouvert que la synthse aigue de prostacycline (PGI2) induite par le VEGF-A165 requiert lactivation des rcepteurs htrodimriques VEGFR-1/R-2. Lactivation slective des rcepteurs du VEGF peut donc agir comme balance dans la synthse de facteurs pro-(PAF) et anti-(PGI2) inflammatoire. Cependant, les tyrosines impliques dans la transphosphorylation de VEGFR-2/R-2 menant la synthse du PAF sont inconnues. Par mutagense dirige, nous avons effectu des transfections transitoires de cellules endothliales avec des plasmides codant pour le VEGFR-2 dont les tyrosines cibles ont t remplaces de faon squentielle par une phnylalanine. Un vecteur vide pcDNA a t utilis comme contrle ngatif. La stimulation des cellules endothliales de laorte bovine (BAEC) transfectes avec le VEGF-A165 (1nM) pendant 15 minutes augmente la synthse du PAF de 300%, laquelle tait similaire dans les BAEC non transfectes. Dans les BAEC transfectes avec les vecteurs pcDNA codant pour les mutations Y801F, Y1059F, Y1175F et Y1214F, nous avons observ une rduction de 54, 73, 68, et 57% respectivement de la synthse du PAF induite par le VEGF par rapport au pcDNA tmoin. Nos rsultats apportent un nouvel aperu sur le mcanisme par lequel le VEGF induit la synthse du PAF qui est connu pour sa contribution dans lactivit pro-inflammatoire du VEGF.
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Bien que lenvironnement intra-utrin dfavorable soit associ des conditions pathologiques lge adulte, les mcanismes mis en place in utero ne sont pas encore lucids. Nous avons tabli un modle de restriction de croissance intra-utrine (RCIU) en donnant une dite faible en sodium la rate pendant la dernire semaine de gestation. Ce modle se caractrise par une diminution de perfusion placentaire et une redistribution du flot sanguin, favorisant lirrigation des organes nobles (cur et cerveau) au dtriment du rein ftal. De plus, lexpression rnale du facteur de croissance endothliale vasculaire (VEGF) est diminue chez le ftus. Lhypothse de travail est que la noglucogense hpatique et rnale augmente chez les ftus RCIU afin de compenser la diminution de perfusion placentaire, et que lexpression rnale des rcepteurs de VEGF (Flt-1 et Flk-1) est altre la suite de la redistribution du flot sanguin. Nos objectifs taient de comparer lexpression protique des enzymes de la noglucogense et des rcepteurs de VEGF entre les ftus tmoins et RCIU. Laldolase B, la fructose-1,6-biphosphatase et la glucose-6-phosphatase augmentent dans les reins de ftus RCIU par rapport aux tmoins alors quaucun changement nest observ dans le foie. De plus, lexpression de ces enzymes est diffrente selon le sexe du ftus. Une diminution de Flt-1 est note dans les reins de ftus RCIU. Nos rsultats dmontrent que des adaptations surviennent chez le ftus la suite dune insulte intra-utrine favorisant sa survie mais ayant des consquences telles que la dysfonction rnale observe chez les adultes de ce modle animal. long terme, ces travaux pourront permettre dentrevoir des avenues pour mieux identifier les approches de prvention lors de naissance la suite dune RCIU.
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Rsum Langiogense est lun des processus les plus importants pour le maintien de lhomostasie de loxygne dans les tissus. Le facteur de croissance de lendothlium vasculaire, VEGF, joue un rle primordial dans la rponse angiognique. Ce facteur de croissance mne lactivation du rcepteur de type 2 du facteur de croissance de lendothlium vasculaire, VEGFR-2. Suite une activation du VEGFR-2, plusieurs cascades de signalisation sont actives dans les cellules endothliales. Afin dattnuer cette signalisation, le VEGFR-2 est multi-ubiquitin sur des rsidus lysine et de cette manire, il est amen aux voies de dgradation, principalement dans les lysosomes. Cette ubiquitination est induite par lassociation de lubiquitine ligase (E3) c-Cbl un rsidu tyrosine phosphoryl du domaine C-terminal du rcepteur. Dans cette tude, nous avons identifi la tyrosine 1319 comme tant ncessaire pour lassociation de c-Cbl au VEGFR-2 et son ubiquitination. Nos rsultats dmontrent aussi que dans des cellules endothliales aortiques bovines, BAEC, la surexpression du rcepteur mutant Y1319F ralentit la dgradation du VEGFR-2 et induit une activation plus forte et prolonge de la synthtase endothliale du monoxyde dazote (eNOS). Ces rsultats nous permettent de mieux comprendre le droulement de la rgulation de la signalisation du VEGFR-2 au niveau intracellulaire. Mots-cls: [Angiogense, VEGFR-2, VEGF, c-Cbl, Ubiquitination, Tyrosine 1319, Dgradation]
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La permabilit vasculaire est une caractristique cruciale de langiogense. Les acteurs principaux sont les cellules endothliales qui la rgulent en rponse divers facteurs permabilisant, tels que le Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). Dans le contexte pathologique du cancer, les cellules tumorales produisent de grandes quantits de VEGF qui stimulent la permabilit, ce qui leur permet dinfiltrer le rseau vasculaire. Il est connu que la tyrosine kinase Src contrle cette modulation de la permabilit. Puisque notre laboratoire a pralablement dmontr que la phosphatase de type rcepteur (PTP) DEP-1 est implique dans lactivation de Src en rponse au VEGF, nous avons mis l'hypothse que DEP-1 pourrait aussi jouer un rle dans la permabilit des cellules endothliales. Grce des expriences de transfections dARN interfrant, nous dmontrons que DEP-1 est important pour la rgulation de la phosphorylation de la VE-Cadhrine, un mdiateur critique de la permabilit. Limpact de DEP-1 sur la dissociation de jonctions intercellulaires est galement dmontr par microscopie immunofluorescence de cellules endothliales. DEP-1 est galement ncessaire laugmentation de la permabilit induite par VEGF in vitro. Deux rsidus tyrosine retrouvs dans la queue carboxy-terminale de DEP-1 sont essentiels lactivation de Src en rponse au VEGF. Suite la transfection dun plasmide encodant DEP-1 mut pour ces deux rsidus, nous dmontrons aussi leur implication dans la rgulation de la permabilit in vitro par DEP-1. Ces travaux permettent ainsi dapprofondir nos connaissances sur un nouveau rgulateur potentiel de la permabilit vasculaire.
