23 resultados para FoxP3, Galectin-10, autoimmunity, tolerance, CD4 CD25 regulatory T cells
em Université de Montréal, Canada
Resumo:
Les immunoglobulines intraveineuses (IVIg) constituent une prparation polyclonale dIgG isole et regroupe partir du plasma sanguin de multiples donneurs. Initialement utilis comme traitement de remplacement chez les patients souffrant dimmunodficience primaire ou secondaire, les IVIg sont maintenant largement utilises dans le traitement de plusieurs conditions auto-immunes, allergiques ou inflammatoires une dose leve, dite immunomodulatrice. Diffrents mcanismes daction ont t postuls au fil des annes pour expliquer leffet thrapeutique des IVIg dans les maladies auto-immunes et inflammatoires. Entre autre, un nombre grandissant de donnes issues de modles exprimentaux chez lanimal et lhumain suggre que les IVIg induisent lexpansion et augmentent laction suppressive des cellules T rgulatrices (Tregs), par un mcanisme qui demeure encore inconnu. galement, les patients atteints de maladies auto-immunes ou inflammatoires prsentent souvent un nombre abaiss de Tregs par rapport aux individus sains. Ainsi, une meilleure comprhension des mcanismes par lesquels les IVIg modulent les cellules T rgulatrices est requise afin de permettre un usage plus rationnel de ce produit sanguin en tant qualternative thrapeutique dans le traitement des maladies auto-immunes et inflammatoires. Par le biais dun modle exprimental dallergie respiratoire induite par un allergne, nous avons dmontr que les IVIg diminuaient significativement linflammation au niveau des voies ariennes ce, en association avec une diffrenciation des Tregs partir des cellules T non rgulatrices du tissu pulmonaire. Nous avons galement dmontr quau sein de notre modle exprimental, leffet anti-inflammatoire des IVIg tait dpendant des cellules dendritiques CD11c+ (CDs) pulmonaires, puisque cet effet pouvait tre compltement reproduit par le transfert adoptif de CDs provenant de souris pralablement traites par les IVIg. cet effet, il est dj tabli que les IVIg peuvent moduler lactivation et les proprits des CDs pour favoriser la tolrance immunitaire et que ces cellules seraient cruciales pour linduction priphrique des Tregs. Cest pourquoi, nous avons cherch mieux comprendre comment les IVIg exercent leur effet sur ces cellules. Pour la premire fois, nous avons dmontr que la fraction dIgG riche en acide sialique (SA-IVIg) (constituant 2-5% de lensemble des IgG des donneurs) interagit avec un rcepteur dendritique inhibiteur de type lectine C (DCIR) et active une cascade de signalement intracellulaire initie par la phosphorylation du motif ITIM qui est responsable des changements observs en faveur de la tolrance immunitaire auprs des cellules dendritiques et des Tregs. Lactivit anti-inflammatoire de la composante SA-IVIg a dj t dcrite dans des tudes antrieures, mais encore une fois le mcanisme par lequel ce traitement modifie la fonction des CDs na pas t tabli. Nous avons finalement dmontr que le rcepteur DCIR facilite linternalisation des molcules dIgG lies au rcepteur et que cette tape est cruciale pour permettre linduction priphrique des Tregs. En tant que produit sanguin, les IVIg constitue un traitement prcieux qui existe en quantit limite. La caractrisation des mcanismes daction des IVIg permettra une meilleure utilisation de ce traitement dans un vaste ventail de pathologies auto-immunes et inflammatoires.
