97 resultados para Transfection transitoire
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Thse numrise par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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Limplication des cellules B dans le dveloppement de lauto-immunit ne cesse dtre illustre par de rcentes publications. Les cellules prsentent des peptides du soi aux cellules T auto-ractives ce qui mne la production de cytokines pro-inflammatoires et danticorps auto-ractifs. Dans le prsent document, nous explorons la prsentation antignique et la modification post-traductionnelle du complexe majeur dhistocompatibilit II (CMH-II). MARCH1 est une E3 ubiquitine ligase qui cible le CMH-II et le relocalise le complexe vers les endosomes de recyclage. Ainsi, MARCH1 est un inhibiteur de la prsentation dantignes exognes. Ici, nous dmontrons que MARCH1 est exprim seulement dans la sous-population des cellules B folliculaires et que cette expression est perdue lors de lentre dans les centres germinatifs. Nous proposons que MARCH1 tablie une barrire de formation de centres germinatifs. Nous dmontrons le lien entre MARCH1 et la hausse de CMH-II la surface des cellules B la suite dun traitement lIL-10. De plus, nous avons test plusieurs stimuli activateurs des cellules B et dmontrons que MARCH1 est rgul la baisse dans tous les cas. De plus, nous mettons en valeurs le rle de la voie canonique dactivation de NF-B dans cette rgulation de MARCH1. Finalement, nous avons dvelopp un systme de lentivirus exprimant MARCH1 qui nous permet de forcer lexpression de MARCH1 dans des cellules rfractaires la transfection. Nous discutons de limplication de cette rgulation du CMH-II par MARCH1 dans le dveloppement de maladies auto-immunes.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral.
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La permabilit vasculaire est une caractristique cruciale de langiogense. Les acteurs principaux sont les cellules endothliales qui la rgulent en rponse divers facteurs permabilisant, tels que le Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). Dans le contexte pathologique du cancer, les cellules tumorales produisent de grandes quantits de VEGF qui stimulent la permabilit, ce qui leur permet dinfiltrer le rseau vasculaire. Il est connu que la tyrosine kinase Src contrle cette modulation de la permabilit. Puisque notre laboratoire a pralablement dmontr que la phosphatase de type rcepteur (PTP) DEP-1 est implique dans lactivation de Src en rponse au VEGF, nous avons mis l'hypothse que DEP-1 pourrait aussi jouer un rle dans la permabilit des cellules endothliales. Grce des expriences de transfections dARN interfrant, nous dmontrons que DEP-1 est important pour la rgulation de la phosphorylation de la VE-Cadhrine, un mdiateur critique de la permabilit. Limpact de DEP-1 sur la dissociation de jonctions intercellulaires est galement dmontr par microscopie immunofluorescence de cellules endothliales. DEP-1 est galement ncessaire laugmentation de la permabilit induite par VEGF in vitro. Deux rsidus tyrosine retrouvs dans la queue carboxy-terminale de DEP-1 sont essentiels lactivation de Src en rponse au VEGF. Suite la transfection dun plasmide encodant DEP-1 mut pour ces deux rsidus, nous dmontrons aussi leur implication dans la rgulation de la permabilit in vitro par DEP-1. Ces travaux permettent ainsi dapprofondir nos connaissances sur un nouveau rgulateur potentiel de la permabilit vasculaire.