Resumo:
Langiogense, caractrise par la formation de nouveaux vaisseaux sanguins partir de vaisseaux prexistants, est un processus accompagn par linflammation, impliquant la synthse et la relche de diffrents facteurs de croissance par les cellules inflammatoires. Parmi ces facteurs, seuls le vascular endothelial growth factor (VEGF) et les angiopotines (Ang1 et Ang2) peuvent participer la rgulation de linflammation et de langiogense. La famille des angiopotines comporte quatre membres, desquels lAng1 et lAng2 ont t les plus tudis. Ces deux mdiateurs inflammatoires sont capables dactiver le rcepteur Tie2, dont lexpression a initialement t rapporte sur les cellules endothliales (CE). Notre laboratoire a t le premier dmontrer lexpression de Tie2 la surface des neutrophiles, ainsi que sa capacit, suite son activation par lAng1 ou lAng2, induire la synthse du facteur dactivation plaquettaire (PAF), lactivation de la 2-intgrine, la migration des neutrophiles ainsi que leur adhsion aux CE. Dautres tudes ont montr que les CE emmagasinent et relchent le VEGF et lAng2, tandis que les pricytes et les cellules musculaires lisses contiennent lAng1. Puisque les neutrophiles relchent le VEGF et que les deux angiopotines ont la capacit dactiver Tie2 sur ces derniers, nous avons voulu dterminer si les neutrophiles contiennent lAng1 et/ou lAng2 et si elles peuvent tre relches suite une stimulation avec des agonistes proinflammatoires. Nous avons dcouvert que lAng1, mais pas lAng2 est prsente dans les neutrophiles, et quelle est relche suite une stimulation au phorbol myristate acetate (PMA). De plus, nous avons dmontr que lAng1 est localise au niveau du cytosol et que sa relche est calcium-indpendante, contrairement au VEGF, qui est localis dans les granules et sa relche est calcium-dpendante. Cette tude dmontre pour la premire fois lexpression et la localisation de lAng1 dans les neutrophiles. Une rcente tude effectue dans notre laboratoire a dmontr que les angiopotines induisent la migration des neutrophiles en activant le rcepteur Tie2 et la voie de la PI3K. De plus, les angiopotines ont potentialis la migration induite par lIL-8. Ainsi, nous avons mis lhypothse que lAng1 et/ou lAng2 seraient capables dinduire la relche et/ou la synthse de lIL-8 par les neutrophiles. Nous avons dmontr pour la premire fois, la capacit de lAng1 induire lexpression de lARNm, ainsi que la synthse et la relche dIL-8 par les neutrophiles. Cependant, un traitement avec lAng2 seule ou en combinaison avec lAng1 na eu aucun effet sur les activits mentionnes ci-dessus. Nous avons aussi observ que la synthse et la relche dIL-8 induite par lAng1 requirent la transcription de lADN en ARNm, suivie par la stabilisation de ce dernier, qui ultimement induit la traduction de lARNm de lIL-8 en sa protine. Finalement, nous avons dmontr que la stimulation des neutrophiles avec lAng1 induit ces activits en activant la voie de la p42/44 MAPK, tout en tant indpendantes de la p38 MAPK et la PI3K/Akt. Ces rsultats sont en lien direct avec une rcente tude dans laquelle nous avons observ que lAng1, mais pas lAng2 est capable daugmenter la survie des neutrophiles via la relche dIL-8.