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La vaccination ADN laide de plasmides codant pour des autoantignes sest avre efficace dans la protection contre plusieurs maladies auto-immunes. Le but de ce mmoire tait dans un premier temps dtablir si un protocole de vaccination ADN compos de 3 injections de pCMV-CTLA-4-NP et de pVR-IL-12 deux semaines dintervalle avait un effet protecteur contre le dveloppement dune hpatite auto-immune chez la souris TTR-NP, un modle murin transgnique de la maladie et prcdemment dvelopp au laboratoire. Dans un deuxime temps, le but tait dlucider, le cas chant, les mcanismes sous-tendant la protection confre par la vaccination ADN. Les hypothses initiales taient quune protection allait effectivement tre confre par la vaccination ADN et que celle-ci pouvait tre attribuable une dviation de la rponse typiquement Th1 de la maladie vers une rponse Th2, un puisement des cellules immunitaires et/ou lactivation et linduction de prolifration de cellules rgulatrices. Les rsultats montrent que la vaccination ADN induit une protection transitoire contre le dveloppement dinfiltrations lymphocytaires au foie. Cette protection se ferait via un puisement des cellules CD4+, CD8+ et CD19+ se retrouvant la rate et exprimant PD 1 dans une plus forte proportion 3 mois, et ne serait mdie ni par les lymphocytes T rgulateurs CD4+CD25+FoxP3+, ni par les cellules CD8+FoxP3+. Une dviation de la rponse Th1 vers une rponse Th2 demeure une explication supplmentaire plausible la protection confre mais ncessiterait une caractrisation en situation plus physiologique avant de pouvoir infrer sur son implication relle. La vaccination ADN ninflue ni sur la prsence dautoanticorps, ni sur les niveaux dalanine aminotransfrase, deux marqueurs de la maladie.
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Lhpatite autoimmune (HAI) rsulte dune perte de tolrance du systme immunitaire envers des antignes de lhpatocyte. Elle peut se prsenter sous forme dhpatite aigu, parfois fulminante, ou comme une maladie chronique menant progressivement une cirrhose hpatique. En absence de traitement, cette maladie est fatale. La pathogense de lHAI et les mcanismes responsables de sa progression restent inconnus ce jour. Lobjectif global de ce projet est dexaminer les facteurs prdisposants et les mcanismes immunologiques responsables de lapparition et de la progression de lHAI. Pour permettre ltude de la pathogense de lHAI, nous avons dvelopp un modle murin exprimental dhpatite autoimmune de type 2. Celui-ci est bas sur la xnoimmunisation de souris C57BL/6 avec les deux antignes cibls dans lHAI de type 2 chez lhomme (CYP2D6 et FTCD). Par mimtisme molculaire, le systme immunitaire de ces souris ragit contre les protines murines homologues et une HAI sensuit. Ce modle exprimental prsente la plupart des caractristiques histologiques, biochimiques et srologiques dune HAI de type 2. Les souris dveloppent une inflammation autoimmune chronique avec prsence dhpatite dinterface et dinfiltrations intralobulaires, un infiltrat compos majoritairement de lymphocytes T CD4+ mais aussi de lymphocytes T CD8+ et B, dune lvation des ALT sriques, des niveaux dimmunoglobulines G circulantes augments ainsi que dautoanticorps anti-LKM1 et anti-LC1. Ltude de linfluence du bagage gntique a permis de dfinir limportance relative des gnes du CMH et des gnes non-CMH sur le dveloppement dune HAI. Les gnes du locus CMH sont essentiels mais insuffisants pour mener au dveloppement dune HAI et donc, la susceptibilit gntique lHAI est comme chez lhomme, multignique. Les patients atteints dHAI de type 2 sont gnralement des jeunes filles. Ltude des influences de lge et du sexe dans ce modle a permis de montrer que les souris femelles avant et au dbut de leur maturit sexuelle sont plus susceptibles au dveloppement dune HAI de type 2. De plus, les femelles ont un nombre rduit de lymphocytes T rgulateurs, ce qui leur confre une susceptibilit accrue compar aux mles. Lensemble de ces travaux nous a conduits proposer un mcanisme o le dveloppement dune HAI chez les femelles dun ge particulier rsulterait de lactivation de cellules T CD4+ autoractives ayant chapp aux mcanismes de tolrance centrale, via un mcanisme de mimtisme molculaire avec un antigne exogne. En prsence dune tolrance priphrique rduite due un faible nombre de cellules T rgulatrices, les cellules T autoractives prolifreraient et activeraient des cellules B autoractives entranant la scrtion dautoanticorps. Lactivation subsquente de cellules T CD8+ cytotoxiques spcifiques amnerait la lyse des hpatocytes et la relche dautoantignes permettant la perptuation de lautoimmunit.