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Les personnes non-voyantes montrent dans les diffrents aspects de leurs vies quelles sont capables de sadapter la privation visuelle en utilisant les capacits intactes comme lou ou le toucher. Elles montrent quelles peuvent bien voluer dans leur environnement en absence de vision et dmontrent mme des fois des habilets suprieures celles des personnes voyantes. La recherche de ces dernires dcennies sest beaucoup intresse aux capacits adaptatives des non-voyants surtout avec lavnement des nouvelles techniques dimagerie qui ont permis dinvestiguer des domaines qui ne ltaient pas ou ltaient difficilement avant. Les capacits suprieures des non voyants dans lutilisation plus efficace des informations auditives et tactiles semblent avoir leur base neuronale dans le dans le cortex visuel dsaffrent, qui continu tre fonctionnel aprs la privation sensorielle et sen trouve recrut pour le traitement de stimulations dites intermodales : auditives, tactiles et mme montre une implication dans des processus de plus haut niveau, comme la mmoire ou le langage. Cette implication fonctionnelle intermodale rsulte de la plasticit du cortex visuel c'est--dire sa capacit changer sa structure, sa fonction et dadapter ses interactions avec les autres systmes en labsence de vision. La plasticit corticale nest pas exclusive au cortex visuel mais est un tat permanent de tout le cerveau. Pour mesurer lactivit du cortex visuel des non voyants, une mesure dexcitabilit de ses neurones consiste mesurer le temps de recouvrement de londe N1 en potentiels voqus, qui est plus rapide chez les non voyants dans la modalit auditive. En effet, les rponses en potentiels et champs voqus ont t utiliss en EEG/MEG pour mettre en vidence des changements plastiques dans le cortex visuel des non-voyants pour le traitement de stimuli dans les modalits auditives et tactiles. Ces rponses taient localises dans les rgions postrieures chez les non voyants contrairement aux contrles voyants. Un autre type de rponse auditive a reu moins dintrt dans la recherche concernant la rorganisation fonctionnelle en relation avec la privation sensorielle, il sagit de la rponse auditive oscillatoire (Auditory Steady-State Response ASSR). Cest une rponse qui a lavantage dosciller au rythme de stimulation et dtre caractris par une rponse des aires auditives tiquete la frquence de stimulation. Cette tiquette se prsente sous la forme quun pic dnergie spectrale important qui culmine aux frquences prsentes dans la stimulation. Elle a galement lavantage dtre localise dans les rgions auditives primaires, de l tout changement de localisation de cette rponse chez des non voyants en faveur des rgions visuelles pourrait tre considr comme une vidence de la rorganisation fonctionnelle qui sopre aprs une privation sensorielle prcoce. Le but de cette thse est donc dutiliser la rponse oscillatoire lcoute des sons moduls en amplitude (MA) pour mettre en vidence les corrlats de la rorganisation fonctionnelle dans le cortex visuel des non-voyants prcoces. La modulation de la rponse auditive dans les rgions visuelles nous permettra de montrer quune rorganisation est possible chez les non-voyants pour ce traitement intermodal. La premire tude est une validation du paradigme exprimental frequency tagged sounds. Il sagit de montrer quune tche de dtection de changement dans la stimulation, permet de moduler la rponse ASSR aux sons moduls en amplitude en vue de lutiliser dans les tudes chez les non voyants et dans les conditions dune privation visuelle transitoire (avec les yeux bands). Un groupe de sujets voyants ont ralis une tche de dtection de changement dans la stimulation les yeux ouverts dans deux conditions : coute active qui consiste dtecter un changement dans la frquence porteuse de la modulation en appuyant avec lindex droit sur un bouton de rponse et une condition dcoute passive. Les sons taient prsents en coute monaurale et dichotique. Les rsultats ont montr une diffrence significative loccurrence du changement dans la stimulation en coute dichotique seulement. Les schmas de plus grande rponse controlatrale et de suppression binaurale dcrit dans la littrature ont t confirms. La deuxime tude avait pour but de mettre en vidence une rorganisation rapide de la rponse ASSR chez un groupe de sujets voyants dans les conditions de privation visuelle transitoire de courte dure, par bandage des yeux pendant six heures. Le mme protocole exprimental que la premire tude a t utilis en coute active seulement. Les rsultats montrent que dans ces conditions une modulation de la rponse corticale en coute dichotique dans les rgions visuelles est possible. Ces sources dactivit occipitale adoptent une proprit du cortex auditif qui est le battement binaural, c'est--dire loscillation de la rponse ASSR la diffrence des frquences prsentes dans chaque oreille. Cet effet est prsent chez la moiti des sujets tests. La reprsentation corticale des sources occipitales volue durant la priode de privation et montre un dplacement des sources dactivit dans la direction antropostrieure la fin de la priode de privation. La troisime tude a permis de comparer le traitement de la rponse ASSR dans un groupe de non-voyants congnitaux un groupe de voyants contrles, pour investiguer les corrlats de la rorganisation fonctionnelle de cette rponse aprs une privation sensorielle de longue dure c'est--dire chez des non voyants congnitaux. Les rsultats montrent des diffrences significatives dans la reprsentation spectrale de la rponse entre les deux groupes avec nanmoins des activations temporales importantes aussi bien chez les non voyants que chez les contrles voyants. Des sources distribues ont t localises dans les rgions associatives auditives dans les deux groupes la diffrence des non voyants o il y avait en plus limplication des rgions temporales infrieures, connues comme tant actives par la vision des objets chez les voyants et font partie de la voie visuelle du quoi. Les rsultats prsents dans le cadre de cette thse vont dans le sens dune rorganisation rapide de la rponse auditive oscillatoire aprs une privation visuelle transitoire de courte dure par limplication des rgions visuelles dans le traitement de la rponse ASSR par lintermdiaire du dmasquage de connections existantes entre le cortex visuel et le cortex auditif. La privation visuelle de longue dure, elle conduit des changements plastiques, dune part intra modaux par lextension de lactivit aux rgions temporales suprieures et mdianes. Dautre part, elle induit des changements inter modaux par limplication fonctionnelle des rgions temporales infrieures visuelles dans le traitement des sons moduls en amplitude comme objets auditifs alors quelles sont normalement ddies au traitement des objets visuels. Cette rorganisation passe probablement par les connections cortico-corticales.