Pro-inflammatory and angiogenic activities of VEGF and angiopoietins in murine sponge/Matrigel model
Resumo:
La drgulation de la formation et l'intgrit des vaisseaux sanguins peut conduire un tat pathologique tel quobserv dans de nombreuses maladies ischmiques telles que: la croissance de tumeur solide, larthrite rhumatode, le psoriasis, les rtinopathies et l'athrosclrose. Par consquent, la possibilit de moduler l'angiogense rgionale chez les patients souffrant d'ischmie est cliniquement pertinente. Un lment cl dans l'induction de l'angiogense pathologique est une inflammation qui prcde et accompagne la formation des nouveaux vaisseaux. Ce phnomne est dmontr par l'augmentation de la permabilit vasculaire et le recrutement de monocytes/ macrophages et cellules polynuclaires (neutrophiles). En collaboration avec d'autres groupes, nous avons montr que diffrents facteurs de croissance tels que le facteur de croissance endothlial vasculaire et les angiopotines peuvent non seulement promouvoir l'angiogense mais aussi induire diverses tapes connexes au processus de la raction inflammatoire, y compris la synthse et la libration des mdiateurs inflammatoires et la migration des neutrophiles. Les objectifs de notre tude taient d'adresser si le vascular endothelial growth factor (VEGF) et les angiopotines (Ang1 et Ang2) sont capables de promouvoir la formation des nouveaux vaisseaux sanguins au fil du temps et d'identifier la prsence de diffrentes cellules inflammatoires dans ce processus. Des ponges d'alcool polyvinylique strilises et imbibes de Matrigel appauvri en facteur de croissance (contenant PBS, VEGF, Ang1 ou Ang2 (200 ng/200 l)) ont t insres sous la peau de souris C57/Bl6 anesthsies. Les ponges ont ensuite t retires aux jours 4, 7, 14 ou 21 aprs la procdure pour des analyses histologiques, immunohistologiques et cytomtriques. La formation des nouveaux vaisseaux a t valide par la coloration au Trichrome de Masson et des analyses histologiques et immunohistologiques contre les cellules endothliales (anti-CD31). De plus, la maturation des vaisseaux a t dmontre par la coloration squentielle contre les cellules endothliales (anti-CD31) et musculaires lisses (anti-alpha-actine). Nous avons effectu la mme procdure pour caractriser le recrutement de neutrophiles (anti-MPO), et de macrophages (anti-F4/80). Afin de mieux dlimiter la prsence de diffrents sous-ensembles de leucocytes recruts dans les ponges, nous avons utilis une technique de cytomtrie en flux sur des prparations de cellules isoles partir de ces ponges. Nous avons observ que le VEGF et les angiopotines favorisent le recrutement de cellules endothliales et la formation de nouveaux vaisseaux plus rapidement quen prsence de PBS. Une fois form au jour 7, ces nouveaux vaisseaux restent stables en nombre, et ne subissent pas une rorganisation importante de leur surface. Ces vaisseaux maturent grce au recrutement et au recouvrement par les cellules musculaires lisses des novaisseaux. En outre, le microenvironnement angiognique est compos de cellules inflammatoires, principalement de neutrophiles, macrophages et quelques cellules de type B et T. Donc, le VEGF, lAng1 et lAng2 induisent sparment la formation et la stabilisation de nouveaux vaisseaux sanguins, ainsi que le recrutement de cellules inflammatoires avec des puissances diffrentes et une action temps-dpendante dans un modle dponge/Matrigel.
Resumo:
Introduction : Puisque le VEGF promeut linflammation et la novascularisation des plaques athrosclrotiques, il pourrait contribuer lathrognse. Cependant, les donnes cliniques tentant de lier le VEGF la maladie cardiaque athrosclrotique (MCAS) sont controverses. Nous avons investigu lassociation entre les niveaux de VEGF et la svrit de la MCAS. Mthode : Nous avons effectu une tude rtrospective transversale : 56 patients prsentant une MCAS stable et 112 patients avec un syndrome coronarien aigue (SCA) ont t tudis. Nous avons investigu la relation entre la charge athrosclrotique et les niveaux sriques de VEGF en utilisant la coronarographie par analyse quantitative (QCA) et avons valu la morphologie des plaques athrosclrotiques en utilisant limagerie intravasculaire ultrasonore (IVUS). Rsultats : Les niveaux de VEGF taient plus bas chez les patients avec SCA que chez ceux avec MCAS stable. On observe une corrlation positive entre les niveaux de VEGF et le fardeau de la MCAS stable mesure par le QCA Cumulative Coronary Stenosis Score - CCSS (Pearson r= 0,423 et p = 0,001). En analyse multivarie, les niveaux sriques de VEGF demeuraient prdicteurs du CCSS (p=0,003) des patients avec une MCAS stable. Nous avons observ une corrlation positive entre les niveaux de VEGF et le volume de plaque (Spearman r = 0.381, p = 0.035) ainsi que le pourcentage de volume dathrome (Spearman r = 0.466, p = 0.008) mesurs par IVUS. Conclusions : Notre tude suggre un usage potentiel des niveaux srique de VEGF comme biomarqueur de MCAS.