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Lhpatite autoimmune (HAI) est une maladie grave affectant le foie et prsentant un haut taux de mortalit lorsque non traite. Les traitements disponibles sont efficaces, mais de graves effets secondaires leur sont associs. Ces effets secondaires sont gnralement le rsultat d'une forte immunosuppression et dautres sont spcifiques chaque mdicament. Aucune immunothrapie spcifique nest prsentement disponible pour le traitement de lHAI. Rcemment, un modle murin dHAI a t dvelopp dans notre laboratoire par xnoimmunisation des souris C57BL/6 avec les antignes humains de l'HAI de type 2. Ce modle prsente la plupart des caractristiques biochimiques et cliniques retrouves chez les patients atteints d'HAI de type 2. Dans cette tude, nous avons value lefficacit de deux types de traitement pour lHAI de type 2 laide de notre modle murin. Dans un premier temps, lanticorps anti-CD3 a t tudi en prophylaxie et en traitement. Nous avons montr quune posologie de 5g danti-CD3 i.v. par jour pendant 5 jours conscutifs induit une rmission chez les souris avec HAI de type 2 tablie (traitement). Cette rmission est caractrise par une normalisation des niveaux dalanine aminotransfrase et une diminution significative de linflammation hpatique. Cette rmission semble tre associe une dpltion partielle et transitoire des lymphocytes T CD3+ dans la priphrie et une augmentation des lymphocytes T rgulateurs CD4+, CD25+ et Foxp3+ dans le foie. La mme posologie lorsquelle est applique en prophylaxie na pas russi prvenir lapparition de lHAI de type 2. La deuxime voie de traitement consiste en ladministration par voie intranasale dun forte dose de formiminotransfrase cyclodsaminase murin (mFTCD), un autoantigne reconnu dans lHAI de type 2. Une administration en prophylaxie par voie intranasale de 100g de mFTCD par jour durant 3 jours conscutifs arrive prvenir lHAI de type 2 en diminuant linflammation hpatique au bout de deux semaines post-traitement.
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La maladie du greffon contre lhte (GVHD) est la principale cause de mortalit et de morbidit suite aux greffes de cellules souches hmatopotiques. Plusieurs patients demeurent rfractaires aux traitements actuels ce qui rend ncessaire le dveloppement de nouvelles stratgies afin de combattre cette maladie. Dans ltude qui suit, nous avons utilis un nouvel agent thrapeutique, le TH9402, une molcule photosensible et dmontr quelle permet, lorsquexpose la lumire visible (514 nm), dliminer slectivement les cellules T actives in vivo tout en prservant les cellules T au repos et les cellules T rgulatrices (Tregs). Les Tregs ainsi prservs peuvent abroger la rponse alloractive par la scrtion dIL-10 ou par contact cellule-cellule via un mcanisme impliquant le CTLA-4. Nous avons dcouvert que la signalisation du CTLA-4 tait associe une hausse de la population Treg in vitro. Cette hausse est due la conversion de cellules T CD4+CD25- en Tregs et non une prolifration slective des Tregs. Dans la deuxime partie de cette tude, nous avons dmontr que la signalisation de CTLA-4 tait associe une augmentation de lexpression de la protine Indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO). Ces effets ncessitent la dpltion du tryptophane ainsi que de la protine de phase aigue GCN2. Finalement, nous avons observ que linfusion de cellules traites au TH9402 chez des patients souffrant de GVHD chronique est associe une augmentation de la population Treg chez ces patients sans causer de lymphopnie ni de diminution de la rponse immunitaire dirige contre les antignes viraux. Ces rsultats suggrent que le traitement au TH9402 pourrait reprsenter une approche particulirement intressante pour le traitement de la GVHD chronique rfractaire aux traitements actuels. De plus, laugmentation de lexpression dIDO pourrait tre utilise comme valeur prdictive de la rponse du patient au traitement. Ceci pourrait permettre damliorer la qualit de soins ainsi que de la qualit de vie des patients souffrant de GVHD chronique.