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Ce mmoire porte sur les mcanismes de relaxation et de fuite des excitons dans des systmes de botes quantiques(BQs) dInAs/InP. Les systmes sont composs dun sub- strat volumique dInP, appel matrice (M), dun puits quantique dInAs, nomm couche de mouillage (CM), et des familles de BQs dInAs. La distinction entre les familles est faite par le nombre de monocouche dpaisseur des botes qui sont beaucoup plus larges que hautes. Une revue de littrature retrace les principaux mcanismes de relaxation et de fuite des excitons dans les systmes. Ensuite, diffrents modles portant sur la fuite thermique des excitons des BQs sont compars. Les types de caractrisations dj produites et les spcifications des croissances des chantillons sont prsents. Lapproche adopte pour ce mmoire a t de caractriser temporellement la dynamique des BQs avec des mesures dabsorbtion transitoire et de photoluminescence rsolue en temps (PLRT) par addition de frquences. Lexprience dabsorption transitoire na pas fait ressortir de rsultats trs probants, mais elle est explique en dtails. Les mesures de PLRT ont permis de suivre en temprature le temps de vie effectif des excitons dans des familles de BQs. Ensuite, avec un modle de bilan dtaill, qui a t bien explicit, il a t possible didentifier le rle de la M et de la CM dans la relaxation et la fuite des excitons dans les BQs. Les ajustements montrent plus prcisment que la fuite de porteurs dans les BQs se fait sous la forme de paires dlectrons-trous corrles.
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Le rcepteur CD36 est impliqu dans le transport des acides gras libres non estrifis (AGNE) au niveau des tissus cardiaque et priphriques. Les dommages tissulaires et la dysfonction cardiaque observs aprs une ischmie-reperfusion (I/R) du myocarde sont en partie lis linternalisation et au mtabolisme oxydatif accrus des AGNE dont la concentration sanguine augmente transitoirement aprs un infarctus du myocarde, contrairement ce qui est observ chez des souris dficientes en CD36. Nous avons mis lhypothse selon laquelle le EP 80317, un ligand synthtique du rcepteur CD36, exercerait un effet cardioprotecteur contre les dommages induits par une ischmie transitoire du myocarde. Nos objectifs taient 1) de vrifier leffet cardioprotecteur du EP 80317 et 2) de dfinir son mcanisme, plus prcisment de documenter leffet du traitement sur le mtabolisme lipidique. cette fin, des souris de type sauvage ont t traites par le EP 80317 (289 nmol/kg) par voie sous-cutane pendant 14 jours avant dtre soumises 30 minutes dischmie suivant la ligature de lartre coronaire gauche descendante et de sa reperfusion pendant une priode de 6 ou 48 heures. Le cur et les tissus priphriques (foie, muscle squelettique et dpts adipeux) ont t prlevs pour dterminer le profil de certains gnes impliqus dans la rgulation du mtabolisme lipidique. Nos travaux ont montr que leffet cardioprotecteur dun traitement prventif par le EP 80317 est associ une augmentation transitoire du stockage des triglycrides et dune rduction des AGNE circulants.