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Limportance respective des lymphocytes T rgulateurs naturels gnrs dans le thymus ou induits en priphrie dans la rgulation immunitaire et la rsolution de linflammation est dsormais bien tablie. Nous avons contribu mettre en vidence une nouvelle voie dinduction de lymphocytes T rgulateurs priphriques partir de cellules T humaines CD4+CD25- naves et mmoires. Nous avons montr que lengagement de la molcule ubiquitaire transmembranaire CD47 sur la cellule T par un anticorps monoclonal ou par le peptide 4N1K (peptide driv du domaine carboxy-terminal de la thrombospondine-1 et spcifique du site de liaison CD47) induisait des lymphocytes T CD4+ rgulateurs exerant une fonction suppressive sur les lymphocytes T effecteurs. Les proprits suppressives induites par la thrombospondine-1 confortent les fonctions anti-inflammatoires de cette protine de la matrice extracellulaire. Linhibition exerce par les lymphocytes T rgulateurs induits dpend du contact intercellulaire entre les cellules T rgulatrices et leurs cibles, et est indpendante du TGF-. Nos rsultats dmontrent galement le rle de CD47 sur le lymphocyte T CD4+ dans la rponse immunitaire spcifique de lantigne in vivo. En effet, les souris BALB/c dficientes pour CD47 prsentent un biais de la scrtion danticorps et de cytokines de type Th1, alors que les souris BALB/c sont dcrites comme exprimant un profil de production de cytokines de type Th2. Nos travaux mettent en vidence le rle de CD47 dans linhibition du dveloppement dune rponse cellulaire et humorale de type Th1 in vivo, confirmant de prcdentes tudes in vitro ralises avec des cellules T CD4+ humaines. Nous prsentons galement le rle inhibiteur de lengagement de CD28 in vitro sur la diffrenciation en cellules Th17 des lymphocytes T CD4+ nafs isols de souris BALB/c. Le mcanisme propos est dpendant de la production de lIL-2 et de lIFN- et indpendant de la prsence de lymphocytes T rgulateurs. Notre tude du rle de deux molcules transmembranaires CD47 et CD28 exprimes sur la cellule T CD4+, contribue une meilleure connaissance des mcanismes impliqus dans la tolrance immunologique, la rsolution de linflammation et la diffrenciation des cellules T "helper" CD4+.
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Limmunosuppression optimale aprs greffe dorgane solide est une balance dlicate et propre chaque individu entre le risque de rejet et les risques lis une surexposition au traitement immunosuppresseur. Lvaluation de la fonction rsiduelle des lymphocytes T aprs stimulation par un mitogne (pharmacodynamie effective) devrait permettre de mesurer leffet direct des mdicaments immunosuppresseurs sur leur cible. Nous avons tudi diffrents paramtres de pharmacodynamie effective chez 34 receveurs pdiatriques de greffe dorganes solides traits par tacrolimus et mycophnolate. Les tests proposs dans ce travail sont adapts au milieu pdiatrique et une ralisation en temps rel. La quantification du CD25 parmi les CD4 activs par lOKT3 permet de distinguer deux groupes de patients selon leur degr dimmunosuppression. Lge mdian est plus bas et la concentration plasmatique mdiane en MPA plus leve dans le groupe de patients plus fortement immunosupprims. Ltude des paramtres immunologiques pouvant influencer la rponse (scrtion des interleukines, proportion des sous-populations lymphocytaires CD4, CD8, T nafs et Trg) ainsi que ltude du pouvoir de restauration de la fonction lymphocytaire par lIl-2, la guanosine ou la xanthosine, ne permettent pas de mieux comprendre les variabilits interindividuelles observes. Ces rsultats devront tre confirms sur une cohorte plus grande de patients afin de juger de leur intrt en pratique clinique.
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Lhpatite auto-immune (HAI) est une maladie chronique caractrise par une destruction progressive du parenchyme hpatique par le systme immunitaire. La majorit des patients atteints dHAI sont des femmes (75% 90% des cas). Lamlioration des traitements au cours des dernires annes a permis un grand nombre de ces femmes de devenir enceintes. Pendant la grossesse, une rmission spontane de la maladie a pu tre observe chez les femmes atteintes dHAI. Cette rmission est temporaire et elle est gnralement suivie dune rechute suite laccouchement (post-partum). Les causes exactes de cette rmission associe la grossesse et de la rechute post-partum ne sont pas connues ce jour. Nous avons donc tent de reproduire ces phnomnes dans un modle murin dHAI dvelopp dans notre laboratoire, afin de dterminer les mcanismes possiblement impliqus. Notre modle dHAI consiste en une xno-immunisation de souris C57BL/6 avec les auto-antignes impliqus dans lHAI de type 2 chez lhumain. Nous avons ainsi accouples des souris pralablement xno-immunises, puis nous les avons sacrifies au dbut de la 3e semaine de gestation ou 2 3 semaines post-partum, afin dvaluer les dommages hpatiques et afin dtudier la rponse immunitaire. Comme chez les femmes atteintes dHAI, les souris prsentent une rmission de la maladie pendant la grossesse. Nous en sommes venus cette conclusion par lobservation dune diminution de linflammation hpatique, des niveaux de transaminases sriques et des titres dauto-anticorps circulants. linverse des humains, les souris xno-immunises ne prsentent pas de rechute post-partum. Une analyse des cellules rgulatrices (cellules T rgulatrices et cellules B productrices d'IL-10) suggre une implication des Tregs hpatiques dans la rmission, car ceux-ci sont augments pendant la gestation. Ces Tregs hpatiques sont majoritairement dorigine thymique et ne semblent pas particulirement attirs au foie en rponse linflammation. La polarisation TH2 est un phnomne connu pendant la grossesse, par contre elle ne semble pas influencer la rponse auto-immune dans nos souris. Une meilleure comprhension des mcanismes dimmunosuppression observs lors de la grossesse pourrait mener au dveloppement dune thrapie mieux cible.
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Les chimiokines et leurs rcepteurs respectifs jouent un rle important dans limmunit inne et adaptative. Les rcepteurs de chimiokines identifient des cellules T CD4+ avec potentiel de migration dans des tissus spcifiques et fonctionnalit distincte du point de vue de la spcificit antignique et de la production de cytokines. Lidentit de la population des cellules T CD4+ susceptibles versus rsistantes linfection par le virus de limmunodficience humaine (VIH) reste mal dfinie. Le recrutement dans les muqueuses intestinales dun excs de cellules T effectrices (CD8+) compar aux cellules cibles (CD4+) reprsente un bon pronostic de linfection par le virus de limmunodficience simienne (VIS), tandis que la dpltion des cellules Th17 dans les tissus lymphodes associs au tractus gastro-intestinal (GALT) est un marqueur de la progression de linfection VIH. Leffet rgulateur des chimiokines sur lactivation de la rplication virale dans diffrentes sous-populations cellulaires T CD4+ reste peu tudi. Ce projet de matrise est divis en 3 parties: (1) lidentification des rcepteurs de chimiokines CCR4, CXCR3 et CCR6 comme marqueurs de surfaces des sous populations T CD4+ avec susceptibilit distincte linfection par le VIH; (2) la caractrisation phnotypique et fonctionnelle des cellules T CD4+ et T CD8+ spcifiques au VIH de sujets progression lente vers le stade sida (LTNP); et (3) les effets des chimiokines ligands de CCR4, CXCR3 et CCR6 sur lactivation cellulaire et la rplication virale in vitro. Nos rsultats dmontrent que les cellules T CD4+ CCR4+CCR6+ (profile cytokinique Th17) et CXCR3+CCR6+ (profile cytokinique Th1/Th17) sont hautement permissives linfection par le VIH. Nous proposons galement de nouveaux corrlats de protection immunitaire contre le VIH chez les sujets LTNP: (i) le potentiel de co-localisation dans les muqueuses intestinales des cellules T CD4+ et CD8+ spcifiques au VIH via lintgrine 7, (ii) le ratio lev entre les cellules T effectrices (CD8+) versus les cellules cibles (CD4+) spcifiques au VIH, (iii) le profil cytokinique Th17 et (iv) la capacit des cellules T CD4+ et CD8+ spcifiques au VIH produire des ligands de CCR5 bloquant lentre virale. Finalement, nos rsultats sur leffet co-stimulateur des chimiokines sur les cellules T et leurs effets opposs sur la rplication virale dmontrent limplication du rseau des chimiokines dans la rgulation de la pathogense de linfection VIH.