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CONTEXTE: Bien que la dysfunction mitochondriale et le stress oxydant jouent des rles prpondrants dans plusieurs conditions pathologiques, ils nont pas t tudis de faon extensive au niveau du tube digestif qui est constamment expos aux oxydants (provenant de lalimentation) et divers agents pathognes. Lingestion simultane de sels ferreux et dacide ascorbique peut causer le dommage des macromolcules par oxydation. Le Nuclear factor erythroid 2 related factor (Nrf2) est un important facteur de transcription sensible au potentiel redox et qui protge contre le stress oxydant en induisant des gnes anti-oxydants et de detoxification par sa liaison llment de rponse antioxydante (ARE). Les fonctions anti-oxydantes et anti-inflammatoires de Nrf2 ont t dcrites dans une varit de types cellulaires et de tissus. Cependant son rle est trs peu connu au niveau du tube digestif. OBJECTIFS: Les objectifs sont dvaluer comment la peroxydation lipidique mdie par le fer/ascorbate (FE/ASC) affecte les fonctions mitochondriales dans les cellules Caco-2/15, et de dterminer lampleur de limplication de Nrf2. MTHODES: Le stress oxydant a t induit dans les cellules Caco2/15 en les traitant avec 0.2mm/2mm de FE/ASC. Laugmentation de lexpression de Nrf2 a t obtenue suite au prtraitement des cellules Caco2/15 avec 50 M dOlitpraz (OPZ), un puissant activateur. Linvalidation du gne de Nrf2 a t ralise dans les cellules par transfection avec un vecteur lentiviral contenant un shRNA contre Nrf2. RSULTATS: Nos rsultats montrent que le traitement des cellules Caco-2/15 avec du FE/ASC (0.2 mm/2 mm) augmente les niveaux du malondialdehyde (MDA), rduit la production dATP, entrane une surcharge mitochondriale de calcium, active lexpression protique du cytochrome C et de lAIF (apoptotic inducing factor), rduit lactivit des complexes I, II, 2 III et IV de la chane respiratoire mitochondriale, augmente les niveaux de 8-OHdG, un marqueur des dommages lADN mitochondrial, diminue la DNA glycosylase, et altre les expressions gnique et protique des facteurs de transcription mitochondriaux (mtTFA, mtTFB1, mtTFB2). De plus, nos observations montrent que linduction et lactivation de Nrf2 dans les cellules Caco-2/15 rsultent en: une augmentation des enzymes anti-oxydantes endognes (catalase, glutathion peroxydase, et superoxyde dismutase), une rduction du facteur nuclaire NF et de TNF-, une augmentation de la production d ATP et de lactivit des complexes respiratoires (I, II, III, IV) et de PGC-1, et une rgulation des niveaux de la prohibitine mitochondriale, du Bcl-2 anti-apoptotique et de loccludine. CONCLUSION: Dans lensemble, nos rsultats montrent que lexposition aige des cellules Caco-2/15 la peroxydation par le FE/ASC entrane des effets pathologiques sur les fonctions mitochondriales et lintgrit de lADN, qui sont abolis par linduction de Nrf2. Il en ressort que Nrf2 joue un rle majeur dans la protection de lpithlium intestinal contre le stress oxydant.
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Le virus respiratoire syncytial (RSV) est un virus a ARN de polarite negative. Les etudes demontrent que toute la population sera infectee par ce virus au moins deux fois avant lage de 3 ans. Le RSV peut provoquer plusieurs pathologies respiratoires telles que la bronchiolite aigue et la pneumonie. Les infections severes correlent avec le developpement de lasthme. Lors dune infection virale, les particules du RSV sont detectees par le senseur RIG-I qui induit lactivation des facteurs de transcription NF-B et IRF-3. Respectivement, les facteurs de transcription activeront les reponses inflammatoire et antivirale. Au coeur des pathologies induites par le RSV se trouve une reponse immunitaire mal adaptee. Plus precisement, par lentremise de NF-B, le RSV provoque une production exageree de cytokines et chimiokines qui induisent une reponse inflammatoire demesuree provoquant du dommage tissulaire. Paradoxalement, le RSV est capable dechapper a la reponse antivirale. Ces deux phenomenes sont controles par lentremise des proteines non structurales NS1 et NS2. Le mecanisme delimitant le mode daction de NS1 et NS2 sur la reponse antivirale reste a etre determine. Avec pour objectif delucider comment NS1 et NS2 inhibent la reponse antivirale, nous avons investigue le mecanisme de reconnaissance de lhote vis-a-vis de RSV. Nous demontrerons, pour la premiere fois, que le senseur cytosolique MDA5 est implique dans la reponse antivirale contre le RSV. Nous presenterons des resultats preliminaires qui suggerent que le role de MDA5 est non redondant a RIG-I. A laide dARN interferant dirige contre RIG-I et de transfection de MDA5, nous demontrerons que MDA5 ne contribue pas a la phosphorylation dIRF-3, mais plutot quelle regit la stabilite du facteur de transcription. Nous demontrerons aussi que, contrairement a lhypothese actuelle sur le fonctionnement de NS1 et NS2, linhibition de ces derniers ne provoque pas une augmentation de la cytokine antivirale IFN. Cependant, lexpression ectopique de NS1 et NS2 reduit lactivite du promoteur de lIFN- et de la proteine cytoplasmic antivirale ISG56 lorsquelle est mesuree par essai luciferase.