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Les travaux antrieurs du laboratoire ont dmontr le rle du CD47 dans la fonction des cellules dendritiques ainsi que dans linduction des lymphocytes T rgulateurs (Tregs) chez lhumain in vitro. Notre premier objectif tait de dterminer le rle de CD47 sur la fonction des DCs in vivo. Nos travaux dmontrent que le CD47 contrle slectivement la migration des DCs au travers des vaisseaux lymphatiques et des barrires cellulaires endothliales in vivo sans interfrer avec celle des lymphocytes T et B. Des expriences de migration comptitive et d immunisation active avec des DCs mylodes dmontrent que la migration des DCs est dpendante de lexpression du CD47 sur les DCs et non sur les cellules endothliales. Ce dfaut de migration est corrl avec labsence de DCs splniques dans la zone marginale chez nos souris CD47-/-. Notre second objectif tait de dterminer le rle de CD47 dans lhomostasie et la fonction des Tregs. Nous dmontrons que lexpression du CD47 contrle slectivement lhomostasie dune sous-population de Tregs CD103+ ltat de base. La proportion de cellules actives/mmoires (CD44hi CD62Llo ) Foxp3+ CD103+ augmente rapidement au cours du vieillissement chez nos souris CD47-/- compare aux souris CD47+/+ du mme ge, tandis que le pourcentage de cellules (CD44loCD62Lhi) Foxp3+ CD103- reste comparable entre les deux souches de souris. En conclusion, le CD47 inhibe la prolifration excessive des Tregs CD103+ empchant ainsi laccumulation de ces cellules en absence dinflammation. Les DCs et les Tregs sont troitement rgules de manire reciproque. Cette rgulation croise contribue au maintien dun quilibre entre limmunit protectrice et la tolrance. La perspective de nos travaux est dapprofondir nos connaissances sur le rle du CD47 et de ses ligands dans la rgulation des DCs par les Tregs et vice et versa. Les DCs et les Tregs tant impliqus dans la pathogense de multiples maladies telles que le cancer, les maladies infectieuses et les maladies auto-immunes. Par consquent, nos tudes pourraient ouvrir des portes de nouvelles stratgies thrapeutiques.
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La raction du greffon contre lhte (GvH) est responsable dun grand taux de morbidit et de mortalit chez les patients recevant des greffes de cellules souches (GCSH) allogniques. Dans ce contexte, les cellules T rgulatrices sont largement tudies et semblent avoir un grand potentiel dutilisation dans le domaine de la thrapie cellulaire de la GvH. Parmi les populations cellulaires T rgulatrices, les lymphocytes T CD4-CD8- TCR+ Doubles-Ngatifs (DN), qui ne reprsentent que 1-3% des lymphocytes T, ont t dcrits. Ces cellules ont des proprits inhibitrices de la rponse immunitaire qui savrent spcifiques aux antignes auxquels elles ont pralablement t exposes. La rpression de la rponse immunitaire par les cellules T DN rgulatrices semble tre un mcanisme important impliqu dans linduction de la tolrance aux allo-antignes. De plus, ces cellules confrent une tolrance immunitaire dans des modles de greffes allogniques et xnogniques. En effet, ces cellules ont la capacit dinhiber la raction contre un allo-antigne auquel elles ont t exposes, sans inhiber la raction contre un allo-antigne inconnu. Les cellules T DN ont t isoles et caractrises chez lhomme o elles ont la capacit dinteragir avec des cellules prsentatrices dantignes (APCs) par un contact cellulaire, comme chez la souris. Cependant, leur capacit immunomodulatrice reste inconnue chez lhumain. Notre objectif consistait donc principalement tudier le rle et le mcanisme daction des cellules T DN rgulatrices humaines in vitro, en tudiant leur capacit inhiber une raction lymphocytaire mixte (MLR). Nous avons montr que les cellules T DN stimules par un allo-antigne donn inhibent des cellules syngniques effectrices diriges contre ce mme alloantigne mais ninhibent pas des cellules syngniques effectrices diriges contre un autre alloantigne, dmontrant ainsi la spcificit aux antignes de ces cellules. De plus, les T DN non stimules par un allo-antigne nont pas de rle inhibiteur. Cependant, durant cette inhibition, nous nobservons pas de modulation de lexpression des marqueurs dactivation et dinduction de lapoptose. Afin dtudier le mcanisme daction des cellules T DN, nous avons mesur lexpression intracellulaire de la granzyme B. Les rsultats dmontrent que les cellules T DN stimules expriment un niveau significativement plus lev de granzyme B que les cellules T DN non-stimules par lallo-antigne. Ceci suggre que limmunosuppression induite par les cellules T DN stimules pourrait passer par la voie granzyme B. Le mcanisme utilis par ces cellules reste tre confirm par nos futures expriences.
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Introduction: Lactivation des cellules stellaires hpatiques (CSHs) est un point cl du processus de fibrose hpatique. Les lymphocytes T CD4+ intra-hpatiques sont une source majeure de cytokines anti-inflammatoires comme lIL-10 et pro-inflammatoire (IL-17A), hpatoprotectrice (IL-22) produites par les Th17. Les Th17 sont impliqus dans de nombreuses pathologies inflammatoires mais leffet de ces cellules sur les CSHs nest pas encore lucid. Objectif: Comprendre le rle des cytokines de type Th17 dans le processus dactivation des CSHs. Mthodes: La ligne de CSHs humaine LX2 a t stimule par lIL-17A ou lIL-22 puis compare des cellules traites par le TGF-b et le tampon phosphate salin (PBS). Lactivation des CSHs a t value en examinant les molcules profibrotique alpha-smooth muscle actin (a-SMA), collagne de type I (COL1A1) et inhibiteur produits par les tissus des mtalloprotases matricielles I (TIMP-I) par q-PCR. Lexpression protique a t valide par immunobuvardage ou coloration au rouge de picro Sirius. Lexpression membranaire de lIL-10Rb, du TGF-b-RII et de lIL-17RA a t mesure par cytomtrie en flux. Rsultats: LIL-17A et lIL-22 nactivent pas les cellules LX2, car aucune induction da-SMA, de COL1A1 et de TIMP-I na t observe. Cependant, lIL-17A et lIL-22 sensibilisent les CSHs laction du TGF-b, tel que dmontr par une forte expression et production da-SMA, collagne type I et TIMP-I. LIL-17A, mais pas lIL-22, induit la surexpression la surface cellulaire du TGF-b-RII et inhibe partiellement la baisse dexpression du TGF--RII aprs stimulation au TGF-b. Conclusion: Nos rsultats dmontrent une fonction pro-fibrotique de lIL-17A et de lIL-22, car les deux cytokines sensibilisent les CSHs laction du TGF-b. LIL-17A agit via la surexpression et la stabilisation du TGF-b-RII tandis que lIL-22 agit probablement par des mcanismes intracellulaires.
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CD4+ T lymphocytes play an important role in CD8+ T cell-mediated responses against tumors. Considering that about 20% of melanomas express major histocompatibility complex (MHC) class II, it is plausible that concomitant antigenic presentation by MHC class I and class II complexes shapes positive (helper T cells) or negative (regulatory T cells) anti-tumor responses. Interestingly, gp100, a melanoma antigen, can be presented by both MHC class I and class II when expressed endogenously, suggesting that it can reach endosomal/MHC class II compartments (MIIC). Here, we demonstrated that the gp100 putative amino-terminal signal sequence and the last 70 residues in carboxy-terminus, are essential for MIIC localization and MHC class II presentation. Confocal microscopy analyses confirmed that gp100 was localized in LAMP-1+ endosomal/MIIC. Gp100-targeting sequences were characterized by deleting different sections in the carboxy-terminus (residues 590 to 661). Transfection in 293T cells, expressing MHC class I and class II molecules, revealed that specific deletions in carboxy-terminus resulted in decreased MHC class II presentation, without effects on MHC class I presentation, suggesting a role in MIIC trafficking for these deleted sections. Then, we used these gp100-targeting sequences to mobilize the green fluorescent protein (GFP) to endosomal compartments, and to allow MHC class II and class I presentation of minimal endogenous epitopes. Thus, we concluded that these specific sequences are MIIC targeting motifs. Consequently, these sequences could be included in expression cassettes for endogenously expressed tumor or viral antigens to promote MHC class II and class I presentation and optimize in vivo T cell responses, or as an in vitro tool for characterization of new MHC class II epitopes.
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La tolrance orale permet la modulation de la rponse immunitaire lgard des antignes exognes prsents dans la lumire intestinale. Essentiels ltablissement dune relation symbiotique entre le systme immunitaire et la flore intestinale, linduction et le maintien de la tolrance orale reposent sur diffrents mcanismes immunologiques. Parmi eux, linduction de cellules T rgulatrices par les cellules dendritiques et de mcanismes apoptotiques. Or, la glycoprotine membranaire CD47 est implique, en priphrie, dans ces mcanismes. Cependant, le rle de CD47 dans la tolrance orale nest pas connu. laide dun modle murin dficient en CD47, nous avons dmontr principalement, que labsence de CD47 est associe une diminution de 50 % de la proportion de cellules dendrites mylodes CD11b+CD103- retrouves dans les ganglions msentriques. Suite au transfert adoptif de cellules T antignes spcifiques dans nos diffrents modles exprimentaux, on a, aussi, observ une diminution de 45 % de leur niveau dactivation dans les ganglions msentriques. Malgr les effets observs, le CD47 nest pas impliqu dans linduction dune raction de tolrance orale secondaire ladministration intragastrique de fortes doses dovalbumine. Cependant, nous avons dmontr que CD47 est implique au niveau de la migration des cellules dendritiques de la peau et de certaines sous-populations retrouves dans les ganglions msentriques.