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La thse comporte deux parties. Dans la premire, constatant, dune part, que les publications de rfrence lgard de la fiction tlvisuelle qubcoise sont rares, et que, dautre part, les tudes tlvisuelles souffrent dun manque penser lesthtique de la fiction, elle avance une approche nouvelle. La fiction tlvisuelle est lobjet dune volution esthtique porte par ses deux dispositifs et scande en trois degrs dexpression. Elle volue dun dispositif o le son prvaut dans le cadre de la tl-audition un autre dispositif o limage prdomine au sein de la tl-vision. La fiction tlvisuelle ralise ce parcours en trois degrs dexpression: du degr zro, la monstration de la parole, nomm la tl-oralit, au second degr, limage nonciative, nomm la tl-visualit, en passant par le premier degr, une oscillation transitoire, nomm la tl-dualit. Elle remdiatise le trajet du cinma de fiction des premiers temps lauteurielit, un demi-sicle plus tard. Dans la seconde partie, la thse applique le modle thorique au corpus tlromanesque. Elle dmontre que la fiction tlvisuelle qubcoise connait une volution du tlroman la srietl, en passant par la tlsrie et par une trilogie pistmique. Au terme du parcours rflexif, une conclusion simpose: le tlromanesque actuel participe de plain-pied ce qui semble tre, depuis le nouveau millnaire, lAge dart de la fiction tlvisuelle.
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L'allergie au lait de vache (ALV) reprsente l'allergie alimentaire la plus frquemment rencontre durant l'enfance. Cette allergie a longtemps t reconnue comme transitoire mais des donnes rcentes rvlent que celle-ci est persistante chez environ 15% des enfants qui en sont touchs durant l'enfance, posant ainsi un risque leur sant. La prsente tude examine 26 enfants avec ALV et 12 enfants contrles recruts au CHU Sainte-Justine durant lhiver 2011-2012. L'objectif tant de comparer la densit minrale osseuse (DMO) et les niveaux sriques de 25(OH)D d'enfants prpubres avec ALV non rsolue un groupe contrle d'enfants avec autres allergies alimentaires, en plus d'valuer les apports en calcium et en vitamine D ainsi que l'adhrence la supplmentation chez cette population. La DMO lombaire (L2-L4) ne diffre pas significativement entre les groupes. Cependant, une faible densit osseuse, caractrise par un score-Z entre -1,0 et -2,0 pour l'ge et le sexe, est dtecte chez plus de 30% des enfants avec ALV et plus de 16% du groupe contrle, sans allergie au lait. Tel qu'attendu, les apports en calcium sont significativement moins levs chez les enfants avec ALV compar au groupe contrle, avec prs de 90% de tous nos participants ne rencontrant pas les besoins pour lge en vitamine D. Plus de la moiti des enfants avec ALV prsentent une concentration de 25(OH)D infrieure 75 nmol/L. Cependant, notre tude n'a dcel aucune diffrence entre les niveaux sriques de 25(OH)D des enfants avec ALV comparativement au groupe contrle. Enfin, l'adhrence la supplmentation est juge adquate chez plus de 75% de notre groupe d'enfants avec ALV, soit 4 journes par semaine, un facteur aussi associ une meilleure atteinte de leurs apports nutritionnels en calcium et en vitamine D. Enfin, ces rsultats soulignent l'importance de suivre la sant osseuse d'enfants avec ALV ainsi qu'avec allergies multiples, qui prsentent un risque de faible densit osseuse. L'intervention nutritionnelle devrait suivre l'adhrence la supplmentation chez les enfants avec ALV non rsolue, afin d'optimiser les apports nutritionnels insuffisants en calcium et en vitamine D