Resumo:
Linfection par le VIH-1 est caractrise par une dpltion progressive des cellules T CD4+ ainsi que par un dysfonctionnement des cellules T qui, en labsence de traitements anti-rtroviraux, conduit inluctablement la progression de la maladie vers le stade SIDA. Certains des mcanismes impliqus dans ce dysfonctionnement de la rponse cellulaire T ont t lucids et ont rvl un rle important de la molcule PD-1 dans lexhaustion des cellules T en phase chronique de linfection. En effet, des niveaux levs de PD-1 ont t associs une charge virale leve ainsi qu une diminution de la production de cytokines et de la capacit de prolifrer des cellules T spcifiques du virus. De plus, bloquer in vitro linteraction de PD-1 avec son ligand PD-L1 en utilisant un anticorps bloquant rtabli la fonction de ces cellules. De faon intressante, notre groupe ainsi que dautres quipes, ont montr que lexpression de PD-1 tait non seulement augmente sur les cellules spcifiques de lantigne mais aussi sur les cellules T totales. Cependant, peu de choses sont connues quant limpact de lexpression de PD-1 sur le renouvellement et la diffrenciation des cellules T qui expriment PD-1, et ce au cours de linfection. Lexpression de PD-1 na notamment pas t tudie en phase aigue de linfection. Nous montrons clairement que, aussi bien chez les individus en phase aigue quen phase chronique de linfection, lexpression de PD-1 est augmente sur toutes les sous-populations T, y compris les cellules naves. Nous avons galement mis en relief une distribution anormale des sous-populations T, ces cellules ayant un phnotype plus diffrenci, et ce tous les stades de la maladie. Dans cette thse, nous discutons le rle possible de PD-1 dans lhomostasie des cellules T chez les individus infects par le VIH-1. En tudiant la transition de la phase aigue la phase chronique de linfection, nous avons trouv que les sous-populations T CD8+ des individus rcemment infects exprimaient moins de PD-1 que celles des individus un stade plus avanc de la maladie. Ces niveaux plus levs de PD-1 sur les cellules T CD8+ en phase chronique sont associs des niveaux rduits de prolifration in vivo comme mesur par lexpression de Ki67 suggrant que lexpression de PD-1 est partiellement implique dans cette perte de fonction des cellules T CD8+. De plus, les cellules naves saccumulent en frquence lors de la transition de la phase aigue la phase chronique de linfection. Considrant que les cellules naves expriment dj des hauts niveaux de PD-1, nous avons mis lhypothse que lactivation initiale des cellules T chez les individus chroniquement infects est affecte. En rsum, nous proposons un modle o des hauts niveaux dexpression de PD-1 sont associs (1) un dysfonctionnement de la rponse cellulaire T CD8+ et (2) un dfaut dactivation des cellules naves ce qui contribue non seulement la progression de la maladie mais aussi ce qui va limiter lefficacit de potentiels vaccins dans linfection par le VIH-1 en empchant toute nouvelle rponse dtre initie. Afin de mieux dissquer la rponse immunitaire mise en place lors dune infection comme celle du VIH-1, nous avons dvelopp un outil qui permet de dtecter les cellules T CD4+ i.e. des ttramres de CMH de classe II. Ces ractifs ont pour but daugmenter lavidit du CMH de classe II pour son ligand et donc de dtecter des TCR de faible affinit. Dans cette thse, nous dcrivons une mthode originale et efficace pour produire diverses molcules de HLA-DR liant de faon covalente le peptide antignique. Mieux dterminer les mcanismes responsables de lexhaustion des cellules T dans linfection par le VIH-1 et de la progression de la maladie, ainsi que dvelopper des outils de pointe pour suivre ces rponses T, est central une meilleure comprhension de linteraction entre le virus et le systme immunitaire de lhte, et permettra ainsi le dveloppement de stratgies pertinentes pour lutter contre linfection par le VIH-1.
